PROTOCOLO 1

Introducción:
La digestión es un proceso fundamental en el cual los alimentos son descompuestos en
nutrientes que pueden ser absorbidos y utilizados por el cuerpo. El estómago es un
órgano clave en este proceso, y su jugo gástrico es esencial para la digestión de
proteínas. El ácido clorhídrico (HCl) presente en el jugo gástrico desnaturaliza las
proteínas y activa la pepsina, una enzima que hidroliza las proteínas en péptidos más
pequeños. En esta práctica de laboratorio, se estudiará la relación entre la concentración
de HCl presente en el jugo gástrico y la digestión de la proteína compleja albumina de
huevo.
Pregunta de investigación:
¿Cómo afecta la concentración de HCl presente en el jugo gástrico a la digestión de la
proteína compleja albumina de huevo?
Hipótesis:
Se espera que una mayor concentración de HCl en el jugo gástrico conduzca a una
mayor digestión de la proteína de albúmina de huevo.
Materiales:
− Albumina de huevo
− Jugo gástrico artificial
− Disolución comercial de HCl
− Tubos de ensayo (15)
− Pipetas
− Agitador magnético
− Termómetro
− pHímetro
− Agua destilada
− Bicarbonato sódico (NaHCO3)
− Solución de NaOH 0.1 M
− Biuret
Reactivos:
− Ácido clorhídrico (HCl) a diferentes concentraciones
− Solución de bicarbonato sódico (NaHCO3) para preparar el jugo gástrico
artificial
− Solución de NaOH 0.1 M
− Biuret
Procedimiento:
1. Preparación de la solución de jugo gástrico artificial:
a) Disolver 2.0 g de pepsina en 100 mL de agua destilada. Agitar hasta disolución
completa.
b) Añadir 3.0 mL de ácido clorhídrico 0.1 M a 100 mL de solución de pepsina. Agitar
bien.
c) Ajustar el pH a 2.0 con solución de bicarbonato sódico 0.5 M y solución de NaOH
0.1 M. Agitar bien.
2. Preparación de las soluciones de HCl de diferentes concentraciones:
a) Para la solución de HCl 0.1 M: Añadir 8.5 mL de HCl concentrado a 100 mL de agua
destilada. Agitar bien.
b) Para la solución de HCl 0.01 M: Añadir 8.5 mL de solución de HCl 0.1 M a 100 mL
de agua destilada. Agitar bien.
c) Para la solución de HCl 0.001 M: Añadir 8.5 mL de solución de HCl 0.01 M a 100
mL de agua destilada. Agitar bien.
d) Para la solución de HCl 0.0001 M: Añadir 8.5 mL de solución de HCl 0.001 M a 100
mL de agua destilada. Agitar bien.
3. Preparación de las muestras:
a) Pesar 0.5 g de albumina de huevo en un tubo de ensayo.
b) Añadir 2 mL de la solución de jugo gástrico artificial a cada tubo de ensayo.
c) Añadir 2 mL de la solución de HCl de una concentración determinada a cada tubo de
ensayo. Etiquetar cada tubo de ensayo para identificar la concentración de HCl
correspondiente.
4. Incubación de las muestras:
a) Colocar los tubos de ensayo en un agitador magnético a 37°C durante 2 horas.
b) Agitar suavemente los tubos de ensayo cada 30 minutos.
5. Finalización de la digestión:
a) Añadir 1 mL de solución de NaOH 0.1 M a cada tubo de ensayo para detener la
digestión.
b) Añadir 2 mL de agua destilada a cada tubo de ensayo para diluir las muestras.
6. Análisis de los resultados:
a) Medir el pH de cada muestra utilizando un pHímetro y anotar los valores.
b) Realizar un ensayo de biuret para cuantificar la cantidad de proteína digerida en cada
muestra. Para ello, añadir 2 mL de reactivo de biuret a cada muestra y agitar
suavemente. Incubar durante 10 minutos a temperatura ambiente. Leer la absorbancia de
cada muestra a 540 nm utilizando un espectrofotómetro y anotar los valores.
7. Procesamiento de los datos:
a) Calcular la cantidad de proteína digerida en cada muestra utilizando una curva
estándar previamente construida con diferentes concentraciones conocidas de proteína
de huevo.
b) Calcular la eficacia de la digestión en cada muestra dividiendo la cantidad de proteína
digerida por la cantidad inicial de proteína de huevo y multiplicando por 100 para
expresar el resultado como un porcentaje.
c) Graficar la eficacia de la digestión en función de la concentración de HCl utilizada en
cada muestra. Realizar un análisis de regresión para determinar la relación entre la
concentración de HCl y la eficacia de la digestión.
8. Interpretación de los resultados:
a) Analizar los datos obtenidos y determinar si existe una relación significativa entre la
concentración de HCl y la eficacia de la digestión.
b) Comparar los resultados obtenidos con la hipótesis planteada inicialmente y discutir
si se acepta o se rechaza la hipótesis.
c) Realizar una discusión sobre los posibles factores que pueden influir en la eficacia de
la digestión y proponer futuras líneas de investigación para profundizar en el tema.

PROTOCOLO 2
Introducción:
La digestión es un proceso fundamental en el cual los alimentos son descompuestos en
nutrientes que pueden ser absorbidos y utilizados por el cuerpo. El estómago es un
órgano clave en este proceso, y su jugo gástrico es esencial para la digestión de
proteínas. El ácido clorhídrico (HCl) presente en el jugo gástrico desnaturaliza las
proteínas y activa la pepsina, una enzima que hidroliza las proteínas en péptidos más
pequeños. En esta práctica de laboratorio, se estudiará la relación entre la concentración
de HCl presente en el jugo gástrico y la digestión de la proteína compleja albumina de
huevo. La albumina de huevo es una proteína que se encuentra en la clara de huevo y se
utiliza como modelo para estudiar la digestión de proteínas en el estómago.

Pregunta de investigación:
¿Cómo afecta la concentración de HCl presente en el jugo gástrico a la digestión de la
proteína compleja albumina de huevo? Se medirá la digestión de la proteína por
espectrofotometría midiendo la absorbancia de las muestras después de la incubación
con diferentes concentraciones de HCl.

Hipótesis:
Se espera que una mayor concentración de HCl en el jugo gástrico conduzca a una
mayor digestión de la proteína de albúmina de huevo. Esto se debe a que una mayor
concentración de HCl desnaturaliza y rompe enlaces de proteínas más efectivamente, lo
que facilita la acción de la pepsina y acelera la digestión de la proteína.

Materiales:
− Albumina de huevo
− Jugo gástrico artificial
− Disolución comercial de HCl
− Tubos de ensayo (15)
− Pipetas
− Agitador magnético
− Termómetro
− pHímetro
− Agua destilada
− Bicarbonato sódico (NaHCO3)
− Solución de NaOH 0.1 M
− Biuret

Reactivos:
− Ácido clorhídrico (HCl) a diferentes concentraciones (0.1 M, 0.01 M, 0.001 M,
0.0001 M)
− Solución de bicarbonato sódico (NaHCO3) 0.5 M para preparar el jugo gástrico
artificial
− Solución de NaOH 0.1 M
− Biuret

Procedimiento:

Preparación de la solución de jugo gástrico artificial:

a) Disolver 2.0 g de pepsina en 100 mL de agua destilada. Agitar hasta disolución
completa.
b) Añadir 3.0 mL de ácido clorhídrico 0.1 M a 100 mL de solución de pepsina. Agitar
bien.
c) Ajustar el pH a 2.0 con solución de bicarbonato sódico 0.5 M y solución de NaOH
0.1 M. Agitar bien.

Preparación de las soluciones de HCl de diferentes concentraciones:

a) Para la solución de HCl 0.1 M: Añadir 10 mL de HCl concentrado a un matraz
volumétrico de 100 mL y completar hasta la marca de 100 mL con agua destilada.
b) Para la solución de HCl 0.01 M: Tomar 10 mL de la solución de HCl 0.1 M y diluir
en un matraz volumétrico de 100 mL con agua destilada hasta la marca de 100 mL.
c) Para la solución de HCl 0.001 M: Tomar 10 mL de la solución de HCl 0.01 M y diluir
en un matraz volumétrico de 100 mL con agua destilada hasta la marca de 100 mL.
d) Para la solución de HCl 0.0001 M: Tomar 10 mL de la solución de HCl 0.001 M y
diluir en un matraz volumétrico de 100 mL con agua destilada hasta la marca de 100
mL.

Preparación de las muestras:

a) Preparar una solución de albumina de huevo al 1% (p/v) disolviendo 1 g de albumina
en 100 mL de agua destilada.
b) Preparar cuatro tubos de ensayo, cada uno con 2 mL de solución de albumina de
huevo al 1% (p/v).
c) Añadir a cada tubo de ensayo 1 mL de solución de jugo gástrico artificial y 1 mL de
solución de HCl a diferentes concentraciones (0.1 M, 0.01 M, 0.001 M, 0.0001 M).
d) Agitar suavemente cada tubo de ensayo y colocarlos en un agitador magnético a 37°C
durante 1 hora.

Medición de la digestión de la proteína:

a) Después de 1 hora, retirar los tubos de ensayo del agitador magnético y centrifugar a
5000 rpm durante 5 minutos.
b) Tomar 200 µL de la solución sobrenadante de cada tubo de ensayo y colocarlas en
una placa de 96 pozos.
c) Añadir 50 µL de solución de Biuret a cada pozo.
d) Incubar la placa a temperatura ambiente durante 10 minutos.
e) Medir la absorbancia de cada pozo a 540 nm utilizando un espectrofotómetro.
f) Calcular la concentración de proteína en cada muestra utilizando una curva de
calibración de albumina de huevo.
g) Comparar las concentraciones de proteína digerida en cada muestra y analizar la
relación entre la concentración de HCl y la digestión de proteínas.

Análisis de datos:
a) Calcular la concentración de proteína en cada muestra utilizando una curva de
calibración de albumina de huevo.
b) Calcular la digestión de proteínas como la diferencia entre la concentración de
proteína en la muestra y la concentración de proteína en la muestra control (sin HCl).
c) Graficar la digestión de proteínas en función de la concentración de HCl.
d) Analizar los resultados y determinar si la hipótesis se acepta o se rechaza.