Práctica 3: Producción de ácido pirúvico durante la fermentación de la glucosa por

levadura.
Isabela Garcia Huergo, Jenyfer Hernàndez, Javier Àvila Cedillo, Oscar Barrera Barron.
Asignatura: Procesos metabólicos
Lic. QFBT
Periodo 2023 -2024
Fecha de entrega: 12 Marzo 2023
Docente: Luis Antonio Calderón Cortés

RESUMEN
En esta práctica lo que se buscó fue identificar el piruvato en diferentes sustancias de glucosa.
Realizamos soluciones de glucosa con concentraciones de 0.5, 1 y 2% y posteriormente las
separamos en 2 series; a la primera serie se le agregó una suspensión de levadura con fosfatos
de sodio y se le marcó como A, y a la segunda se le agregó una suspensión de fosfatos de
potasio y se marcó como B, posteriormente agregamos ácido tricloroacético, mezclamos y las
mandamos a centrifugar, separamos los sobrenadantes en 2 alícuotas para realizar 2
diferentes experimentos. Realizamos el primer experimento con nitroprusiato de sodio y el
segundo experimento con 2,4-dinitrofenil-hidracina.

PALABRAS CLAVES: Fermentación, ácido pirúvico, glucólisis, respiración celular.

INTRODUCCIÓN pueden ser, en condiciones anaerobias o

Al final de la glucólisis quedan dos
moléculas de piruvato y el siguiente paso
para seguir recolectando ATP es la
oxidación de este; en organismos
eucariontes sucede en la mitocondria,
mientras que en procariontes sucede en el
citoplasma. Durante la oxidación del
piruvato, este se convierte en un
acetil-CoA y produce una enzima de
NADH y una de CO2. El acetil-CoA
funciona como un combustible en la
siguiente etapa de la respiración celular.
Si hay oxígeno el piruvato se podrá oxidar
yasí obtener más moléculas de ATP. Pero
el piruvato tendrá otros destinos, que
aerobias
A las anaerobias se les llama
fermentaciones y existen diferentes tipos:
La fermentación es la degradación de
glucosa en ausencia de oxígeno; esta va de
las reacciones glucolíticas y otras
reacciones de reducción finales. Existen
organismos que reducen el piruvato a
lactato y de esta forma pueden regenerar el
NAD+ necesario para continuar la
glucólisis.
De igual manera existen organismos que
transforman el piruvato hasta etanol por
medio de la descarboxilación y reducción.
La reducción permite a las células
recuperar el NAD+ necesario para la
glucólisis.
Por otra parte, a las aerobias se les llama
descarboxilación oxidativa; las células que
metabolizan en condiciones aeróbicas no
necesitan reducir el NADH para poder
continuar la glucólisis ya que, gracias a los
e- que descargan en la cadena respiratoria
mitocondrial, las cèlulas pueden disponer
de NAD+ para continuar la glucólisis. Es
así que el piruvato entra a la mitocondria y
se descarboxila y oxida.
PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA
Queremos identificar el piruvato a partir
del proceso de glucólisis en la levadura
mediante las pruebas de nitroprusiato de
sodio y 2,4.dinitrofenil-hidracina.
JUSTIFICACIÓN
La relevancia de este experimento fue
conocer el ácido pirúvico de la
fermentación de la glucosa
OBJETIVOS
a) Demuestra la formación de ácido
pirúvico durante la fermentación de la
glucosa por la levadura.
b) identifica el ácido pirúvico producido a
partir de glucosa.
HIPÓTESIS
1- Si la reacción con nitroprusiato de sodio
se pinta de color azul o verde, entonces
podremos identificar la presencia de
piruvato.
2- Si en la reacción de
dinitrofenil-hidracina aparece un color
rojizo, entonces podremos identificar la
presencia de piruvato.
MÉTODO
1.- FORMACIÓN DE PIRUVATO:
Marcamos dos series de 3 tubos,
agregamos 3 ml de glucosa con estas
concentraciones (0.5, 1.0 y 2.0%) en
ambas series
2.- A una de las series le agregamos 3 ml
de levadura de fosfato de sodio y a la otra
serie le agregamos 3 ml de levadura de
fosfato de potasio
3.- Sometemos los tubos en baño maría a
una temperatura de 30ºC por 30 min,
después de transcurrir el tiempo añadimos
a cada tubo 1 ml de ácido tricloroacético al
10%, lo mezclamos y centrifugamos a
2500 rpm por 10 min
4.- De cada tubo separamos 2 alícuotas de
1 ml de sobrenadante en tubos nuevos, las
utilizamos para la prueba del piruvato
5.- IDENTIFICACIÓN DEL PIRUVATO:
Para la reacción con nitroprusiato de sodio,
tomamos una de las alícuotas le agregamos
0.5gr de sulfato de amonio de sodio y
agitamos
6.- Agregamos 2 gotas de nitroprusiato de
sodio y mezclamos de manera vigorosa,
por la pared interna del tubo también
agregamos unas gotas de hidróxido de
amonio concentrado este no lo mezclamos,
la formación de un anillo azul o verde nos
indica prueba positiva en la interfase
7.- Para la reacción con
2,4-Dinitrofenil-Hidracina, tomamos la
segunda alícuota y agregamos 1 ml de
dinitrofenil-hidracina y agitamos
8.- Separamos la mitad de la muestra en un
tubo nuevo le agregamos 1 ml de NaOH
0.1 N, si en este aparece un color rojo nos
indicará que la prueba es positiva
RESULTADOS
fig1. series de tubos marcados A y B con fosfatos.

fig2. sobrenadante de levaduras.
fig3. prueba con nitroprusiato de sodio.
fig4. resultados prueba con nitroprusiato de sodio.
fig5. resultado con prueba 2,4-dinitrofenil-hidracina
ANÁLISIS DE RESULTADOS
Como ya se mencionó, en las pruebas
debieron haber resultado tanto un color
verde o azul para la primera prueba, como
un color rojizo para la segunda, sin
embargo esto solo se cumplió en la
primera prueba. El experimento se hizo de
manera correcta, sin embargo por falta de
tiempo no pudimos realizarlo en una sola
sesión y tuvimos que guardar nuestros
tubos por una semana dentro de la
campana de extracción; aunque cubrimos
nuestros tubos con parafilm, pensamos que
no fue suficiente para preservar
correctamente nuestras muestras y por esta
razón no pudimos observar el cambio al
momento de realizar una de las pruebas.
Sin embargo, en la reacción con el
nitroprusiato de sodio y el ácido pirúvico
hay una formación de ferropentacianuro,
un compuesto de color azul violeta que nos
indica una prueba positiva. En el tubo de
ensayo se formó un anillo de color violeta
correspondiente al compuesto.
CONCLUSIONES
Pudimos comprobar únicamente la primera
hipótesis ya que se formó un anillo
(aunque de color más morado que azul) en
la superficie al momento de agregar el
Hodróxido de amonio.
Nuestra segunda hipótesis no pudo ser
comprobada ya que al agregar el NaOH no
hubo cambio en el color de nuestras
muestras.
REFERENCIAS
UNAM. (2012) El piruvato y la
fermentación .Portal académico CCH. El
piruvato y la fermentación | Portal
Académico del CCH (unam.mx)
La oxidación del piruvato (artículo). (s. f.).
Khan Academy. Recuperado el 14 de
febrero del 2023, de:

https://es.khanacademy.org/science/biol

ogy/cellular-respiration-and-fermentatio

n/pyruvate-oxidation-and-the-citric-acid

-cycle/a/pyruvate-oxidation

Trudy McKee, James R.McKee. (2003).

Bioquímica, la base molecular de la vida.

Tercera edición. McGraw Hill. Recuperado

el 15 de febrero de 2023.