UNIVERSIDAD CENTRAL DEL ECUADOR

FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICAS

CENTRO DE BIOLOGÍA

LABORATORIO DE BIOLOGÍA CELULAR

INTEGRANTES: PUMA SOLORZANO ARIEL ALEXANDER
RIOFRIO BALSECA JEFERSON AGUSTIN
ROBALINO PAZMIÑO EVELYN TATIANA
RON PAVÓN DANIELA LUCÍA
SALAZAR GUAMÁN NELLY CAMILA
SÁNCHEZ CADENA FRANCIELI NIKOLE
DOCENTE: MARINA GUADALUPE JIBAJA
TÉCNICO DEL CENTRO DE BIOLOGÍA:
PARALELO: 1
GRUPO: H
PRACTICA No 8 FECHA: 21/08/2022

TEMA:
1. OBJETIVOS:
Analizar las diferentes enzimas que se utilizarán en la práctica, a través de
la manipulación adecuada con el fin de complementar la teoría explicada.
Observar las reacciones y los resultados que se producen al aplicar
diferentes procesos de desnaturalización de las enzimas de las muestras
usadas, con el fin de apreciar como estas se degradan.
Interpretar los resultados de la manipulación de las enzimas de la práctica,
con el fin de conocer el motivo y la razón de lo que se obtuvo en las
fotografías.

2. PARTE EXPERIMENTAL
a. Materiales y Equipos
- Tubos de ensayo
- Bisturí
- Caja Petri
- Termómetro A± 1 [°C], rango 0 [°C] a +37 [°C]
- Pipeta Pasteur
- Mortero con pistilo
- Fuente de calor

b. Sustancias y Reactivos
Incluir la fórmula molecular y el estado de agregación cuando sea posible.
Fórmula Molecular
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Amilasa salival
Reactivo de Bénedit
Reactivo Lugol
Peróxido de oxígeno H2O2 (l)
Sacarosa C12H22O11 (s)
Sacarasa
Comprimido (digestotal Forte)
Almidón (C6H10O5)n + (H2O)
Hígado
Manzana
Perejil
c. Procedimiento
1. Tubo 1
- En un tubo de ensayo colocar 2 mL de almidón, en el mismo tubo
colocar 2mL de amilasa salival.
- Colocar el tubo de ensayo en una fuente de calor por 20 minutos a unos
37°C.
- Una vez esperado el trascurso de tiempo separamos la sustancia en 2
tubos de ensayo.
Figura 1
Amilasa salival

Nota. Con la ayuda de la pipeta pasteur recogemos la amilasa salival.

Tubo 1.1
- Colocar 10 gotas del reactivo de Bénedit en uno de los tubos que
contenga la sustancia.
- Rotular el tubo.
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- Llevar el tubo a ebullición de 5 a 10 minutos. Observar los resultados

Tubo 1.2
- En el otro tubo de la sustancia colocar el reactivo de Lugol.
- Rotular el tubo y observar el resultado.
2. Tubo 2
- Con la ayuda de una pipeta de Pasteur coger la amilasa salival, colocar
en un tubo de ensayo colocar 2mL.
- Rotular el tubo de ensayo y llevar a ebullición por 10 minutos
- Sacar el tubo y colocar 2 mL de almidón, llevar al tubo a una fuente de
calor de 37° por 20 minutos.
- Separar la sustancia en 2 tubos de ensayo
Tubo 2.1
- En un tubo de ensayo que contenga la sustancia colocar el reactivo de
Bénedit y rotular el tubo.
- Llevar el tubo a ebullición por unos 5 a 10 minutos aproximadamente.
- Observar los resultados.
Figura 2
Tubo de ensayo a ebullición.

Nota. EL tubo de ensayo 2.1 con el reactivo de Bénedit le llevamos a ebullición.

Tubo 2.2
- En el otro tubo de ensayo con la sustancia colocar el reactivo de Lugol.
- Rotular el tubo y observar los resultados.
3. Tubo 3
- Triturar el comprimido (Digestotal Forte) con la ayuda de un mortero y
pistilo.
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- Colocar el almidón en el tubo de ensayo unos 2 mL, también colocar el

comprimido triturado más o menos la mitad.
- Llevar el tubo de ensayo a una fuente de calor durante 20 minutos a una
temperatura de 37°C.
- Separar la sustancia en 2 tubos de ensayo.
Figura 3
Tubo de ensayo al calor.

Nota. El tubo número 3 le llevamos a una fuente de calor que se encuentre a

37°C.
Tubo 3.1
- En un tubo de ensayo con la sustancia colocar unas 10 gotas de reactivo
Bénedit y rotular el tubo.
- Llevar a ebullición el tubo por unos 5 a 10 minutos y observar los
resultados.
Tubo 3.2
- En el otro tubo con la sustancia colocar el reactivo de Lugol.
- Rotular el tubo y observar los resultados.
4. Tubo 4
- Con la ayuda de una pipeta de pasteur coger la sacarosa y colocar en el
tubo de ensayo 2 mL, realizamos lo mismo con la sacarasa.
- El tubo de ensayo con la sustancia llevar a una fuente de calor por 20
minutos a unos 37°C.
- Separar la sustancia en 2 tubos de ensayo.
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Tubo 4.1
- En un tubo de ensayo con la sustancia colocar el reactivo de Bénedict y
rotular el tubo.
- Llevarlo al ebullición por unos 5 a 10 minutos aproximadamente y
observar los resultados.
Figura 4
Rotular el tubo de ensayo.

Nota. Rotulamos el tubo de ensayo para no confundirnos de sustancias.

Experimento A- Catalasa
- Con la ayuda de un bisturí cortar el hígado y colocarlo en una caja Petri.
- Añadir 10 gotas de peróxido de hidrógeno en el hígado.
- Observar los resultados.
A.1
- Colocar el hígado cortado en un tubo de ensayo, rotular el tubo y llevarlo a
ebullición por unos 10 minutos.
- Agregar 10 gotas de peróxido de hidrógeno y observar los resultados.
Experimento B - Peroxidasa
- Con un bisturí cortar la manzana y colocar en la caja Petri.
- Agregar peróxido de hidrógeno en la manzana
- Observar los resultados.
Figura 5
Manzana en la caja Petri.
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Nota. Cuando acabamos de cortar la manzana se procede a colocar en la caja

Petri.
B. 1
- Cortar unas hojas de perejil y colocar en la caja Petri.
- Agregar peróxido de hidrógeno en el perejil.
- Observar los resultados

3. PROCESAMIENTO DE DATOS

a. Observaciones y Resultados
 Imágenes Observaciones y resultados

1. Acción de la enzima amilasa

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observa que la muestra, tras
1.1. Acción de la enzima amilasaDE CIENCIAShaberse
FACULTAD QUÍMICASrealizado una prueba de
1.1.1. Prueba de Bénedict CENTRO DE BIOLOGÍA Bénedict se torna de un color verde,
lo que indica un positivo para la
Figura 6 prueba, revelando la presencia de
Muestra de almidón con amilasa salival tratada azúcares reductores que por el
en temperatura óptima en prueba con reactivo contenido de la muestra se puede
de Bénedict intuir que son moléculas de glucosa
indicando la acción catalítica de la
enzima sobre el almidón.

1.1.2. Prueba de Lugol Se observa que, al añadir Lugol, el

color de la muestra no cambió hacia
Figura 7 un positivo para la prueba, lo que
indica la ausencia de almidón, por
Muestra de almidón con amilasa salival tratada tanto, una correcta acción de la
en temperatura óptima en prueba de Lugol enzima.

1.1.3. Prueba de Lugol Al realizar la prueba, se observó la

formación en el fondo de un tubo de
Figura 8 un precipitado de color azul
negruzco, positivo para la prueba e
Muestra de almidón con amilasa salival llevada indicativo de presencia de almidón,
a ebullición en prueba de Lugol por tanto, de la activación de la
proteína.
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4. DISCUSIÓN
En la primera muestra se agregó 2ml de almidón y 2 ml de amilasa salival y se
llevó a una temperatura de 37°C por el tiempo de 20 minutos, después se
separó la muestra en dos tubos donde se aplicó la prueba cualitativa, la
primera prueba fue de Bénedict y el resultado dio positivo porque identifico la
presencia de azucares reductores, en el segundo tubo donde la prueba fue de
Lugol dio como resultado negativo tornándose de un color azul, esto se debe a
que el Lugol en presencia de almidón cambia de color. Por lo tanto, la amilasa
fue desnaturalizada. Los resultados obtenidos están acordes a una práctica de
la Universidad Nacional José Faustino Sánchez Carrión en la Facultad de
Ingeniería Agraria, Industrias alimentarias y ambiental (2014).
Sugerir antes de la práctica hacerlo con rapidez ya que es un procedimiento un
poco largo y no tiene mucho tiempo para repetirlo de nuevo.
Figura 16

Nota. Adaptado de Universidad Nacional José Faustino Sánchez Carrión

(2014). Almidón por la amilasa salival
https://es.slideshare.net/lizbethdamazogalvez/hidrlisis-del-almidn-por-la-
amilasa-salival

En el caso de la segunda muestra de saliva, se llevó a ebullición por 10

minutos, luego se agregó 2 ml de almidón y se llevó a una temperatura de 37°C
por 20 minutos. Para luego separar la muestra y aplicar dos pruebas
cualitativas; la primera fue la prueba de Bénedict en donde el resultado fue
negativo ya que la actividad enzimática de la amilasa se interrumpió debido a
que la muestra fue sometida a altas temperaturas. Por otro lado, en la prueba
del Lugol la muestra mostró un resultado positivo ya que la amilasa al no
cumplir su función hace que el almidón siga presente en la muestra. Estos
resultados son comparables a los resultados obtenidos en la Universidad
Manuela Beltrán (2020).
Figura 17
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Nota. Adaptado de Laboratorio de química UMB (2020). Actividad enzimática

Amilasa. https://youtu.be/JE-APrv-mM4
Por otro lado, para las muestras analizadas con enzimas digestivas
comerciales, la enzima comercial elegida fue DIGESTOTAL FORTE, una
cápsula con tres tabletas, una marrón que contenía pepsina, una naranja que
contenía amilasa y una blanca que contenía lipasa y celulasa, el contenido de
la tableta naranja indica el porqué de los resultados obtenidos en la muestra de
almidón que contenía la cápsula y fue tratada en una temperatura óptima,
puesto que la amilasa presente rompió los enlaces glucosídicos del almidón y
permitió la formación de glucosa como monosacárido reductor, lo que explica el
positivo para Bénedcit de la muestra y el negativo de la prueba de Lugol, no se
encontraron prácticas similares, puesto que la mayoría se enfocaban en el uso
de amilasas salivales, sin embargo, en una práctica realizada por la
Universidad Nacional de Educación (2017) en la Facultad de Agropecuaria y
Nutrición, se usó un tipo de enzimas comerciales similar llamadas Digestal, que
también poseen amilasas en su composición, el procedimiento en esta fue
poner avena, agua y la cápsula con la enzima, esperar unos minutos y verificar
la acción de la enzima comparando con un tubo testigo donde solo se ubicó
agua y avena, la acción era reflejada en dilución hallada en el tubo con las
enzimas frente a la compactación que ocurría en el otro tubo, como se observa
en la Figura _, esta práctica podría ser replicada en los laboratorios de la
Universidad Central del Ecuador, en caso de necesitar que la práctica sea
corta, puesto que en su realización se toma alrededor de 8 minutos, frente a los
20 minutos mínimos que se necesitan para la práctica realizada en el
laboratorio.

Figura 18
Resultados de práctica de la muestra tratada con enzimas comerciales
(izquierda) y la muestra testigo (derecha) en la Universidad Nacional de
Educación
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Nota. Adaptado de Universidad Nacional de Educación (2017). Práctica como

funcionan las enzimas digestivas. https://www.youtube.com/watch?
v=i7uyl_FGFvA

Para el segundo ensayo realizado con las enzimas comerciales, llevadas a

ebullición, su falta de acción es justificada por las elevadas temperaturas en las
que se encontró, siendo la temperatura de ebullición del agua los 100 °C y la
temperatura de su desnaturalización 60 °C, en prácticas similares como la
llevada a cabo en la Universidad de Nariño por Zambrano J. (2016) para la
desnaturalización de las enzimas se usó ácido acético para variar el pH,
aunque ninguna de las dos demuestra una superioridad sobre la otra, aplicar
ambas sirve para indicar al estudiante de manera didáctica las distintas formas
en las que se desnaturalizan este tipo de moléculas y su actividad.

En el caso del hígado de pollo, teníamos que hacer dos procedimientos con el
fin de observar la presencia de la enzima catalasa, para el hígado troceado
colocado en una caja Petri más la adición de 10 gotas de agua oxigenada
(H2O2) se produjo un burbujeo al primer contacto, siendo afirmativa la
presencia de la enzima, por otro lado para el hígado de pollo que se cocinó se
realizó el mismo proceso anterior explicado, donde el resultado fue negativo a
la presencia de la enzima, esto se da por el mismo hecho de la cocción ya que
a altas temperaturas las proteínas se desnaturalizan, por este hecho al
contacto con el agua oxigenada no se observó ningún tipo de burbujeo, o dicho
de otra manera el uso del hígado de pollo con la enzima catalasa para que esta
enzima separe el oxígeno del agua, lo que causa gas-oxígeno y, que se
presenta en forma de burbujeo. Cumpliendo la enzima catalasa la función de
romper el peróxido de hidrógeno y separar el oxígeno del agua, dejando el
oxígeno liberado. “Practicidad de las enzimas en las bionecesidades de la
sociedad contemporánea (Aquino et al.,2016)”
Al realizar la parte del perejil más las gotas de agua oxigenada se apreció de
forma errónea la presencia de peroxidasa al principio, debido a que se colocó
una porción de gran tamaño del perejil, sin embargo, al aplicar la técnica de
reducción (triturar) se pudo observar como el agua oxigenada produjo la
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reacción esperada correctamente; mientras que en el caso de los pequeños de

trozos de manzana se tuvo que esperar varios minutos para que la reacción
produzca la apreciación de la enzima.
Figura 19 Figura 20

Presencia de la peroxidasa Presencia de la peroxidasa

Nota. Imagen de la muestra Nota. Imagen de la muestra del

del Petroselinum crispum. Malus doméstica.

Al momento de realizar la práctica del tubo número 4 se utilizó un método

cualitativo ya que al momento de colocar el reactivo de bénedit y llevar a la
ebullición por unos 5 minutos, se puedo observar que cambió el color de la
sustancia, lo que quiere decir que nuestro resultado fue positivo porque nos dio
un color amarillo intenso, es decir que en nuestro proceso se pudo comprobar
que hubo una acción de la enzima sacarasa ya que nos dio un azúcar. Al
momento de comparar los resultados con Ángel Serna, et al. (2021), se pudo
observar que obtuvieron el mismo resultado que nuestra práctica, lo que quiere
decir que los pasos se realizaron de la forma correcta. Sin embargo, al
momento de realizar los pasos hubo un incidente ya que se rego la sustancia y
tuvimos que volver hacer de nuevo todos los pasos, a pesar de esto se pudo
concluir con éxito la práctica, como sugerencia para la próxima práctica sería
de que se tenga más cuidado con las sustancias.
Figura 21
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Práctica con la enzima sacarasa

Nota. Adaptado de Facultad de Ciencias de la Salud y Alimentos (2021).

Laboratorio de bioquímica II Practica 5 Determinación de la enzima sacarasa.
https://www.youtube.com/watch?v=2LLWpVmra4s

5. CONCLUSIONES

- Con la respectiva introducción al tema, se identificó la presencia de los

distintas enzimas presentes en las muestras con las que se trabajó.
- Se demostró en el caso del hígado de pollo uno de los factores que
afectan al rendimiento de la enzima, en este caso la temperatura a la
que se llevó esta enzima para que llegue a desnaturalizarse, y no llegue
a generarse el burbujeo que nos demuestra su presencia.
- Con las distintas muestras y respectivas enzimas, se observó con los
identificadores la ruptura de los componentes de las proteínas, algunos
como la glucosa, en el caso de la amilasa salival.
-
6. CUESTIONARIO

1. ¿Cuál es la importancia biológica de las enzimas?

Pueden ayudar a descomponer los alimentos que consumimos para que
el cuerpo los pueda usar. La coagulación de la sangre es otro ejemplo
del trabajo de las enzimas (MedilinePlus, 2021).
2. Las enzimas actúan reduciendo la energía de activación de una
reacción. Describa ¿cómo sucede esto?
Algunas enzimas disminuyen la energía de activación al tomar parte en
las reacciones químicas. Esto quiere decir que los residuos del sitio
activo pueden formar enlaces covalentes temporales con las moléculas
del sustrato como parte del proceso de reacción (Khan Academy, 2008)
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3. ¿Cuáles son los factores que afectan la acción enzimática en una

reacción química, describa cada una de ellas?

Los factores que afectan la acción enzimática en una reacción química

son: La temperatura, el pH y la concentración.

 Temperatura: El aumento de temperatura generalmente resulta

en la aceleración de la temperatura; por el contrario, bajar la
temperatura disminuye la velocidad de la reacción. Sin embargo,
someter a temperaturas extremas resulta en la desnaturalización
de la proteína. (Khan Academy, 2019)
 pH: Cada enzima presenta un rango de pH óptimo para que se
genera una reacción, el disminuir o aumentar este factor la
reacción es más lenta y la proteína puede desnaturalizarse.
 Concentración: Si se aumenta la concentración del sustrato la
velocidad de la reacción aumenta hasta que las enzimas se
saturen. Así mismo, si se aumenta la concentración de enzimas la
reacción se acelera hasta que cada enzima se adhiera a un
sustrato, luego de esto la reacción deja de acelerarse.

4. ¿Cite algunos ejemplos de la acción enzimática, y como la tecnología ha

logrado controlar estos procesos?

Algunos ejemplos de acción enzimática son:

 Gastrina: Su función es estimular la función gástrica mediante la
producción y secreción de ácido clorhídrico.
 Quimosina: Su función es ayudar en la coagulación de las
proteínas de la leche involucrándose en la producción de queso.
 Lipasa: Su función es catalizar reacciones que ayudan a la
separación de grasas en el organismo para que el organismo las
absorba de mejor manera.
 Pepsina: Su función es producir péptidos y aminoácidos en el
estómago y necesitan un medio ácido para reaccionar.
Mediante la tecnología se ha logrado identificar distintas enzimas y sus
funciones, de esta forma se han potenciado industrias, principalmente la
industria alimenticia, farmacéutica, médica y de limpieza; ya que, al
conocer como actúa cada enzima se puede controlar su rango de
funcionalidad en base a lo que un consumidor lo requiera. Es decir, cada
enzima solo cataliza una reacción por lo que existen tantas enzimas
como reacciones necesarias. (BIOLAN Health, 2021)
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5. ¿Explique cuál es el fundamento científico de suavizar una proteína a

través de los llamados ablandadores de carne?
Existen muchos tipos de ablandadores de carnes, como: herramientas
mecánicas, ablandadores alternativos que podrían ser ácidos, y los
ablandadores enzimáticos de los vamos a profundizar, en las carnes están
presentes enzimas proteolíticas que reciben el nombre de proteasas, que son
las que actúan para romper enlaces peptídicos de los aminoácidos de esta
proteína compleja como es la carne, uno de los principales completos de
proteína que tienen unida a la carne es el colágeno. Existen algunos tipos de
ablandadores enzimáticos muy conocidos que son la bromelina a base de pina,
papaína a base de papaya, actinidina a partir del kiwi, y la ficina proveniente del
higo, todos estos en presentaciones solidas (polvo) que en minutos pueden
suavizar las carnes, pero al dejar reposar se obtienen mejores resultados.
(Spiegato, 2021)

7. BIBLIOGRAFÍA
Aquino V, L., Peralta E, M., & Ramírez S, A. (2016). Practicidad de las enzimas

en la bionecesidad de la sociedad contemporánea.

https://vinculacion.dgire.unam.mx/vinculacion-1/Memoria-Congreso-

2016/trabajos-ciencias-biologicas/biologia/6.pdf

Almeyda, H. (2017). Práctica como funcionan las enzimas digestivas. Retrieved

from https://www.youtube.com/watch?v=i7uyl_FGFvA

BIOLAN Health, (2021). Mecanismos de acción de las enzimas.

https://biolanhealth.com/mecanismos-de-accion-de-las-enzimas/

Khan Academy. (2018). Las enzimas y el sitio activo (artículo).

https://es.khanacademy.org/science/ap-biology/cellular-energetics/

enzyme-structure-and-catalysis/a/enzymes-and-the-active-site#:

%7E:text=Finalmente%2C%20algunas%20enzimas%20disminuyen

%20la,parte%20del%20proceso%20de%20reacci%C3%B3n.
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Khan Academy. (2019). Repaso de enzimas.

https://es.khanacademy.org/science/ap-biology/cellular-energetics/

environmental-impacts-on-enzyme-function/a/hs-enzymes-

review#:~:text=La%20actividad%20enzim%C3%A1tica%20puede

%20verse,de%20unirse%20a%20un%20sustrato.

MedilinePlus. (2021). Enzima.

https://medlineplus.gov/spanish/ency/article/002353.htm#:%7E:text=Las

%20enzimas%20son%20prote%C3%ADnas%20complejas,del

%20trabajo%20de%20las%20enzimas.

‌Spiegato. ¿Cómo funcionan los ablandadores de carne? - Spiegato. (2021,

July 13). Spiegato. https://spiegato.com/es/como-funcionan-los-

ablandadores-de-carne

‌
BIBLIOGRAPHY Almeyda, H. (2017). Práctica como funcionan las enzimas digestivas. Obtenido
de https://www.youtube.com/watch?v=i7uyl_FGFvA

Zambrano, J. (2016). Propiedades de proteínas y desnaturalización. Universidad de Nariño.

Obtenido de
https://www.studocu.com/co/document/universidad-de-narino/bioquimica/practica-
no2-desnaturalizacion-de-proteinas/10315295

8. ANEXOS
Figura 22

Fotografía de la práctica
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Figura 23

Fotografía de la práctica

Figura 24

Fotografía de los tubos ensayos completados de la práctica