Estructura de Ácidos Nucleicos

DOGMA CENTRAL DE LA
BIOLOGÍA MOLECULAR
 1. Descubrimiento de los ácidos nucleicos
• 1868 Friedrich Miescher (núcleo de células purulentas:
leucocitos)
• Separación memb. Cel y citoplasma para aislamiento de
núcleo (alcohol caliente y pepsina enzimática)
• Sustancia conteniendo fósforo (nucleína)

• nucleína ácido nucleico

• carga información genética?????
 Características de los ácidos nucleicos
• Descubiertas de P.A. Levene (bioquímico, 1920´s)

1. Composición: bases nitrogenadas: citosina y timina

(pirimidinas), adenina y guanina (purinas); el azúcar
desoxirribosa; y un grupo fosfato.
2. Demostró unión en el orden fosfato-azúcar-base,
(nucleótido).
3. Sugirió que los nucleótidos se encontraban unidos por
los fosfatos formando el ADN.
4. Levene, pensó que se trataban de cadenas cortas y que
las bases se repetían en un orden determinado.
5. Proporción 25:25:25:25
 Cromosomas material de herencia

Compuesto por ácido

nucleico y proteína
 2. Experimentos para demostrar que el DNA
es el material genético
1944 Avery, MacLeod and McCarty repiten los experimentos de Griffith’s 1928
con modificaciones y para descubrir “El factor transformante” (neumococo
cepas virulentas y no virulentas)
Proteínas: material genético?
Ácidos nucleicos?

Enzyme Transformation?
Protease Yes
Saccharase Yes
Nuclease No
1952 Martha Chase y Alfred Hershey: isótopos radioactivos para
marcar el ADN, seguimiento de estas moléculas durante la infección de E.
coli por el fago T2

FAGOS
(virus de bacterias)
• Pequeñas moléculas de DNA o RNA
• Con cápside proteica en la forma libre
• Sin cápside dentro de las bacterias
• Autorreplicativas: Se multiplican
dentro de las bacterias
Using S35T2 grown in S 35 Bacteria grown in
containing media normal non-
incorporate S35 radioactive media
into their proteins

T2 attach to bacteria and When centrifuged,

inject genetic material phage protein coats
remain in the
supernatant while
bacteria form a pellet

The supernatant is
radioactive, but the
pellet is not.

Did protein enter the bacteria?

Blending causes phage Is protein the genetic material?
protein coat to fall off
Using P32 Bacteria grown in
T2 grown in P32
containing media normal non-
incorporate P32 radioactive media
into their DNA

T2 attach to bacteria and When centrifuged,

inject genetic material phage protein coats
remain in the
supernatant while
bacteria form a pellet

The pellet is
radioactive, but the
supernatant is not.

Did DNA enter the bacteria?

Blending causes phage Is DNA the genetic material?
protein coat to fall off
1950-1953 la mayor parte de la comunidad científica
empieza a admitir al ADN como el material genético
 3. descubrimiento de la estructura del
DNA: la doble hélice
“La suerte favorece
 James Watson: ingresa en 1943 a la
sólo a la mente Universidad de Chicago a la edad de 15
años. Influenciado por la lectura en 1946 del
preparada” libro de Erwin Schrödinger titulado What Is
Life?, Watson cambió su interés profesional
de la ornitología a la genética.
 (22 años) PhD en la Universidad de Indiana
bajo la supervisión del genetista Salvador
Luria.
 Watson arriba a Cambridge en el otoño de
1951.
 Francis Crick hace doctorado en
cristalografía de proteínas en Cambridge
Primeros trabajos: 1951 Noviembre

Watson y Crick construyen un primer modelo del ADN como una hélice triple.
Rosalind Franklin inmediatamente les hace notar su error!
Diciembre 1951
El jefe del laboratorio, Bragg se entera del fiasco de la triple hélice y ordena a
Watson y Crick que abandonen el ADN y continúen sus trabajos.

Envían los moldes de sus modelos a Wilkins y Franklin en Londres.

30 de Enero de 1952
Watson va a Londres para mostrar a Wilkins y Franklin el manuscrito de Pauling.
8 de Febrero 1952
• Watson y Crick acceden a un informe del King’s que
los convence de que el ADN tiene dos cadenas.

19 de Febrero 1952
• Watson intenta fabricar un modelo de doble hélice,
Pero aún duda acerca de cómo ubicar los pares de
bases.
• Donohue le explica acerca de la química real de las
bases.

Wilkins muestra a Watson la imagen 51 de

Rosalind Franklin sin su consentimiento!.

Rosalind Elsie Franklin (1920-1958) Por medio de la

técnica de difracción de rayos X captura la primera
imagen de alta calidad de la molécula de ADN
(exposición prolongada (62 h)
 1952, Mayo
Franklin obtiene la ahora famosa
imagen No. 51
del ADN en su forma B.
 Ley de Erwin Chargaff

El Checo Erwin Chargaff (1905-2002) Descubre las leyes de la

complementariedad de las bases de los ácidos nucleicos.
“la cantidad de purinas no siempre se encuentra en proporciones iguales a las de las
pirimidinas. La proporción es igual en todas las células de los individuos de una
especie dada, pero variaba de una especie a otra”.
 28 de Febrero
EUREKA. Watson termina de armar la doble
hélice, asesorado por Crick.
 25 de abril de 1953
Watson y Crick informan su
descubrimiento
en una carta a la revista
Nature.
"Deseamos sugerir una estructura para la
sal del ácido desoxirribonucleico
(ADN).Esta estructura posee nuevas
características que son de considerable
interés biológico“
 También aparecen
trabajos (separados)
de Franklin y Wilkins.
 James Dewey Watson y Francis
Harry Compton Crick

En 1953 propusieron el modelo molecular del

ADN. Cada cadena de la doble hélice podría
actuar como plantilla para la síntesis de una
nueva cadena complementaria.
 1962, premio nobel de medicina o fisiología
• James Watson (b. 1928), Francis Crick (1916–2004), Maurice Wilkins (1916–
2004)
• Rosalind Franklin (1920–1958), murió de cáncer de ovarios dos años antes
con 37 años por causa de la exposición a los rayos X.
Reconocimiento 1998
 Hipótesis replicación DNA
1958

científicos que trabajaron marcando las moléculas con N15 y poniéndolas a crecer
en N14 , se determino el peso de las moléculas sintetizadas
Arthur Konberg y Severo Ochoa compartieron Nobel en 1959 por
descubrir las enzimas que rigen la síntesis de los ácidos nucleicos.
Sus estudios demostraron que la investigación en enzimas podía
aplicarse al estudio de los genes y el papel que la bioquímica podría
desempeñar en biología molecular.
El polaco Heinz L. Fraenkel-Conrat en 1955 puso de
manifiesto que no sólo el ADN podía ser el material
genético (RNA en virus).

Francois Jacob y Jacques Lucien Monod postularon la

necesidad de una molécula intermediaria (el RNAm)
entre el ADN y las proteínas que codifican (1960).

1974-1975 Allan Maxam y Walter Gilbert desarrollaron el

método para secuenciar el ADN.
• Keith Backman en 1978 demostró que los elementos genéticos
se pueden reordenar en nuevas combinaciones
funcionales….nace la Ingeniería genética.
• Una de las aplicaciones de la ing. genética es la terapia génica.
•En 1983 Kary Mullis y colaboradores inventaron la
técnica de PCR.

•Lan Wilmut y otros investigadores clonan una oveja de

células de un adulto (1997).

•Se terminó de secuenciar el genoma humano en 2001.

Ahora se están estudiando los genomas de otros
organismos de importancia y que papel cumplen todos
esos genes o secuencias.

Francis Collins y Craig Venter

El Dogma Central
de la Biología Molecular

Cell

Transcription DNA

mRNA
Translation Ribosome

Polipéptido
(proteína)
©1998 Timothy G. Standish
PROCARIOTAS
GEN ESTRUCTURAL

DNA
TRANSCRIPCION

mRNA
TRADUCCION

PROTEINA

EUCARIOTAS I1 E1 I2 I3 E2 E3 I4 E5 I6 E6 I7

DNA

TRANSCRIPCION

mRNA primario
PROCESAMIENTO

E1 E2 E3 E4 E5 E6
MENSAJERO
FUNCIONAL
TRADUCCION

PROTEINA
Organización genética

•Procariotes: genoma en su mayoría

codificante. Paquetes de genes operón:
genes relacionados con una misma función
genética  agrupados de forma contigua
 unidad de transcripción y de regulación
genética

•Eucariotes: regiones no codificantes y

codificantes (genes con intrones y exones)
para proteínas y RNAs funcionales
EL GENOMA DE LA CÉLULA PROCARIOTA

PARED CELULAR

RIBOSOMAS

GENOMA

•Molécula DNA de doble

cadena circular, o lineal
FOTO-MICROGRAFÍA ELECTRÓNICA DE UNA •Haploide
CÉLULA BACTERIANA •1000-6000 Kilobases (kb)
 ACIDOS NUCLEICOS

NÚCLEO
localización

DNA RNA
Mitocondria Citoplasma
Cloroplasto
Ácidos nucleicos

•Dos tipos de ácidos nucleicos

químicamente similares DNA y
RNA
•Principales moléculas portadoras
de la información de la célula
•Monómeros que lo forman son
los Nucleótidos
Un Nucleótido
Adenosine Mono fosfato (AMP)

OH
Phosphate
- NH2
HO P O Base
N
H+ H
O N
H
N N
Enlace 5’CH2
fosfoéster O
4’ 1’
Sugar RNA: ribosa
3’ 2’
DNA: desoxirribosa

OH H
OH
Molécula altamente estable
200.000 años

Enlace
N- glicosil
 Azúcar en el RNA y DNA

Anillo furanósico
 AZÚCAR

‘ prima´en azucares
Bases de los ácidos
nucleicos
 NUCLEÓTIDOS
B N + R / dR + P
Nucleósido + P
5´- CTP
Uridine
Los nucleótidos, además de integrar las cadenas de AN
poseen funciones biológicas en estado libre:

• La energía libre almacenada en el ATP

se utiliza para desarrollar trabajo mecánico (contracción muscular), osmótico
(transporte activo), químico (biosíntesis) y eléctrico (transmisión del impulso
nervioso)

• La guanosina-5'- trifosfato (GTP, pppG) interviene en la síntesis de proteínas

• la uridina-5'- trifosfato (UTP, pppU) en el metabolismo de los glícidos

• la citosina-5'- trifosfato (CTP, pppC) en el metabolismo lipídico

 Puede existir vida con otras moléculas???

• Arsénico (As) análogo químico

del P, debajo en la tabla
periódica.
• Posee radio atómico similar y
electronegatividad idéntica.
• La forma biológica mas común
del fósforo es el fosfato (PO4
• 3–), y del arsénico el arsenato
(AsO4 3–)
• Toxicidad Biológica
• Solo en ambientes extremos
NUCLEÓTIDOS CÍCLICOS
 ANÁLOGOS DE NUCLEÓTIDOS

Análogos de pares de bases

se incorporan durante la replicación del
ADN

5-Bromouracilo AT GC (se puede aparear con G)

2-aminopurina AT GC (se puede aparear con C)
TOPOLOGÍA NUCLEÓTIDOS
POLIMERIZACIÓN DE NUCLEÓTIDOS
POLIMERIZACIÓN DE NUCLEÓTIDOS
POLIMEROS DE AC. NUCLEICOS
RNA DNA
REPRESENTACIÓN DE DNA

pTpGpCpApT
Tp G p C pApTp
T G C A T
LEY DE ERWIN CHARGAFF
Complementariedad de Bases
Guanine y Citosine

-
+

+ -

+ -
Complementariedad de Bases
Adenine y Thymine

+ -
Adenine Thymine

-
+
 COMPLEMENTARIDAD
DE BASES NITROGENADAS
 Modelo Watson-Crick (1953) permitía la mutación y
plantearon la sustitución de bases por
TAUTOMERISMO

Fenómeno en que las bases con un grupo CETO

(bases nitrogenadas) se convierten en forma ENOL.
Mutación por transición

C C - OH
Base nitrogenada Forma enol
 H

Un H llega allí por procesos fisiológicos.

*Deja de ser puente de hidrógeno (este tipo de enlace
no se da entre dos hidrógenos).
TAUTOMERISMO
 Estructura de DNA

BASES

EJE AZÚCAR
FOSFATO

1953 Watson y crick proponen la doble hélice, cadenas

antiparalelas, alrededor de un eje central orientación 5`3`
El grupo fosfato es un ácido fuerte, con un valor de pKa de +- 1,
ácidos nucleicos (DNA y RNA) .
pH fisiológico cada residuo de la molécula lleva una carga negativa.
 COMPLEMENTARIA
G C

A T

ANTIPARALELA
5´- -3`

3´ ´- -5´
 -
Modelo del DNA
-
- A T
The Watson - Crick - C G -
- G C -
T A -
- 3.4 nm
-
surco 1 nm
-
Menor
-
G C
-
Estructura de DNA - T A -
•Doble hélice
•Antiparalelas
- C G -
•Complementarias
-
A T
-
Surco
-
•Conformación helicoidal.
-
Mayor
-
•Secuencia especifica A T
-
•Súper-enrollamiento - C G -
•Giro a la derecha G C
- -
•10.5 bp/giro T A -
0.34 nm
-
-
Separación de cadenas de DNA de forma
reversible

Replicación y transcripción: separación de

cadenas de DNA

Separación: melting

Por aumento de T° (quiebra ptes H)

 DESNATURALIZACIÓN-RENATURALIZACIÓN

Aumento de To aumenta el movimiento térmico y

cambia el equilibrio a favor de la separación de las
bases.

Temperatura alta: las dos cadenas se desenrollan y

separan: FUSIÓN.
Valores extremos de pH también desnaturalizan o funden
el ADN.

La fusión de una molécula de ADN =

aumenta su absorción de luz UV.
Absorbancia aumenta al aumentar temperatura
* Las interacciones electrónicas entre las bases
apiladas, reduce su capacidad para absorber la luz
de longitud de onda  260 nm.

Pares G:C son más

estables que A:T

La temperatura de fusión
Tm es mayor para los
ADNs con > contenido (%)
de bases GC.
La temperatura a la cual el DNA se desnaturaliza se
incrementa con la proporción de pares G:C.

Tm: Temperatura de fusión, la mitad de las bases en una

muestra de DNA bicatenario se ha desnaturalizado
 Cadenas:
ADN-ADN ARN-ARN ADN-ARN
que son complementarias, forman espontáneamente
doble hélice.
•ADN no repetido
Capacidad que tienen •ADN medianamente repetido
dos moléculas de •ADN altamente repetido
“reconocerse”
ADN satélite: sec repetidas
Hibridación (10-20% en eucariotes)

A G
T T
Cual de este tipo de A C
secuencias se “hibridará”
o reasociará a una cadena
complementaria más
T
A
A
C
?
rápidamente? T C
A G