Bioquímica I– MB-159

Heidy Cabrera MSc. ; Olinda Núñez MSc.

ESCUELA DE MICROBIOLOGÍA
BIOQUÍMICA CLÍNICA I – MB-159
DEPTO. DE BIOANÁLISIS E INMUNOLOGÍA
• El bioanalista del laboratorio de
bioquímica debe ser capaz de
seleccionar metdologías que:
• Cumplan con criterios de calidad
basados en sus propiedades
metrológicas.
• Sean aprobados por organismos
internacionales o nacionales para su
uso.
• Sean aprobados para uso in vitro
• Sean recomendados por sociedades
de expertos.
ESCUELA DE MICROBIOLOGÍA
DEPTO. DE BIOANÁLISIS E INMUNOLOGÍA
ESCUELA DE MICROBIOLOGÍA
DEPTO. DE BIOANÁLISIS E INMUNOLOGÍA
ESCUELA DE MICROBIOLOGÍA
DEPTO. DE BIOANÁLISIS E INMUNOLOGÍA
ESCUELA DE MICROBIOLOGÍA
DEPTO. DE BIOANÁLISIS E INMUNOLOGÍA
ESCUELA DE MICROBIOLOGÍA
DEPTO. DE BIOANÁLISIS E INMUNOLOGÍA
• Métodos químicos colorimétricos
• Métodos de unión al colorante
• Métodos enzimáticos: según la incubación y tiempo de lectura
(de punto final, de dos puntos, cinéticos); según la señal
detectada (colorimétrico, UV).
• Métodos turbidimétricos (precipitación, microprecipitación).

ESCUELA DE MICROBIOLOGÍA
DEPTO. DE BIOANÁLISIS E INMUNOLOGÍA
• Método de Biuret para determinación de
proteínas.

ESCUELA DE MICROBIOLOGÍA
DEPTO. DE BIOANÁLISIS E INMUNOLOGÍA
Al interpretar un método de laboratorio para enzimas séricas se debe
tomar en cuenta:
• ¿Cuál es su sustrato y producto?
• ¿Son medibles al espectrofotómetro?
• ¿El método requiere reacciones acopladas?
• ¿La enzima requiere de cofactores?
• ¿Qué propiedades tienen los sustratos o productos de la reacción?
• Los métodos espectrofotométricos con luz Visible y Luz UV son menos
costosos y de gran utilidad.

ESCUELA DE MICROBIOLOGÍA
DEPTO. DE BIOANÁLISIS E INMUNOLOGÍA
 Medición del
Cofactor
NADH

Medición del
Producto

Medición del
Sustrato

ESCUELA DE MICROBIOLOGÍA
DEPTO. DE BIOANÁLISIS E INMUNOLOGÍA
Medición de la actividad enzimática:
• Constante: T°, pH.
• Variable: Tiempo de incubación.

2. Enzimático cinético o de
1. Enzimático de punto final
monitoreo continuo.

• Los reactivos están • Se realizan múltiples lecturas

combinados. de ABS en el tiempo.
• Se hace la lectura de ABS en • Permite observar la linealidad
un tiempo fijo. de la reacción.

ESCUELA DE MICROBIOLOGÍA
DEPTO. DE BIOANÁLISIS E INMUNOLOGÍA
• La actividad enzimática se basa en la
velocidad de reacción. La formación de
producto o desaparición de sustrato se
monitorea espectrofotométricamente.

ESCUELA DE MICROBIOLOGÍA
DEPTO. DE BIOANÁLISIS E INMUNOLOGÍA
ESCUELA DE MICROBIOLOGÍA
DEPTO. DE BIOANÁLISIS E INMUNOLOGÍA
Enzimático Cinético-UV Enzimático Cinético-colorimétrico

Abs 1 > Abs 2 > Abs 1 = ∆Abs

Abs 3 > Abs 2 > Abs 3 = ∆Abs
ESCUELA DE MICROBIOLOGÍA
DEPTO. DE BIOANÁLISIS E INMUNOLOGÍA
 • Se utilizan para separar componentes de interés en una mezcla matríz.
• Los más utilizados: cromatografía de intercambio catiónico, de afinidad y
de intercambio iónico de alto desempeño.

Método de cromatografía de intercambio Método de cromatografía de afinidad

catiónico

ESCUELA DE MICROBIOLOGÍA
DEPTO. DE BIOANÁLISIS E INMUNOLOGÍA
ESCUELA DE MICROBIOLOGÍA
DEPTO. DE BIOANÁLISIS E INMUNOLOGÍA
 La identificación y la separación se basan
considerando el tiempo de retención que
%HbA1c= área sHbA1c/Área total de HbA es específico para cada variante de la
hemoglobina.

ESCUELA DE MICROBIOLOGÍA
DEPTO. DE BIOANÁLISIS E INMUNOLOGÍA
• En bioquímica
clínica se utilizan
principalmente
para análisis de
proteínas.

ESCUELA DE MICROBIOLOGÍA
DEPTO. DE BIOANÁLISIS E INMUNOLOGÍA
ESCUELA DE MICROBIOLOGÍA
DEPTO. DE BIOANÁLISIS E INMUNOLOGÍA
ESCUELA DE MICROBIOLOGÍA
DEPTO. DE BIOANÁLISIS E INMUNOLOGÍA
ESCUELA DE MICROBIOLOGÍA
DEPTO. DE BIOANÁLISIS E INMUNOLOGÍA
ESCUELA DE MICROBIOLOGÍA
DEPTO. DE BIOANÁLISIS E INMUNOLOGÍA