Cultivo de E. coli recombinante que produce la Taq DNA polimerasa: La cepa de E.
coli recombinante que produce la Taq DNA polimerasa se cultiva en un medio de
La abstracción de la Taq DNA polimerasa
recombinante de E. coli implica la
separación de la enzima de los
componentes celulares restantes de la
Abstracción es
bacteria. Aquí se presenta un
procedimiento general para la abstracción
Abstracción y de la Taq DNA polimerasa recombinante a
partir de E. coli
Purificación
La Taq DNA polimerasa es una enzima que
se encuentra naturalmente en la bacteria
Purificación Thermus aquaticus, pero también puede
Sus etapas son
ser producida por medio de la ingeniería
genética en la bacteria Escherichia coli
recombinante
cultivo adecuado.
Romper las células de E. coli: Las células de E. coli se rompen para liberar los
componentes celulares, incluyendo la Taq DNA polimerasa.
es necesario
Purificación de la Taq DNA polimerasa: La Taq DNA polimerasa se purifica
a partir de los componentes celulares restantes utilizando técnicas de
purificación como la cromatografía de afinidad
Prueba de actividad de la Taq DNA polimerasa: La actividad de la Taq
DNA polimerasa se prueba para asegurarse de que la enzima esté
intacta y funcione adecuadamente.
Cultivo de células: Se inicia con el cultivo de E. coli recombinante
que expresa la Taq DNA polimerasa en un medio de cultivo
adecuado
Eliminación de restos celulares: Se eliminan los restos celulares mediante
centrifugación, filtración y/o precipitación con sales.
Cromatografía de afinidad: Se aplica el extracto obtenido en el paso anterior a
una columna de cromatografía de afinidad para Taq DNA polimerasa.
Lavado de la columna: Se lavan las impurezas de la columna y se eluyen los
restos de la enzima no específica.
Elución de la Taq DNA polimerasa: Se eluye la Taq DNA polimerasa específica de
la columna con una solución adecuada.
Concentración y almacenamiento: Se concentra la Taq DNA polimerasa obtenida
y se almacena a -20°C hasta su utilización.