INFORME DEL LABORATORIO Nº 2

“DESCAPSULACION DE QUISTES DE
ARTEMIA”

PROFESOR: ING.ANTONIO MARILUZ FERNANDEZ

ALUMNA: TAQUIRE DE LA CRUZ, MILAGROS
CODIGO: 1124220295
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INDICE

I. INTRODUCCIÓN ......................................................................... 2

II. OBJETIVOS ................................................................................ 4

III. MARCO TEORICO ...................................................................... 5

IV. PARTE EXPERIMENTAL ........................................................... 12

V. RESULTADOS ............................................................................ 18

VI. CONCLUSIONES……………………………………………………21

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I. INTRODUCCION

El género Artemia (Crustacea, Anostraca) incluye pequeños crustáceos o

“camaroncitos de la sal”. La Artemia es un pequeño crustáceo cuyo contenido
proteico es insustituible en el cultivo de especies como el camarón, los
langostinos, peces comestibles y de ornato. Tiene un gran portencial que
rebasa sus cualidades en la industria acuícola y podria explotarse como
alimento humano. Como nutriente animal de primera calidad, posee casi todos
los aminoácidos básicos para formar proteínas, ademas de acidos grasos y
carbohidratos. Su explotacion se favorece por su gran capacidad de adaptacion
a climas tropicales y templados, en los que vive de forma natural y donde
puede cultivarse al aire libre. Es una especie que vive en el mar, donde hay
aproximadamente unos 35 gramos de sal por litro. Los grupos de Artemia se
localizan en la orillas de bahías y costas, donde hay vaporizacion y
concentracion de sal.

La Artemia pertenece a la clase crustácea, igual que cangrejos, langostas,

jaibas, camarones y langostinos, entre otros organismos que se caracterizan
por teer varias patas para nadar, caminar y capturar alimento. Pertenece al
orden anostraca, es integrante del placton y vive en aguas ricas de cloruros,
carbonatos o sulfatos de sodio o de potasio. Su ciclo de vida es, en promedio,
de 17 días.

La larva se llama nauplio y mide de 300 a 400 micras. El nauplio se desarrolla

en un periodo de 24 a 36 horas, así que a los dos días de nacido es un adulto,
etapa en la que alcanza de uno a 1.5 centímetros de largo. Es un organismo de
gran movilidad, de aspecto translúcido y brillante, de colores que van de casi
tarnsparente a rojo intenso (lo cual depende de su alimentacion y grado de
oxigenacion del agua). Ambos elementos lo hacen visible y fácil de atrapar, y
es especialmente atractivo para sus depredadores. Los adultos presentan
diferenciación sexual: los machos tiene en la cabeza antenas grandes y

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desarrolladas, que funcionan como tenazas para sujetar a la hembra durante el

cortejo y reproducción; la hembra carece de antenas y tiene en su abdomen un
saco ovígero donde guarda sus huevecillos luego de la fecundación. Tiene dos
tipos de reproducción: la ovovivipara, cuando el embríon se desarrolla dentro
de la madre y nace l larva o nauplio: y la ovípara, cuando por no tener todas las
condiciones favorables, la hembra expulsa los huevecillos o quistes que
rotegen al hembrión con una cubierta llamada corio, capaz de hidratarse y
deshidratarse.

Embriones "almacenables" Esta etapa de desarrollo tiene gran importancia

comercial porque, si estan desidratados, los quistes o huevecillos se pueden
almacenar más de un año, sin afectar al embrión. Cuando se requiere de
nauplios, basta hidratar quistes durante 48 a 72 horas en el agua salada.
Entonces pasan de su forma de "arenillas" (de fácil almacenamiento en
refrigerador) a pequeñisimas “pelotitas” de las que emerge la larva para iniciar
su desarrollo.

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II. OBJETIVOS

- Lograr en pequeña escala la descapsulacion de quistes de artemia para

la obtencion de nauplios uilizando hipoclorito de sodio.
- Mantener constante los parametros iniciales y finales (temperatura,
oxigeno, salinizacion,etc), para que nuestra prueba experimental salgo
como lo deseamos.
- Determinar el tiempo en que los nauplios demoran hasta hacer eclosion
- Identificar los diferentes tipos de estadios que puede presentar la
artemia
- Determinar la cantidad de nauplios que eclosionan por un gramo de
quistede artemia a diferentes tipos de salinidades

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III. MARCO TEORICO

La Artemia salina es un crustácco que en estado adulto mide entre 17 –18 mm,
posee unpar de apéndices prenciles, ojos pedunculados, 17 pares de
apéndices, una furca(rameada o bifurcada). La hembra adulta posee un
ovisaco en el que incuba de 10 a 30 huevecillos generalmente y en condiciones
óptimas hasta 70 huevecillos. Algunos autores reportan de 50 – 200, según la
especie. Presenta un ciclo de vida sexual y asexual.

DIFERENCIAS ENTRE HEMBRAS Y MACHOS

MORFOLOGIA Y CICLO DE VIDA

Los lagos salados y estanques de las salinas con poblaciones de Artemia se

encuentran distribuidos por todo el mundo. En ciertos momentos del año,
grandes cantidades de minúsculas partículas marrones (de 200 a 300 micras
de diámetro) aparecen flotando en la superficie del lago y son arrojadas hacia
las orillas por la acción de las olas y el viento. Este polvo aparentemente inerte

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está formado por quistes secos inactivos en estado de criptobiosis

(“durmientes”) manteniendose así tanto tiempo como permanezcan secos.

Una vez puestos en agua de mar, los quistes bicóncavos se hidratan tomando
forma esférica y el embrión recobra su metabolismo reversible interrumpido.
Tras unas 24 horas la membrana externa de los quistes se rompe (“breaking”) y
aparece el embrión rodeado de la membrana de aclosión. Durante las horas
siguientes, el embrión abandona completamente la cáscara del quiste:
colgando entretanto de la cáscara vacia a la cual permanece todavia unido
(estado de “umbrella”). Dentro de la membrana de eclosión se completa el
desarrollo del nauplio, sus apéndices comienzan a moverse y en un breve
periodo de tiempo la membrana de eclosión se rasga (= “hatching”) emergiendo
el nauplio que nada libremente.

PROCESO DE ECLOSION DE UN QUISTE DE ARTEMIA

El primer estado larvario (también llamado estado I) mide entre 400 y 500
micras de longitud, tiene un color pardo anaranjado (por acumulación de
reservas vitelinas) y posee tres pares de apéndices: el primer par de antenas
(también llamadas anténulas y que tienen una funcion sensorial) el segundo
par de antenas (con función locomotora y filtradora) y las mandíbulas (con una

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función de toma de alimento). Un único ocelo de color rojo tambien llamado ojo
nauplial se encuentra situado en la cabeza entre el primer par de antenas

Tras aproximadamente 24 horas, el animal muda al segundo estado larvario

(también llamado estado II). Pequeñas partículas alimenticias (tales como
células de microalgas, bacterias, detritus) con un tamaño que varía entre 1 y 40
micras son filtradas por el segundo par de antenas, siendo entonces ingeridas
por un aparato digestivo ya funcional.

La larva continua su crecimiento apareciendo diferenciaciones a lo largo de las

15 mudas. Así van apareciendo unos apéndices lobulares pares en la región
torácica que se diferenciarán posteriormente en toracópodos, se desarrollan
ojos complejos laterales a ambos lados del ojo nauplial. Desde el estado X en

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adelante, se producen importantes cambios tanto morfológicos como

funcionales, por ejemplo: las antenas pierden su función locomotriz y se
transforman en elementos de diferenciación sexual. Los futuros machos
desarrollan unos apéndices curvados y prensiles mientras que las antenas de
las hembras degeneran en apéndices sensoriales.

Los toracópodos están ya completamente formados y presentan 3 partes

funcionales: los telopoditos y endopoditos con acciones locomotrices y
filtradoras y los exopoditos que actuan como branquias.

Los adultos de artemia miden hasta 10 mm de longitud en las poblaciones

bisexuales y hasta 20 mm en las poblaciones partenogeneticas. Los adultos se
caracterizan por un cuerpo alargado con dos ojos complejos pedunculados, un
aparato digestivo lineal, unas anténulas sensoriales y 11 pares de toracópodos
funcionales. El macho posee un par de piezas prensiles musculadas muy
características (segundo par de antenas) en la región cefálica mientras que en
la parte posterior del tórax se puede observar un par de penes. La hembra de
artemia no tiene apéndices distintivos en la región cefálica, pero puede ser
fácilmente reconocida por el saco de puesta o útero que está situado
inmediatamente detrás del undécimo par de toracópodos.

Los huevos se desarrollan en dos ovarios tubulares situados en el abdomen.

Una vez maduros, tienen forma esférica y se desplazan hasta el útero a través
de dos oviductos (también llamados sacos laterales).

La precópula de los adultos se inicia cuando el macho sujeta a la hembra entre

el útero y el último par de toracópodos, con sus antenas curvadas. Las parejas
pueden nadar de esta forma durante largo tiempo en lo que se conoce como
posición de monta (“riding position”), para lo cual mueven sus toracópodos de
forma sincrónica. La cópula es un rápido acto reflejo: La parte ventral del
macho se dobla hacia delante y uno de los penes es introducido en la abertura
del útero fertilizando los huevos. En el caso de las hembras partenogenéticas la

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fertilización no tiene lugar y el desarrollo embrionario comienza tan pronto

como los huevos han llegado al útero.

Los huevos fecundados se desarrollan normalmente en nauplios nadadores (=

reproducción ovovivípara) que son depositados por la hembra. En condiciones
extremas (salinidad elevada, bajos niveles de oxígeno) las glándulas de la
cáscara, (órganos parecidos a uvas situados en el utero), entran en actividad y
acumulan un producto de secrección de color marrón (= hematina). Los
embriones solo se desarrollan hasta el estado de gástrula, momento en el cual
son rodeados de una gruesa cáscara (segregada por las glándulas de la
cáscara), entrando en un estado de latencia o diapausa (= parada reversible
del metabolismo embrionario) y siendo liberados por la hembra (= reproducción
ovípara).

Los quistes generalmenta flotan en las aguas hipersalinas y son llevados hasta
las orillas donde se acumulan y se secan. Como resultado de este proceso de
deshidratación el mecanismo de diapausa es desactivado permitiendo a los
quistes recuperar su posterior desarrollo ambrionario, una vez que son
hidratados en condiciones óptimas de eclosión.

En condiciones adecuadas esta especie puede vivir varios meses, creciendo de

nauplio a adulto en solo 8 dias y reproduciendose a una tasa de hasta 300
nauplios o quistes cada 4 días.

TECNICAS DE ECLOSION / INCUBACION

Existen técnicas estandarizadas funcionan en forma bastante simple cuando se

trata de pequeñas cantidades al nivel de laboratorio, en las cuales se tienen en
cuenta los factores abióticos que deben acompañar a la eclosión; sin embargo,
cuando se trata de niveles mayores que son utilizados en instalaciones
comerciales de larvicultura, se hace necesario ajustar parámetros a fin de
asegurar mayores eficiencias en la eclosión de quistes.

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Temperatura.- Se recomienda efectuar la eclosión entre 25 a 30 °C. Por

debajo de 25 °C, la eclosión se hace lenta y por encima de 30 °C, el
metabolismo interno se detiene irreversible. En lugares con fluctuaciones
térmicas diarias o estacionales será conveniente tener mecanismos que
aseguren una temperatura constante dentro de los límites señalados.

Salinidad.- Generalmente se utiliza agua de mar (35 ppt), sin embargo con
algunas cepas se puede obtener aumentos en la tasa de eclosión, a
salinidades menores (hasta 5 ppt). Se puede trabajar la eclosión de los quistes
dentro de estos límites.

Oxígeno.- Para obtener una eclosión máxima, se debe tener la capacidad de

poder mantener un nivel mínimo de oxígeno disuelto de 2 mg/l. Para este nivel,
y una densidad de 5 gramos de quistes por litro, se debe asegurar un caudal de
aire de 1 litro/minuto por cada 3 litro de capacidad del tanque de eclosión.

Densidad de quistes.- Como se ha indicado anteriormente 5 gramos por litro

debe ser la densidad máximo de quistes para ser eclosionados.

Iluminación.- Se estima que una buena iluminación para el logro de una

eclosión adecuada, se logra con una intensidad de 2 000 lux. Esto se consigue
colocando dos tubos fluorescentes de 40 watts, en la superficie del tanque de
eclosión.

pH.- Debe mantenerse entre 7 y 8. Para niveles comerciales de densidades de

5 gramos de quistes por litro, será necesario de agregar 2 gramos por litro de
NaHCO3 (Bicarbonato de sodio), especialmente cuando se trabaja en
salinidades bajas.

El recipiente debe ser preferiblemente transparente y de fondo cónico,

colocándole el tubo de aeración desde el fondo del tanque, de tal manera de
asegurar un movimiento turbulento de todos los quistes en la solución.

La cosecha se efectuará entre 24 y 48 horas dependiendo de las

características de la cepa. Para esto, se detiene la aeración, esperando 5

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minutos para que las cáscaras vacías se ubiquen en la superficie del tanque.
Para recoger los nauplios, se sugiere oscurecer la parte superior del tanque
con una tela o plástico negro, dejando libre la mitad inferior de este.

CICLO DE VIDA DE LA ARTEMIA

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IV. PARTE EXPERIMENTAL

A. Instrumentos

 Quistes de Artemia (1g)

 Dos vasos beaker de 500ml
 Tamiz
 Hipoclorito de sodio (Lejía)
 Balanza electrónica
 Placa Petri
 Sal
 Agua declorada
 Foco
 Tubo transparente
 Cableado
 Microscopio
 Jarras medidoras
 Pipeta
 Bomba de aire

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B. Procedimientos
a) Determinación del quiste: Observamos los quistes en el microscopio con el fin
de determinar si estaban en condiciones para ser utilizados en el proceso de
descapsulación.

b) Hidratación:

1. Pesar un gramo de quistes de artemia

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2. Vertemos los quistes en un recipiente que contenga 750ml de agua

(declorada) y realizamos aireación constante por 1 hora. El proceso
empezó a las 10:30 am y termino a las 11:30 am.
El agua se puede declorar de dos maneras, la primera dejando reposar
durante 4 días, y la segunda agregando trisulfato de sodio 1gr/50L.

c) Filtración: vertemos el contenido del recipiente a través del tamiz de

100 µm (en nuestro caso usamos un pedazo de tela de camisa) y
debemos retener en esta ultima los quistes que se encuentran
hidratados. En esta operación hay que tener cuidado de no dejar caer los
quistes

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Descapsulación: Prepara una solución de hipoclorito de sodio (lejía, al 12%)

en 50% agua y 50% de (lejía 12%) en 600 ml se solución.

d) Lavado: Colocar aireación y después de 2 minutos, tamizarlos y lavarlos

bien varias veces (hasta desaparecer el olor a lejía y eliminar las
cáscaras), sin botar los quistes.

e) Sedimentación: Colocamos los quistes en un vaso de pp en 500 ml de

agua declorada por 5 minutos con aireación constante, luego dejar
sedimentar por 10 minutos, luego retiramos las cascaras. En el momento
de la sedimentación los embriones se separan de los restos de las
cascaras del quiste.

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f) Incubación: luego de la parte sedimentada (embriones decapsulados)

llevamos los quistes a incubar, la incubación se realizó en 2 baterías,
donde la batería N°1 poseía tres incubadoras ( 5%, 15%, 35%) y la
batería N°2 que poseía 2 incubadoras (5%, 35%), las incubadoras
fueron hechas en el laboratorio, y contenías 1lt de agua declorada con
una concentración de salinidad del 35% y 4mg/l de oxigeno (O2) (sin
embargo en el laboratorio también hicimos la incubación con salinidades
de 5% y 15%, con el fin de poder comparar resultados).

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f) Conteo de nauplios: Por ultimo una vez que eclosionen los nauplios
alrededor de 24 – 48 horas, se procederá a hacer el conteo de nauplios en
cada recipiente para verificar si hay influencia de la salinidad para su eclosión.
luego de 3 días mediante una pipeta de 5 ml. Se realizo el conteo de nauplios
de Artemia

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V. Resultados

N T1 (5%) T2 (15%) T3 (35%)

1 42 45 62
2 47 42 70
3 41 40 74
4 46 45 81
5 48 43 90
Total 224 215 377

a: número de tratamientos; n: número de muestras

a=3 n=5 GL Tratamiento = a-1 = 2

∑
= 44390.4 GL error = a(n-1) = 12

(∑ )

∑ (∑ ) ∑

SC error = SC total – SC tratamiento = 512

a) Según tabla para: 0.05

Ft = F (2; 12)0.05 = 3.8853

Entonces: 38.85529 > 3.8853 = FC > Ft
Por lo menos uno de los tratamientos es diferente. Existe diferencia
estadística significativa del 5%

b) Según tabla para: 0.005

Ft = F (2; 12)0.005 = 8.5097

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Entonces: 38.85529 > 8.5097= FC > Ft

Existe diferencia significativa.

Cálculos en Minitab

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VI. CONCLUSIONES

- Para obtener bueno resultados debemos de de seguir cada paso con

estricto cuidado, ya que un mal procedimiento haria que los resultados
sean muy desfavorables.
- Hay que tener cuidado al momento de agregar sa solucion de hipoclorito
de sodio, y al momento de lavar los quistes ya hidratados
- Se obtubieron resultados aceptables, y con mayor practica los
resultados seran mejores

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