Fecha: 20 de Marzo de 2023

INFORME DE LABORATORIO PRÁCTICA 1 - BIORREDUCCIÓN

ENANTIOSELECTIVA DE CETONAS CON DAUCUS CAROTA

Integrantes

Cristian Casallas, Laura Gonzalez, Marlon Villamil y Santiago Medina

Docente

Paola Andrea Acosta Guzman

Grupo N°1

Síntesis Asimétrica

Química Farmacéutica

Facultad de Ciencias

Universidad El Bosque.
OBJETIVO GENERAL

- Generar la reducción enantioselectiva de acetofenona con biocatalizador Daucus

Carota, determinando su obtención por medio de cromatografía de capa fina (TLC)

OBJETIVOS ESPECÍFICOS

- Realizar una revisión bibliográfica de las oxidorreductasas de origen vegetal

empleadas en la reducción enantioselectiva de cetonas.
- Determinar las condiciones óptimas de reacción del biocatalizador de Daucus Carota
usando como modelo la reducción de acetofenona.
- Elaborar una redacción alterna que permita la obtención de acetofenona reducida en
forma racémica
- Comparar por medio de TLC el resultado obtenido en la reducción química de
acetofenona con respecto a la reducción enzimática

RESUMEN

En esta práctica de laboratorio se llevó a cabo una reducción enantioselectiva de cetonas

proquirales a los correspondientes alcoholes secundarios ópticamente activos mediante la
biorreducción mediada por células intactas de Daucus Carota (Zanahoria). Se eliminó la capa
externa y el resto se cortó en pequeñas rodajas finas, esto con el fin de que el sustrato tuviera
un mayor contacto con el biocatalizador. Se añadieron 50 mg de acetofenona a una
suspensión de raíz de zanahoria recién cortada (50 g) en 50 mL de agua y las mezclas de
reacción se llevaron a una agitación constante durante 15 minutos a temperatura ambiente.
Posteriormente se procedió a tomar una muestra de la solución y se dispuso en una placa de
Cromatografía de capa fina (TLC), para evidenciar si la reacción se llevó a cabo o no.
Finalmente se tomó una segunda muestra después de 40 minutos para evidenciar cambios en
la reacción por medio de TLC.

I. INTRODUCCIÓN

La reducción asimétrica de cetona proquirales es una de las transformaciones más

importantes para la formación de alcoholes ópticamente puros a partir de compuestos
carbonílicos. Hoy en día el uso de biocatalizadores en síntesis asimétrica representa una
alternativa dentro de la química sostenible.
Cuando hablamos de moléculas proquirales se dice que es la cualidad de una molécula o de
un centro aquiral de transformarse en quiral mediante una reacción con solo cambiar uno de
los grupos unidos, es decir que este tipo de moléculas tienen uno o más átomos de carbono
unidos a dos sustituyentes idénticos y a dos sustituyentes diferentes. Proquiralidad es un
concepto importante en la química biológica, porque las enzimas pueden distinguir entre los
dos grupos “idénticos” ligados a un centro carbono proquiral debido a que ocupan diferentes
regiones en el espacio tridimensional, lo cual se into llevar a cabo con el uso de la zanahoria
por sus componentes de cetonas proquirales que pueden ser reducidas (alcoholes) con la
ayuda de un biocatalizador para obtener moléculas con centros quirales de manera
enantiomérica o como mezcla racémica [1].

Muchos de estos alcoholes ópticamente activos son los bloques de construcción quirales
potenciales para la síntesis de moléculas farmacéuticamente importantes y ligandos quirales
asimétricos. Por lo tanto, se considera que este enfoque biocatalítico es el más adecuado para
la preparación de una amplia gama de alcoholes quirales y sirvió de inspiración para el
desarrollo de un nuevo proceso biotecnológico [2].

La reducción biocatalizada de una cetona proquiral ocurre por la adición de un hidruro al

carbono carbonílico. Dicho hidruro proviene de un cofactor de nicotinamida (NAD(P)H) y es
adicionado a la cetona por acción enzimática [3]. La adición puede darse tanto por la cara re
de la cetona como por la cara si, así mismo cualquiera de los dos hidruros del cofactor puede
ser el que se adicione (el hidruro pro-R o el hidruro pro-S). Según este criterio las enzimas
oxidoreductasas de cetonas se clasifican en cuatro tipos, E1, E2, E3 y E4 como lo muestra el
siguiente esquema:

Ilustración 1. Estrategias de adición de la enzima a cetonas [3]

 II. RESULTADOS

Las placas de TLC presentes en la siguientes imágenes corresponden a la búsqueda de la

reducción enantioselectiva de grupos cetonas con un biocatalizador, por tanto la disposición
de esta corresponde la primera señal a la muestra de acetofenona, la segunda contiene
muestra de mezcla racémica, y la tercera corresponde a la muestra de acetofenona expuesta al
biocatalizador, evidenciándose que en ninguna de las dos placas sembradas a diferentes
tiempos (15 y 40 min) tuvieron una reacción pues el desplazamiento fue el mismo.

Imagen 1. TLC a los 15 min Imagen 2. TLC a los 40 min

III. ANÁLISIS DE RESULTADOS

Para evaluar la reactividad de enzimas biocatalíticas potencialmente adecuadas, es crucial

comprender cómo funcionan [4]. Para el proceso de reducción, las coenzimas NADH
(nicotinamida adenina dinucleótido) y NADPH (nicotinamida adenina dinucleótido fosfato) y
una enzima funcionan juntas para catalizar la reacción de manera que: 1) la coenzima y el
sustrato oxidado se unen a una enzima, 2) el sustrato se reduce, mientras que la coenzima se
oxida, 3) la coenzima y el producto reducido se separan de la enzima, y 4) la coenzima se
recicla y está lista para que el proceso comience nuevamente, (Ilustración 2). Por lo tanto,
una mayor exploración de las vías biocatalíticas es una parte importante de la química del
futuro. Ensayos e implementación más amplios de estos métodos biocatalíticos ayudarán a la
industria a satisfacer la demanda de sustratos como alcoholes y aminas, que se pueden
obtener fácilmente en biotransformaciones con pureza enantiomérica [5].
 Ilustración 2. Reducción asimétrica de cetonas catalizada por tejido vegetal [6]

La obtención de alcoholes quirales por reducción asimétrica biocatalizada de cetonas ha sido

ampliamente estudiada desde hace varias décadas. Actualmente se conocen varios detalles de
este tipo de reacciones, como por ejemplo las enzimas involucradas y los factores que afectan
la reacción, así como sus valores óptimos; factores como temperatura, tamaño del sustrato,
sustituyentes en el sustrato, polaridad del disolvente, presencia de cosustratos, entre otros [3].

Los reportes consultados de biorreducción con zanahorias y otras plantas adiciona el sustrato
directamente a una mezcla de cortes de la planta en agua, lo que permite mejorar el
rendimiento con la pre disolución de la acetofenona, esto puede explicarse como un
fenómeno cinético de disolución y reacción. Según lo reporta Andres Gomez, en el caso de la
adición directa no se observó total disolución de la acetofenona en la mezcla reaccionante
hasta seis horas después de la adición, mientras que con la pre disolución en etanol toda la
acetofenona ya se encontraba en fase acuosa y por ende en mayor contacto con las enzimas
que realizan la reducción [7]. Lo descrito anteriormente pudo haber sido una de las causas
que no permitió que se llevará a cabo la reacción (Reacción 1) en la práctica de laboratorio
realizada, ya que inicialmente se dio en primer lugar la adición de la zanahoria al medio para
posteriormente agregar la acetofenona, reduciendo la disponibilidad de cetona que iba a
reaccionar, aumentando el tiempo de conversión.

Reacción 1. Reducción enantioselectiva de acetofenona

Finalmente se puede decir que el uso de células vegetales enteras tiene muchas ventajas. En
primer lugar, una gran variedad de plantas taxonómicamente diferentes está disponible a muy
bajo costo en los mercados locales. Las células enteras también aseguran el reciclaje de los
cofactores oxidados. La separación del producto de la mezcla de reacción se realiza muy
fácilmente mediante filtración/centrifugación y el material biodegradable restante podría
eliminarse o reutilizarse. Debido a las ventajas que presenta este mecanismo de reacción para
la obtención de moléculas enantioméricamente selectivas se puede decir que esta es una
buena alternativa para el planteamiento de rutas de reacción que buscan obtener buenos
rendimientos y elevada estereoselectividad.

IV. CONCLUSIONES

● En conclusión es de vital importancia considerar las condiciones de reacción, la

metodología de adición de los sustratos y las propiedades de los mismos, todo con el
fin de optimizar los rendimientos y tiempos a emplear para la obtención del producto
de interés.
● Estás biorreducciones asimétricas fáciles de realizar están acompañadas de varias
limitaciones, relacionadas tanto con la conversión como con la estereoselectividad. A
veces se requieren largos tiempos de reacción y grandes proporciones de
biocatalizador a sustrato ya que el sustrato orgánico podría modificar o alterar el
sistema, impidiendo así una conversión sintéticamente útil.
● En lo referente a la biocatálisis, se hace imperativo continuar la búsqueda de más
sistemas de células enteras capaces de llevar a cabo la biorreducción aquí estudiada,
esto con el fin de encontrar biocatalizadores que brinden mayor rendimiento y
estereoselectividad.
● La reducción asimétrica de cetonas proquirales es una transformación esencial en la
síntesis orgánica, produce alcoholes secundarios ópticamente activos que sirven como
intermediarios útiles para la síntesis de compuestos biológicamente activos como
fármacos, perfumes y agroquímicos.
V. REFERENCIAS
- [1] Tim Soderberg. (2020). Proquiral sustituyentes en carbonos tetraédricos.
Recuperado de:
https://espanol.libretexts.org/Quimica/Libro%3A_Qu%C3%ADmica_Org%C3%A1ni
ca_con_%C3%A9nfasis_Biol%C3%B3gico_(Soderberg)/03%3A_Conformaciones_y
_estereoquimica/3.11%3A_Proquiralidad
- [2] J. S. Yadav, S. Nanda, P. Thirupathi Reddy, and A. Bhaskar Rao. (2002). Efficient
Enantioselective Reduction of Ketones with Daucus carota Root. J. Org. Chem., Vol.
67, No. 11. https://doi.org/10.1021/jo010399p
- [3] Implementación de biocatalizadores en la reducción enantioselectiva de
cetotioacetales. (2013). Repositorio Uniandes.
https://repositorio.uniandes.edu.co/bitstream/handle/1992/19967/u671771.pdf?sequen
ce=1&isAllowed=y
- [4] Ishige, T., Honda, K., & Shimizu, S. (2005). Whole organism biocatalysis. Current
opinion in chemical biology, 9(2), 174–180.
https://doi.org/10.1016/j.cbpa.2005.02.001
- [5] Fruchey, ER (2011): Reducciones asimétricas de cetonas, iminas y oximas
utilizando enzimas biocatalíticas que se encuentran en plantas de guisantes, tesis de
investigación con honores, Universidad Estatal de Ohio,
http://hdl.handle.net/1811/48915.
- [6] Ishihara, K., Hamada, H., Hirata, T., Nakajima, N. (2003): Biotransformación
utilizando células cultivadas de plantas,J. Mol. Catal. B: Enzima.23, 145-170.
- [7] Gašo-Sokač, D., Nujić, M., Bušić, V., & Habuda-Stanić, M. (2014). Biocatalytic
reductions by plant tissue - Green alternative to alcohol production. Croatian journal
of food science and technology, 6, 51-60.