Facultad de Ciencias Naturales

Departamento de Ciencias Biológicas

Caso de estudio: producción de etanol con Saccharomyces cerevisiae modificada genéticamente

Actualmente, el bioetanol es producido por fermentación alcohólica de los azúcares presentes en

materiales renovables. Dicha fermentación está influenciada por factores como la concentración
de azúcares del sustrato y el microorganismo fermentador que se emplee. Cuando el
Saccharomyces cerevisiae se encuentra cultivado en altas concentraciones de azúcar (30-40%) se
incrementa la producción de etanol. Adicionalmente, cuando S. cerevisiae se encuentra bajo
condiciones de alta concentración de oxígeno disuelto y la concentración de azúcares supera
0,16g/L o 9g/L, la levadura convierte su metabolismo oxidativo a óxido-reductivo o fermentativo
incrementándose la producción de etanol. Dicho fenómeno se conoce como efecto Crabtree. Las
enzimas piruvato descarboxilasa (pdc) y alcohol deshidrogenasa (adh) están presentes en
microorganismos etanologénicos como Saccharomyces cerevisiae y Zymomonas mobilis. Dichas
enzimas son claves en la producción de etanol y presentan algunas diferencias funcionales de
acuerdo con el microorganismo. Se ha encontrado que las enzimas de Z. mobilis presentan mayor
afinidad por sus respectivos sustratos, por lo cual Z. mobilis produce mayor rendimiento de
etanol comparado con S. cerevisiae. Aún cuando el rendimiento de etanol de Z. mobilis es
mayor, la presencia de sales en medios de uso industrial, como la melaza de caña de azúcar,
inhibe la producción de etanol por este microorganismo. Por tal razón, S. cerevisiae continúa
siendo el microorganismo usado industrialmente. Para mejorar su rendimiento, se ha explorado
la posibilidad de crear cepas modificadas genéticamente que permitan incrementar la producción
de etanol. Recientemente, dos investigadores, publicaron un trabajo donde describen la
evaluación de la producción de etanol en melaza de caña de azúcar utilizando cepas de
Saccharomyces cerevisiae modificadas genéticamente por ADN recombinante. Los
investigadores insertaron simultáneamente, utilizando ADN recombinante, los genes optimizados
pdc y adhII de Z. mobilis en S. cerevisiae, luego se hicieron cultivos bajo el efecto de dos
sustratos y dos concentraciones de sacarosa. En los resultados encontraron que las cepas
modificadas genéticamente no presentaban diferencias estadísticamente significativas en la
producción de etanol con respecto a las cepas control.

Una posible falla metodológica que plantearon los investigadores fue la no inserción de uno (o
de ambos) de los genes de interés en el ADN de S. cerevisiae. Para resolver este inconveniente,
el grupo de investigación donde ustedes van a ser contratados necesita estandarizar una técnica
que permita visualizar la inserción de los dos genes de interés en una sola transferencia (es decir,
en un solo análisis identificar la presencia o ausencia de ambos genes). El laboratorio donde van
a trabajar tiene la capacidad de realizar pruebas de Northern blot, Southern blot, Hibridación in
situ, y la aplicación de enzimas de restricción (con resultados visibles en un gel de agarosa).

El grupo de investigación abre una convocatoria para incorporar estudiantes de pregrado que
realicen la estandarización de la técnica específica y ustedes han sido seleccionados. Como
requisitos para trabajar en el proyecto, ustedes deben:

1. Definir claramente la pregunta de investigación

2. Definir los objetivos principales del trabajo de investigación (asegúrese que estos sean
coherentes con su pregunta y evaluables con su metodología).

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3. Plantear una metodología (siguiendo un diagrama de flujo) adecuada para llevar a cabo el
trabajo. No olvide incluir una descripción de la técnica seleccionada.
4. Justificar la selección de la técnica, identificando sus características, las ventajas y
desventajas de la técnica.
5. Apoyarse en literatura científica relevante y reciente para sustentar su escrito.

El objetivo es ganar la convocatoria!!! ☺ Su lenguaje debe ser claro, conciso, y apropiado!

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