Competencia

Conocer el desarrollo y supervivencia de los microorganismos como base para su

reproducción in vitro, las etapas de proliferación y las condiciones necesarias que permiten su
reproducción e identificación por el laboratorio. Este conocimiento lo podrá aplicar en el
desarrollo de las prácticas del laboratorio así como en sus actividades profesionales.

Marco Teórico

El cultivo es el proceso de proliferación de microorganismos al

proporcionarles un entorno apropiado. Los microorganismos en
proliferación producen réplicas de sí mismos y necesitan los elementos
presentes en su composición química. Los nutrientes deben
proporcionar estos elementos en una forma que sea accesible desde el
punto de vista metabólico. Además, los microorganismos requieren
energía metabólica para sintetizar macromoléculas y mantener
gradientes químicos esenciales a través de sus membranas. Los factores
que deben controlarse durante la proliferación incluyen nutrientes, pH,
temperatura, aireación, concentración de sales y fuerza iónica del medio.

Los microorganismos observados en el microscopio pueden proliferar en su ambiente natural

y pueden ser extremadamente difíciles de hacer crecer en un medio de cultivo artificial puro.
Ciertas formas parasitarias nunca han sido cultivadas fuera del hospedador. Sin embargo, en
términos generales puede diseñarse un medio de cultivo apropiado para reproducir de forma
cuidadosa las condiciones encontradas en el entorno natural del microorganismo. El pH,
temperatura y aireación son fáciles de duplicar; los nutrientes presentes constituyen el mayor
problema. La contribución por el entorno en que se desarrolla el microorganismo es
importante y difícil de analizar; un parásito podría necesitar un extracto de tejido del
hospedador; una forma de vida libre podría necesitar una sustancia excretada por un
microorganismo y con la cual se encuentra asociada.

A diferencia de las células en medio líquido, las células en un medio de gel se encuentran
inmovilizadas. Por lo tanto, si se colocan pocas células en un medio de gel, cada célula
prolifera en una colonia aislada. El agente ideal para la formación de gel para la mayor parte
de los medios de cultivo microbiológico es el agar, un polisacárido ácido extraído de ciertas
algas rojas. Una suspensión al 1.5 a 2% en agua se disuelve a 100 °C, dando origen a una
solución clara que se gelifica a 45 °C. Una solución de agar estéril puede enfriarse a 50 °C;
así, se añaden bacterias u otro microorganismo y más tarde la solución se enfría con rapidez
por debajo de 45 °C para formar un gel.
Uno de los métodos que se utilizó en esta práctica de laboratorio consiste en crear estrías de
la suspensión original sobre una placa de agar con un asa de alambre (técnica de estriado en
placa). Conforme se continúa con la creación de estrías, cada vez queda un menor número de
células en el asa y por último el asa deposita una sola célula en el agar. La placa se incuba y
cualquier colonia bien aislada se retira; se vuelve a suspender en agua y se repite el
procedimiento en agar. Si la suspensión se vuelve a someter al método de estriado en placa (y
no sólo una parte de la colonia), este método es fiable y rápido.

Características de los medios representativos utilizados para cultivar bacterias

Agar de sangre
Medio complejo de uso cotidiano en laboratorios clínicos. Es
diferencial dado que las colonias de microorganismos
hemolíticos están rodeadas por una zona de limpieza de los
eritrocitos. No es selectivo.

Agar de chocolate
Medio complejo utilizado para cultivar bacterias de cultivo
exigente, particularmente las encontradas en muestras clínicas.
No es selectivo o diferencial.

Sales de glucosa
Medio definido químicamente. Se utiliza en experimentos de
laboratorio para estudiar necesidades nutricionales de bacterias. No es selectivo o diferencial.

Agar de MacConkey
Medio complejo utilizado para aislar bacilos gramnegativos que habitan de manera típica en
el intestino. Es selectivo debido a que las sales biliares y colorantes inhiben a
microorganismos grampositivos y cocos gramnegativos. Es diferencial debido a que el
indicador de pH se convierte en rojo rosado cuando el azúcar del medio, la lactosa, se
fermente.

Agar de nutriente
Medio complejo utilizado para trabajo de laboratorio cotidiano. Favorece el crecimiento de
una variedad de bacterias de cultivo no difícil. No es selectivo y diferencial.

Thayer-Martin
Medio complejo utilizado para aislar especies de Neisseria, que son de cultivo difícil. Es
selectivo por contener antibióticos que inhiben a la mayor parte de microorganismos, excepto
especies de Neisseria. No es diferencial.
Materiales

- Equipo, Instrumental, Material e insumos.

Material biológico (cepas, abierto, inoculados en TSA agar en tubo inclinado)
3 equipos por sub grupo, 6 equipos por grupo.
- 1 tubo/ equipo en TSA (agar soya tripticasa) de Staphylococcus ssp.
- 1 tubo/equipo en TSA (agar soya tripticasa) de Escherechia coli
- Nota se entregara las Cepas como problema/equipo para inocular y desarrollar
crecimiento, continuar con su identificación y susceptibilidad a los antimicrobianos.

- Reactivos y materiales:
Colorantes para tinción de Gram.
Portaobjetos.
Asas redonda y recta.
Mechero Bunsen.
Aceite de inmersión.
Papel y solución especial para limpieza de microscopio
Encendedor
Soluciones para desinfección
Microscopio óptico.
Agua destilada
Incubadora.
Medio de cultivo:
Agar sangre
Manitol salado
Maconkey
Solido inclinado TSI *
Liquido BHI *
Semi -solido MIO *
Citrato de Simmons *
BHI en tubo *
Citrato *
TSI *
Diagrama
Resultados
Observaciones

Actividades

● Carranza Herrera Valeria: Marco teórico y frotis bacteriano.

● Espinosa Arreola Ana Maria: Toma de fotografías y resultados

● Estrada Martinez America: frotis en portaobjetos y realización de tinción de Gram.

● Martínez Guzmán Alexa Vianney: Diagrama de flujo y portada, frotis bacteriano

● Padilla Rubio Miriana Guadalupe: Preparación de frotis, toma de fotografías

● Vargas Colloy Eduardo: realizó la redacción e integración de las ideas del equipo para
la conclusión de la práctica; así como la preparación de cepas de cultivo.
Conclusiones

Está claro que cada medio de cultivo bacteriano contiene nutrientes y componentes
diferentes, por lo que se utilizan de manera especializada de acuerdo a las condiciones de
desarrollo de las bacterias que se estudian en el laboratorio. Esto se puede inferir tan solo
diferenciando el color que tiene cada Agar gelatinoso de las cepas (nutritivo, glucosa,
chocolate, sangre, MacConkey). La identificación de cada tipo de cepa nos permite
seleccionarla de acuerdo al experimento laboratorista que se desea simular enfocado a una
bacteria específica, y de acuerdo al fundamento teórico que se conoce, y los reactivos
químicos empleados. El resultado de estas interacciones bioquimicas se demuestra en las
cepas de cultivo mediante cambios de color, consistencia, forma, elevacion de los
microorganismos conservados, de los cuales podemos inferir propiedades y caracteristicas de
las colonias suspendidas sobre las cepas de cultivo, para poder obtener resultados
microbiologicos clinicos de una especie de bacteria en especifico. Estas características se
verán afectadas conforme a la conservación de la cepa, por lo que cada cepa de cultivo
bacteriano se almacena, incuba y conserva de acuerdo a ciertas condiciones para observar la
proliferación posterior de sus colonias (por ejemplo, ya sea en el refrigerador para mantener
una temperatura baja, o incubación de dióxido de carbono a temperatura de 37 grados
centígrados aproximados); además, se observa la reacción de las colonias bacterianas al
exponerse a reactivos químicos in-vitro

Se cumplio con el proposito del practica, porque despues de la manipulación exitosa de cepas
llevada a cabo por los integrantes de nuestro equipo, preparación de cultivos observación de
las muestras, y posterior incubación, logramos tener nuestra propia perspectiva y criterio de
la importancia que tienen las cepas en el laboratorio: las cepas de cultivo pueden parecer sólo
un procedimiento laboratorista más para muchos médicos, pero son una herramiento que
tanto los laboratoristas como los médicos utilizaran en su práctica profesional, porque estas
no solo permiten observar sus manifestaciones cuando están aisladas en un microambiente
in-vitro predeterminado, sino que también permiten predecir el comportamiento que tendrán
en ciertas condiciones similares en la biota humana, y en México de manera más
frecuentemente en la microbiota humana. Por lo tanto, podremos generar un diagnóstico
microbiológico patógeno en los pacientes de nuestra población y proporcionar un tratamiento
médico coherente, apropiado y responsable para favorecer su salud; así como medidas de
prevención y certidumbre al paciente acerca de qué medidas de higiene o condiciones
ambientales están favoreciendo la actividad de sus patógenos.
Bibliografía

Carroll K.C., & Hobden J.A., & Miller S, & Morse S.A., & Mietzner T.A., & Detrick
B, & Mitchell T.G., & McKerrow J.H., & Sakanari J.A.(Eds.), (2016). Cultivo de
microorganismos. Microbiología médica, 27e. McGraw Hill.

Pelczar MJ, Chan ECS, Krieg NR. Microbiología: Conceptos y aplicaciones. México
D.F.: McGraw-Hill Interamericana; 2000.

Madigan MT, Martinko JM, Bender KS, Buckley DH, Stahl DA. Brock. Biología de
los microorganismos. Madrid: Pearson Education; 2016.