FACULTAD DE CIENCIAS Y FILOSOFÍA

GUÍA DE PRÁCTICAS

PRÁCTICA: SIEMBRAS EN MICROBIOLOGÍA

MEDIOS DE CULTIVO

Las bacterias requieren nutrientes algunos básicos o generales para su crecimiento y

multiplicación, mientras que otros son exigentes en cuanto a sus requerimientos. En el
laboratorio de Microbiología, estos nutrientes son proporcionados por los medios de cultivo de
composición variada, y la elección de medio de cultivo dependerá del uso, es decir realizaremos
recuentos, aislaremos e identificaremos bacterias, por citar. El uso de los medios de cultivo va
acompañado de las características para la incubación, esto debido por ejemplo al requerimiento
de oxígeno, a la temperatura óptima de crecimiento, a concentración de dióxido de carbono,
entre otros.

Los medios de cultivo podemos clasificarlos en relación con su consistencia, origen, composición
y uso. En la tabla se resume las principales características en referencia a la clasificación.

Líquidos: sus componentes permiten mantener un equilibrio osmótico.

Ejemplo: caldo tripticasa de soya, caldo nutritivo, caldo peptona
Sólidos: medios que contienen un agente gelificante que es el agar a
De acuerdo con su un medio líquido determinado. Ejemplo: Agar tripticasa de soya, agar
consistencia Nutritivo
Semisólidos: son parecidos a los medios sólidos con la diferencia que
la concentración de agar es menor, que va alrededor del 5%. Ejemplo:
medio SIM
Sintéticos: son medios con una composición química definida cuali y
cuantitativamente. Son empleados por ejemplo para determinar
alguna característica metabólica. Ejemplo: agar Eosina Azul de
De acuerdo con su
Metileno
origen
Naturales: medios preparados a partir de sustancias naturales de
origen animal o vegetal, como extractos (extracto de carne) o
infusiones (infusión cerebro – corazón).
Simples: medios contienen nutrientes básicos para el crecimiento de
las bacterias sin exigencia nutricional. Ejemplo: agar tripticasa de soya.
Selectivo: medio que contiene inhibidores para limitar el crecimiento
de ciertas bacterias como en el agar MacConkey o también
componentes que alteran las condiciones del medio de cultivo como
una alta concentración de sales en el agar Manitol Salado.
Diferencial: el medio contiene componentes que permite visualizar
De acuerdo con su macroscópicamente ciertas características de las bacterias por ejemplo
uso fermentación de lactosa en el agar MacConkey.
Enriquecido: medios a los cuales se les añade componentes como
sangre de carnero para producir Agar Sangre. Estos componentes son
factores de crecimiento que favorecen el crecimiento de las bacterias.
Enriquecimiento: son medios que favorecen el crecimiento y
multiplicación de las bacterias debido a que se encuentran
escasamente en una muestra o están estresados. Ejemplo: Caldo
selenito cisteína, agua peptonada alcalina.

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Elaborado por Ruth Cristóbal Delgado
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MÉTODOS DE SIEMBRA

El uso de los medios de cultivo va acompañado de la inoculación en éstos a partir de muestras

de diferente procedencia como muestras ambientales, de alimentos, clínicas, entre otras. Para
esto se requiere usar métodos de siembra que dependiendo de la finalidad nos permitirán aislar
colonias bacterianas y proseguir con una identificación o cuantificar para determinar la
concentración de bacterias en la muestra.

Una colonia bacteriana se origina a partir de una célula bacteriana tras varias generaciones en
un tiempo determinado. Por ejemplo, la inoculación de una muestra de agua en una placa con
agar tripticasa de soya, esta placa inoculada o sembrada se lleva a incubación por 24 horas a
37°C. Tras lo cual se observará el crecimiento de las colonias como lo mostrado en la Foto 1.

Foto 1. Crecimiento de un cultivo mixto en agar Tripticasa de Soya. Obsérvese las colonias aisladas.

Métodos de siembra para aislamiento

1. Siembra en estría o zigzag

Se coloca el inóculo en un extremo de las placas

y se traza una línea vertical. Luego, sobe esa
línea se trazarán líneas en zigzag hacia el otro
extremo, sin esterilizar el asa de siembra. Las
colonias aisladas se obtendrán en el extremo
opuesto del inicio de siembra.

2. Siembra en tres direcciones o giros

Se coloca el inóculo en un extremo de la placa y se extiende en

estrías hasta casi la mitad del medio (sector 1), se gira 90° la placa
y se esteriliza el asa de siembra se realizan estrías continuas
(sector 2), se vuelve a girar la placa 90° y esterilizando el asa se
continua la siembra en estrías hasta completar el sector 3.

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Elaborado por Ruth Cristóbal Delgado
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Siembra en estría múltiple

Se coloca el inóculo en un extremo de la placa,

y con el asa de siembra se realizan estrías en
varios sectores como se muestra en la figura. Al
cambiar de sector se debe esterilizar el asa de
siembra. En el último sector deberán obtenerse
las colonias aisladas. En la figura se muestran 5
sectores de siembra.

Siembra en cuatro cuadrantes

Se divide la placa en cuatro sectores. En el sector 1

se siembra el inóculo en estrías y sin esterilizar el
asa se continuan estrías en los otros 3 sectores
como se muestra en la figura. En el sector 4
deberían observarse las colonias aisladas.

Siembra por agotamiento en cuadrantes

Se siembra el inóculo en el sector I en forma

de estrías, se esteriliza el asa de siembra y
luego se toca en la parte donde se dejaron las
últimas estrías del sector I para continuar la
siembra en el sector II, se vuelve a esterilizar
el asa y se repite el procedimiento anterior
para el sector III y IV. En el sector III y IV podría
observarse colonias aisladas dependiendo de
la carga de la muestra. Foto 2.
Foto 2. Siembra por agotamiento en
cuadrantes en agar Manitol Salado

Métodos de siembra para recuento

Antes de realizar las siembras para recuento se deberá realizar diluciones de las muestras. Las
diluciones nos servirán para disminuir la carga bacteriana de una muestra de manera que al
realizar las siembras de cada una de ellas podamos obtener colonias contables. Por lo general,
se trabaja con diluciones decimales seriadas que van de 1 /10, 1 /100, 1/1000, en adelante. El
número de diluciones dependerá del operario y la naturaleza de la muestra.

Como diluyentes se pueden emplear sustancias que no permitan la multiplicación de las

bacterias, pero sí que las mantengan viables para crecer en un medio de cultivo. Entre los
diluyentes más usados tenemos agua destilada estéril, agua peptonada, solución salina
fisiológica y buffers por ejemplo de tipo fosfato.

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Siembra por dispersión, diseminación o extensión

Esta siembra se realiza en la superficie del medio de cultivo, para ello debe haberse colocado un
volumen de inóculo determinado de la dilución correspondiente. Luego se extenderá en toda la
superficie del medio con una varilla en L o en triángulo (asa de Driglasky). En la figura se resume
la forma de siembra.

Siembra por Pour Plate, incorporación o vertido en placa

Esta siembra tiene varias diferencias con la anterior. Aquí el volumen de inóculo se coloca en
una placa Petri estéril vacía y a continuación se incorpora el agar en forma líquida, mediante
movimientos se mezcla el inóculo con el agar y se deja solidificar. En este caso las bacterias
quedarían retenidas en todo el volumen del agar, observándose tras la incubación la presencia
de colonias a diferentes niveles como se muestra en la foto 3 y 4.

Foto 3. Obsérvese la presencia de colonias

grandes en la superficie y en el interior del
agar colonias pequeñas.

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Foto 4. Siembra a partir de inóculo de dilución 1/1000.

Las colonias pequeñas se observan dispuestas de perfil,
mientras que las colonias grandes en la superficie.

OBJETIVOS

1. Diferenciar el uso de medios de cultivo como agar Tripticasa de Soya y agar MacConkey
a partir de un cultivo mixto de E. coli y Salmonella.
2. Realizar la siembra por agotamiento en agar Tripticasa de Soya y agar MacConkey a
partir del cultivo mixto.

PROCEDIMIENTO

Ejercicio. Siembra por agotamiento

Materiales
✓ 2 placa de agar Tripticasa de Soya (TSA)
✓ 1 placa de agar MacConkey
✓ 1 tubo con caldo del cultivo mixto (X): E. coli y Salmonella
Procedimiento
1. Dividir la placa imaginariamente en 4 cuadrantes.
2. Con el asa de siembra estéril, se toma una asada del caldo X y se coloca en uno de los
cuadrantes sembrando en forma de estrías muy juntas entre ellas (cuadrante 1), a partir de
este cuadrante se realiza una línea hacia el cuadrante 2 y se esteriliza el asa de siembra.
3. Dejar enfriar el asa y sobre la línea dejada en el segundo cuadrante realizar estrías sin tocar
el cuadrante anterior, al terminar en este sector se realiza otra línea hacia el cuadrante 3 y
se esteriliza el asa.
4. Dejar enfriar el asa y sobre la línea dejada en el tercer cuadrante realizar estrías sin tocar
el cuadrante anterior, al terminar en este sector se realiza otra línea hacia el cuadrante 4 y
se esteriliza el asa.
5. Dejar enfriar el asa y sobre la línea dejada en el cuarto cuadrante realizar estrías sin tocar
el cuadrante anterior. Esterilizar el asa.

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6. Observar el esquema de siembra. Realizar este tipo de siembra en los medios de TSA y
MacConkey.
PRIMER
CUADRANTE

CUARTO SEGUNDO
CUADRANTE CUADRANTE

TERCER CUADRANTE

7. Incubar ambas placas a 37°C por 24 horas en aerobiosis.

Lectura e interpretación de resultados

✓ Realizar el estudio de las colonias aisladas que deben haber desarrollado entre el
tercer y cuarto cuadrante
✓ Anotar sus resultados en formato de informe adjunto. Para la descripción de las
colonias hacer uso del esquema de las características macroscópicas que se adjunta.

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REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS

Madigan M, Bender K, Buckely D, Satley W, Stahl D. Brock: biology of microorganisms. 12 ed.

New Jersery: Pearson; 2018.

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PRÁCTICA: SIEMBRAS EN MICROBIOLOGÍA

ALUMNOS:

GRUPO:

RESULTADOS (5 puntos)

EJERCICIO: SIEMBRA POR AGOTAMIENTO

Dibujar sus resultados de las siembras en ambos medios de cultivo y completar la tabla que se
adjunta.

Agar Tripticasa de Soya Agar MacConkey (MC)

(TSA)

Color de colonias Lactosa positiva Lactosa negativa

Forma Color de colonias

Borde Forma

Inhibidores Borde

Indicadores Inhibidores
Indicadores

CUESTIONARIO (8 puntos)

1. Mencionar 1 ejemplo de medio de cultivo de acuerdo con su uso (simple, diferencial,

selectivo, enriquecimiento) diferentes a los citados en la guía.
2. De acuerdo con su uso, ¿qué tipos de medios de cultivo son TSA y MacConkey? Justificar
su respuesta.
3. ¿Para qué sirve la siembra por agotamiento?
4. Si se desea realizar un control de calidad del agar MacConkey, ¿cuál sería el
procedimiento? Ser concreto en el procedimiento, puede acompañar de fotos o figuras.

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CONCLUSIONES (deben estar relacionadas a sus resultados y los objetivos de la práctica) – 5

puntos.

REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS (citar de acuerdo con normas Vancouver, mínimo 2

referencias) – 2 puntos.

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