SESION 04

ACTIVIDAD 04: CONOCIENDO EL PERFIL GLUCIDICO

DOSAJE DE GLUCOSA EN SANGRE

La determinación de los niveles de glucosa en plasma o suero sanguíneo y en líquidos 
corporales  (orina, líquido cefalorraquídeo, ascítico,  pleural,  etc.) constituye una 
medición de primera  línea para  explorar las  alteraciones  del metabolismo 
hidrocarbonado, enfermedades muy frecuentes en nuestro país y en el mundo. Para la 
medición de la glucosa se reportan tres tipos de métodos, los métodos de oxidación
reducción,  los  de condensación y  los  enzimáticos

DETERMINACION DE GLUCOSA POR METODO ENZIMATICO

METODO DE LA EXOQUINASA
En la primera reacción (específica), catalizada por la enzima Hexoquinasa, se fosforila
la glucosa formándose glucosa 6-fosfato. La glucosa 6-fosfato, en una reacción
posterior (reacción indicadora), se transforma en 6-fosfogluconato produciéndose
NADPH (1 mol por cada molécula de glucosa). La producción de NADPH origina un
aumento de absorbancia a 340nm. El incremento de absorbancia a esta longitud de
onda será directamente proporcional a la concentración de glucosa.

METODO DE LA GLUCOSA OXIDASA

En la primera reacción, catalizada por la enzima glucosa oxidasa (GOD), se oxida la
glucosa y se genera H2O2. En la segunda reacción, la enzima peroxidasa (POD) cataliza
la descomposición del H2O2 lo que provoca oxidación de un cromógeno que pasa de su
forma reducida (incolora) a su forma oxidada (coloreada). La aparición del cromógeno
oxidado se evalúa mediante un espectrofotómetro y será directamente proporcional a
la concentración de glucosa en la muestra.
LEY DE BEER-LAMBERT
La ley de Beer-Lambert, también llamada ley de Beer es una regla que define la
relación entre las características de una sustancia y la cantidad de luz absorbida por
una sustancia cuando le atraviesa un haz de luz.

LECTURA DE MUESTRA EN ESPECTROFOTOMETRO

Calibrar el espectrofotómetro: Normalmente el fabricante proporciona una muestra

con la que se puede hacer la calibración del espectrofotómetro. Según las
características del espectrofotómetro, se puede calibrar cada un cierto tiempo, aunque
se recomienda calibrarlo antes de cada medida para asegurar que la medición es
correcta.
Limpiar la muestra a estudiar: Para evitar que la suciedad interfiera en la medida, se
debe limpiar la muestra antes del análisis.
Introducir la muestra en el espectrofotómetro: Es decir, poner la muestra dentro del
espectrofotómetro y cerrar la tapa.
El espectrofotómetro analizará la muestra: Dejamos un tiempo para que el
espectrofotómetro analice la muestra, y luego proporcionará el valor medido.

LOS COMPONENTES DE UN ESPECTROFOTÓMETRO

Fuente de luz: una fuente de luz estable que ilumina a la muestra. Luego el
espectrofotómetro evaluará la luz absorbida por la muestra.
Monocromador: se emplea para obtener una luz monocromática. La función el
monocromador es aislar las radiaciones con la longitud de onda deseada que inciden o
se reflejan. Es decir, el monocromador separa el haz de luz por longitudes de onda y
direcciona la longitud de onda deseada.
Compartimento de la muestra: es el sitio en el que se debe poner la muestra a
analizar. Por lo tanto, es el lugar donde ocurre toda la interacción entre la materia y la
luz.
Detector: es la parte que capta la radiación electromagnética de la muestra para su
análisis.
Fotodetectores: este componente suele incluirse solamente en los fotómetros más
modernos. Cuentan con fotodetectores para percibir mejor la luz y reducir el tiempo
de medición.

RECOMENDACIONES:

 Asegurarse de la ausencia de manchas en la cubeta, líquido en su exterior,

burbujas en el interior, suciedad o turbidez en la muestra. Si la muestra está
fría, las paredes externas de la cubeta podrían empañarse. Todo ello conduce a
una medida de absorbancia alterada.
 Introducir la cubeta al espectrofotómetro siempre en la misma orientación.
 Nunca tocar las caras pulidas, especialmente su mitad inferior.
 A la hora de medir varias muestras, comenzar por las de menos color e ir
pasando a las de color progresivamente más intenso. Esto reduce la alteración
de la medida debida a la pequeña cantidad de líquido residual que pueda
quedar tras vaciar la cubeta.
 Al retirar una muestra de la cubeta, nunca tirar su contenido; devolverlo al tubo
de ensayo original. Sólo deben desecharse las muestras una vez se haya
comprobado que las medidas de absorbancia no muestran anomalías. (Siempre
se podrá repetir la medida si no se han tirado las muestras)