NEFELOMETRIA

La nefelometría es un procedimiento analítico que se basa en la dispersión de la radiación que

atraviesan las partículas de materia. Cuando la luz atraviesa un medio transparente en el que existe una
suspensión de partículas sólidas, se dispersa en todas direcciones y como consecuencia se observa
turbia. La dispersión no supone la pérdida neta de potencia radiante, solo es afectada la dirección de la
propagación, porque la intensidad de la radiación es la misma en cualquier ángulo. La intensidad
depende de: el número de partículas suspendidas, su tamaño, su forma, los índices refractivos de la
partícula y del medio dispersante, y la longitud de onda de la radiación dispersada. La relación entre
variables y es más factible un tratamiento teórico, pero debido a su complejidad raras veces se aplica a
problemas analíticos específicos. El procedimiento generalmente es empírico y sólo se consideran 3
factores:
La concentración: cuanto mayor sea el número de partículas, mayor es la dispersión.
Tamaño de la partícula: factores como el pH, la velocidad y orden de la mezcla, concentración de los
reactivos, duración del estado de reposo y la fuerza iónica.
Longitud de onda: generalmente las muestras se iluminan con luz blanca, pero si están coloreadas, se
debe escoger una porción del espectro electromagnético en la que la absorción del medio se reduzca al
mínimo.
En las muestras se agregan agentes tensoactivos (como gelatina), para prevenir la coagulación del
coloide. Sólo se obtienen datos confiables si se
controlan escrupulosamente las variables que
afectan el tamaño de partículas.

¿EN QUÉ CONSISTE LA NEFELOMETRÍA?

Dispersión de la radiación por partículas en disolución
En el momento en el cual un haz de luz choca contra las partículas de una sustancia en suspensión, la
dirección de propagación del haz cambia su dirección. Este efecto depende de los siguientes aspectos:
1. Dimensiones de la partícula (tamaño y forma).
2. Características de la suspensión (concentración).
3. Longitud de onda e intensidad de la luz.
4.Distancia de la luz incidente.
5.Ángulo de detección.
6.Índice de refracción del medio
NEFELÓMETRO
El nefelómetro es un instrumento utilizado para medir partículas suspendidas en una muestra líquida o
en un gas. De modo que una fotocelda colocada en un ángulo de 90° con respecto a una fuente
luminosa detecta la radiación por las partículas presentes en la suspensión.
Asimismo, la luz reflejada por las partículas hacia la fotocelda depende de la densidad de las partículas.
El diagrama 1, presenta los componentes básicos que conforman un nefelómetro:
A. Fuente de radiación
En nefelometría es de vital importancia disponer de una fuente de radiación con una gran potencia
lumínica. Existen diferentes tipos, que van desde lámparas de xenón y lámparas de vapor de mercurio,
lámparas halógenas de wolframio, radiación laser, entre otros.
B. Sistema monocromador
Este sistema está ubicado entre la fuente de la radiación y la cubeta, para que de esta manera se evite
la incidencia sobre la cubeta de radiaciones con diferentes longitudes de onda en comparación con la
radiación deseada.
De otra manera, reacciones de fluorescencia o efectos de calentamiento en la solución provocarían
desviaciones de la medida.
C. Cubeta de lectura
Es un recipiente generalmente prismático o cilíndrico, y puede tener diferentes tamaños. En éste se
encuentra la solución en estudio.
D. Detector
El detector se encuentra situado a una distancia específica (generalmente muy cerca de la cubeta) y es
el encargado de detectar la radiación dispersada por las partículas de la suspensión.
E. Sistema de lectura
Generalmente se trata de una máquina electrónica que recibe, convierte y procesa datos, que en este
caso son las medidas obtenidas del estudio realizado.

DESVIACIONES
Toda medición está sometida a un porcentaje de error, que principalmente está dado por:
Cubetas contaminadas: en las cubetas cualquier agente externo a la solución en estudio, que se
encuentre dentro o fuera de la cubeta, disminuye la luz radiante en el trayecto hacia el detector (cubetas
defectuosas, polvo adherido a las paredes de la cubeta).
Interferencias: la presencia de algún contaminante microbiano o turbidez dispersa la energía radiante,
elevando la intensidad de la dispersión.
Compuestos fluorescentes: se trata de aquellos compuestos que al ser excitados por la radiación
incidente provocan lecturas erróneas y elevadas de la densidad de dispersión.
Conservación de los reactivos: la temperatura inadecuada del sistema podría causar condiciones
adversas al estudio e incitaría la presencia de reactivos turbios o con precipitados.
Fluctuaciones en la potencia eléctrica: para evitar que la radiación incidente sea una fuente de error
se recomiendan estabilizadores de voltaje, para una radiación uniforme.

CARACTERÍSTICAS METROLÓGICAS
Ya que la potencia radiante de la radiación detectada es directamente proporcional a la concentración
másica de las partículas, los estudios nefelométricos poseen -en teoría- una mayor sensibilidad
metrológica que otros métodos similares (como por ejemplo la turbidimetría).
Además, esta técnica requiere de soluciones diluidas. Esto permite que los fenómenos tanto de
absorción como de reflexión sean minimizados.

APLICACIONES
Los estudios nefelométricos ocupan una posición muy importante en los laboratorios clínicos. Las
aplicaciones van desde la determinación de inmunoglobulinas y proteínas de fase aguda, del
complemento y de coagulación
Nefelometría del Punto Final:
Esta técnica puede ser utilizada para el análisis del punto final, en la cual el anticuerpo de la muestra
biológica estudiada es incubado por veinticuatro horas.
El complejo Ag-Ac es medido utilizando un nefelómetro y la cantidad de luz dispersada es comparada
con la misma medida llevada a cabo antes de la formación del complejo.
Nefelometría cinética
En este método, la tasa de la formación de complejos es monitoreada de forma continua. La tasa de
reacción depende de la concentración del antígeno de la muestra. Acá las medidas se toman en función
al tiempo, por lo cual la primera medida es tomada al tiempo «cero» (t=0).
La nefelometría cinética es la técnica más utilizada, ya que el estudio puede llevarse a cabo en 1 hora,
en comparación al largo periodo de tiempo del método del punto final. La relación de dispersión se mide
justamente después de agregar el reactivo.
Por lo tanto, siempre que el reactivo sea constante, la cantidad del antígeno presente se considera
directamente proporcional a la relación de cambio.

PROCESO EXPERIMENTAL DE NEFELOMETRIA

Para poder analizar la turbidez en el vino, utilizamos el nefelómetro, en cual colocamos 10ml de vino en
la cubeta de lectura y llevamos la cubeta al nefelómetro para k nos brinde el NTU de ese vino.

NEFELOMETRO CUBETA DE LECTURA

LA CUBETA CONTIENE
DE 10ml DE VINO

Después de hacer este procedimiento el cual no fue exitoso por que el índice de NTU era muy elevado y
el nefelómetro no podía leer, procedimos a diluir el la concentración con agua destilada.

NEFELOMETRO
CUBETA DE LECTURA

LA CUBETA CONTIENE
DE 5ml DE VINO MAS
Ya realizada la prueba obtuvimos:

MUESTRA NTU

5ml de Vino 634

10ml de Vino 1268