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SitaAna

Principios Instrumentales y Metodológicos en Biología de


Organismos y Sistemas Ii
1º Grado en Biología

Facultad de Ciencias
Universidad de Córdoba

Reservados todos los derechos.


No se permite la explotación económica ni la transformación de esta obra. Queda permitida la impresión en su totalidad.
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Universidad de Córdoba
Facultad de Ciencias
Principios Instrumentales y Metodológicos en

Reservados todos los derechos.


Biología de Organismos y Sistemas II

DETERMINACIÓN DE
LA VIABILIDAD
DE LAS SEMILLAS

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1. Introducción
En todo cultivo es imprescindible tener en cuenta la calidad de la semilla para el éxito de este.

La semilla es el material de partida para la producción y es condición indispensable que tenga


una buena respuesta bajo las condiciones de siembra y que produzca una plántula vigorosa a los
fines de alcanzar el máximo rendimiento. Desde un punto de vista sustentable, es imposible
obtener una buena cosecha si no se parte de una semilla de calidad, ya que un cultivo puede
resultar de una calidad inferior a la semilla sembrada, pero nunca mejor que ella.

No se permite la explotación económica ni la transformación de esta obra. Queda permitida la impresión en su totalidad.
Una semilla de calidad debe reunir las siguientes propiedades: autenticidad, pureza, limpieza,
sanidad, viabilidad y vigor. En esta práctica vamos a resolver el problema de cómo determinar la
viabilidad de las semillas.

La viabilidad de las semillas es un factor intrínseco en el proceso de germinación. Se define como


el período de tiempo durante el cual las semillas conservan su capacidad para germinar. Es un
período variable y depende del tipo de semilla y de las condiciones de almacenamiento.

Una semilla sólo puede germinar si su embrión está vivo, es decir, si la semilla es viable. Pero
una semilla viable no puede germinar por varias razones. La primera, es que puede encontrarse
en estado de dormición, en cuyo caso la semilla no será capaz de germinar hasta que pase este

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periodo, aunque se encuentre en todas las condiciones óptimas; la segunda, es que la semilla
puede no encontrarse en las condiciones externas óptimas para su germinación.

La germinación de las semillas requiere mucha energía para la realización de las funciones vitales
de la nueva planta, dicha energía se consigue a través de las células del embrión, las cuales
respiran gracias a una serie de reacciones químicas oxidativas, a partir de las cuales se liberan
electrones e hidrógeno, que sirven para reducir el oxígeno que absorbe la semilla y transformarlo
en agua.

Las sales de tetrazolio nos sirven para saber si la semilla está viva de una forma muy sencilla.
Dichas sales son incoloras cuando están oxidadas, pero se vuelven rojas si se reducen con los
electrones que se liberan durante la respiración celular por parte de las células del embrión. Si al
tratar semillas con esta sal adquiere un color rojizo podremos decir que la célula está viva.

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2. Objetivos
Tratar las semillas de maíz con sal de tetrazolio para determinar su viabilidad a partir de la
reducción de la sal.

Si la sal se reduce, la semilla adquiere un color rojizo, por lo que serán viables.

3. Materiales

No se permite la explotación económica ni la transformación de esta obra. Queda permitida la impresión en su totalidad.
➢ Material biológico:

 Semillas de maíz vivas.


 Semillas de maíz muertas (tratadas previamente con calor o cloruro de
amonio).

➢ Reactivos químicos:

 Disolución de cloruro de trifenil tetrazolio al 1,1%.

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 Agua destilada.

➢ Aparatos y equipos

 Cuchillas de afeitar o bisturí.


 Pinzas.
 Papel de filtro.
 Placas de Petri.
 Papel de aluminio.

4. Métodos

➢ Preparación de placas de Petri

En primer lugar, para que las semillas puedan estar lo más activas posibles las
tendremos 24 horas en imbición.

Pasado dicho tiempo dividimos las semillas por la línea media con ayuda de un bisturí
de manera que el embrión quede escindido.

En las placas de Petri, colocaremos un papel de filtro, donde añadimos el cloruro de


trifenil tetrazolio o el agua destilada, así como las semillas vivas, muertas o la muestra
de problema (semillas vivas y muertas mezcladas) según la siguiente tabla:

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IDENTIFICACIÓN SEMILLA (1) INCUBACIÓN DISOLUCIÓN
AÑADIDA
PLACA 1 MAÍZ VIVAS 1-2 h 1 ml de Cloruro de
tetrazolio + 4 ml de
agua destilada
PLACA 2 MAÍZ MUERTAS 1-2 h 1 ml de Cloruro de
tetrazolio + 4 ml de
agua destilada
PLACA 3 MAÍZ VIVAS 1-2 h 5 ml de agua destilada
PLACA 4 MAÍZ MUERTAS 1-2 h 5 ml de agua destilada
PLACA 5 MUESTRA 1-2 h 1 ml de Cloruro de
PROBLEMA tetrazolio + 4 ml de
agua destilada

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Una vez añadido todo, colocaremos las 10 semillas escindidas con las cubiertas hacia
arriba de manera que la disolución penetre en el embrión, y cubriremos rápidamente
con papel de aluminio las placas para evitar reacciones fotoquímicas ya que el cloruro
trifenil de tetrazolio es fotosensible.

Por último, incubaremos en una estufa a 30ºC durante 1 hora.

5. Resultados

Una vez pasado el tiempo de incubación, procedemos al reconocimiento de semillas


viables a partir de la aparición de color rojizo en estas, lo que indicará la reducción de la
sal de tetrazolio.

Obtuvimos los siguientes resultados:

Embriones rojos Embriones


Identificación Semilla Tratamiento (%) incoloros (%)
Cloruro de tetrazolio
PLACA 1 MAÍZ VIVAS 1-2 h 100% 0%
Cloruro de tetrazolio
PLACA 2 MAÍZ MUERTAS 1-2 h 0% 100%

PLACA 3 MAÍZ VIVAS Agua destilada 1-2 h 0% 100%

PLACA 4 MAÍZ MUERTAS Agua destilada 1-2 h 0% 100%


MUESTRA Cloruro de tetrazolio
PLACA 5 PROBLEMA 1-2 h 40% 60%

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Así pues, elaboramos una gráfica de los resultados:

Resultados
120%
Porcentaje de embriones rojos o incoloros

100%

80%

60%

No se permite la explotación económica ni la transformación de esta obra. Queda permitida la impresión en su totalidad.
40%

20%

0%
1 2 3 4 5
Placas de Petri

Embriones rojos (%) Embriones incoloros (%)

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6. Discusión

Las diferencias observadas entre las placas 1 y 2 se deben a que para la placa 1
empleamos semillas vivas mientras que para la placa 2 utilizamos semillas muertas, estas
últimas no realizan la respiración por lo que será imposible que la sal de tetrazolio se
reduzca y por lo tanto se obtenga un color rojizo.

Entre las placas 1 y 3 las diferencias son que mientras en la 1 el 100% tienen color rojizo,
en la placa 3, a pesar de estar vivas ninguna tiene color rojizo. Esto se debe a que en la
placa 1 se ha utilizado el cloruro de tetrazolio y este se ha reducido mientras que en la
placa 3 no.

Los resultados obtenidos en la placa 4 y 5 muestran diferencias las cuales explicamos así:

Mientras que en la placa 4 todas las células están muertas, en la 5 utilizamos una mezcla
de semillas vivas y muertas, además, en el caso de que por casualidad hubiera alguna
semilla viva en la placa número 4, no sería posible saberlo ya que esta placa sólo ha sido
tratada con agua destilada.

A su vez, en la placa número 5, hemos utilizado cloruro de tetrazolio, el cuál se ha reducido


en las semillas vivas dándoles a estas un color rojizo, en dicha placa hemos obtenido un
40% de células vivas. Aunque creemos que se podría haber obtenido un mayor porcentaje
ya que no se colocaron todas las semillas en contacto con la solución y se nos olvidó dividir
2 semillas.

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Las diferencias entre las placas 1 y 5 es que mientras en la placa 1 utilizamos sólo semillas
vivas, en la placa 5 utilizamos una mezcla de semillas muertas y vivas, nuestro trabajo era
averiguar qué porcentaje habíamos captado de semillas muertas y vivas.

Una forma de evitar que las semillas realicen la respiración celular es desnaturalizando las
enzimas que regulan dicho conjunto de procesos bioquímicos. Esta desnaturalización
puede hacerse a través del calor, de un cambio de pH además de con reactivos químicos…
etc.

No se permite la explotación económica ni la transformación de esta obra. Queda permitida la impresión en su totalidad.
Además del embrión, la capa de aleurona puede tener también actividad respiratoria.

La viabilidad de la semilla no asegura su germinación, ya que esta puede estar en estado


de dormición.

Si una semilla no es viable, no germinará.

Por último, a pesar de que todas las semillas se coloquen en contacto con el tetrazolio, no
tienen por que colorearse todas ya que estas sólo se colorearán o no dependiendo de si
están vivas o muertas.

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7. Conclusión
Sólo seremos capaces de determinar la viabilidad de las semillas si utilizamos cloruro de
tetrazolio.
Si no utilizamos dicha disolución, no se producirá la reducción de esta al entrar en contacto
con semillas vivas las cuales se oxidan al realizar la respiración celular. Por lo tanto no se
obtendrá un color rojizo, esto hace imposible determinar si las semillas están vivas o
muertas.

8. Bibliografía

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