ACT.

TEMA 8 SECUENCIACION 1ºAP

Unidad didáctica 8. Métodos de secuenciación de ácido nucleicos

Ejercicios

1. Respecto del método químico de secuenciación de Maxam y Gilbert, responde en tu cuaderno si son
verdaderas o falsas las siguientes afirmaciones. Justifica las afirmaciones que te parezcan falsas.
a) Se basa en la modificación de las bases nitrogenadas mediante reacciones químicas
específicas.

b) Es un método que requiere marcaje radiactivo con 32P. El marcaje se introduce en cada base
nitrogenada durante la reacción química de modificación.

c) La muestra se divide en cuatro tubos y en cada uno de ellos se realiza una reacción química
específica que modifica una de las cuatro bases.

d) Las reacciones químicas generan fragmentos de distintas longitudes que se separan mediante
electroforesis en gel de poliacrilamida en condiciones desnaturalizantes. Los productos de las
cuatro reacciones químicas se corren en paralelo en calles adyacentes del mismo gel.

e) La lectura del gel se realiza iluminándolo con luz UV y obteniendo una fotografía.

2. En la secuenciación química de un oligonucleótido de ADN se ha obtenido la siguiente imagen

autorradiográfica. ¿Cuál es la secuencia del oligonucleótido?
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3. En una autorradiografía se lee de abajo arriba la siguiente secuencia:

➔ 5’- TTAGGCACGCTGAACG - 3’

¿Cuál es la secuencia definitiva?

4. De todos los reactivos que se listan a continuación, ¿cuáles utilizarías para realizar la reacción de
polimerización en el tubo correspondiente a las adeninas según el método original de secuenciación
de Sanger?

Hebra de ADN molde Cebador sin marcar dTTP

bicatenaria
Taq polimerasa ddATP
Hebra de ADN molde
ADN polimerasa ddCTP
monocatenaria
convencional
ddGTP
Cebador marcado
dATP
con 32P ddTTP
dCTP
Cebador marcado
con fluoróforo dGTP

¿Cuál es la diferencia con los tubos correspondientes a guanina, citosina y timina?

5. Mediante secuenciación enzimática por el método original de Sanger de un oligonucleótido de ADN

se ha obtenido la siguiente imagen autorradiográfica. ¿Cuál es la secuencia del oligonucleótido?
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6. Haz un esquema de los geles de secuenciación por el método de Maxam y Gilbert y por el método de
Sanger del siguiente oligonucleótido:

5’‐AGCTTCGAAC‐3’

3 ‘ TCGAAGCTTG 5’

Método de Maxam y Gilbert: Método de Sanger

7. Respecto a los métodos de secuenciación de 1ª generación, detalla las semejanzas y diferencias que hay
entre el método de secuenciación con cebador fluorescente y el método de secuenciación por
terminador fluorescente.
a) Semejanzas

b) Diferencias
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8. Se han secuenciado dos oligonucleótidos con métodos de 1ª generación. Descifra la

secuencia de ambos a partir de los respectivos electroferogramas, teniendo en cuenta que
en el caso
a) se utilizó un cebador forward:

b) se utilizó un cebador reverse:

La interpretación de los colores es negro ‐ G, azul ‐ C, verde ‐ A y rojo ‐ T.

9. Respecto de la secuenciación de 2ª generación, en una tabla como la siguiente asigna en tu

cuaderno una característica de las parejas de la columna de la derecha a cada uno de los dos
métodos principales de secuenciación: la terminación reversible cíclica y la
pirosecuenciación.
Terminación Pirosecuenciación
reversible cíclica
ADN molde:
1 a) Microesferas / pocillos placa picotiter
b) Molécula única o clusters
Enzimas:
2 a) ADN polimerasa
b) ADN polimerasa, sulfurilasa, luciferasa
dNTPs
3 a) Convencionales sin marcar
b) Marcados con fluoróforos y bloqueados
Señal luminosa
4 a) Fluorescencia
b) Bioluminiscencia
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10. Secuenciación manual: Imagina que vas a realizar la secuenciación manual por el método de
Sanger del siguiente fragmento de ADN.

5'-TCAGTACGCGTGCACCTAG-3'

3'-AGTCATGCGCACGTGGATC-5'

(Recuerda que el orden en el que aparecen cada una de las bases que forman parte del ADN,
es decir la sucesión de letras A , T , C y G es el que determina la información genética
contenida en la secuencia de ADN que va a dar lugar a la codificación de las diferentes
proteínas)
El primer qué vas a utilizar para iniciar la secuenciación es 5'-TCAGT-3'.
Preparas los 4 tubos de reacción y haces una electroforesis con el resultado de las reacciones
de secuenciación de los 4 tubos.

a) Indica los fragmentos que se formarán en cada uno de los tubos durante la reacción de
secuenciación.
b) Dibuja un gel en el que se pueda ver la posición en la que quedarían los fragmentos de
ADN de cada uno de los 4 tubos después de la electroforesis.

11. Lee la siguiente secuencia de nucleótidos obtenida en un secuenciador automático.

En la imagen se puede ver un esquema de la secuencia obtenida en un secuenciador

automático.

El código de colores es: A = Verde; C = Azul; G = Negro; Timina = Rojo.

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Utilizando la bioinformática averigua de qué secuencia puede tratarse. Utiliza la herramienta

BLAST. Elige la opción "otros". Pista: Es un gen muy común que aparece en muchos plásmidos
y del que se ha hablado en esta unidad. Incluye una captura de pantalla de los alineamientos
de las secuencias.