od o s d e

mét e á cidos

ciac ió n d
secuen s
nucl eic o
o l e c u l a r
ogía m
Biol ar avi lés, m ari Carm en

ana A gu il éne z
ayet a Jim
por: c rubio, c r istin
contenidos
CONCEPTO DE

SECUENCIACIÓN
MÉTODOS DE

SECUENCIACIÓN:
MÉTODO

QUÍMICO DE

MAXAM Y

GILBERT
CONCEPTO DE SECUENCIACIÓN
-Determina el orden de los cuatro componentes básicos

químicos, llamados "bases", que forman la molécula de ADN.

-La secuencia les informa a los científicos la clase de

información genética que se transporta en un segmento

específico de ADN.
-Los datos de las secuencias pueden resaltar los cambios en un

gen que pueden causar enfermedades.

-Las cuatro bases químicas se unen siempre con la misma

pareja para formar "pares de bases". Adenina (A) siempre

forma pareja con timina (T); citosina (C) siempre forma pareja

con guanina (G).

La secuenciación de ADN se ha desarrollado de

manera vertiginosa desde 1908 hasta la

actualidad.
Cuando se desarrolló la PCR y la

Hace una década los

Inicialmente se diseñaron
electroforesis capilar, se demostró

procesos automáticos se

que los métodos enzimáticos eran

técnicas manuales,
perfeccionaron dando

más eficientes y automatizables,

pensadas para reacciones

lugar a nuevos métodos

dieron lugar a la secuenciación

químicas o enzimáticas.
enzimáticos, y así nació la

automática de 1ª generación.
Premio Nobel en 1980 secuenciación automática

de segunda generación.

Y en la actualidad

empiezan a aparecer

equipos de 3º generación ,

que son capaces de

secuenciar una única

molécula de ADN.

MÉTODO QUÍMICO DE

MAXAM Y GILBERT CONSTA DE 5 FASES:

MARCAJE DE UNO DE LOS EXTREMOS

El método de secuenciación de ADN de

DE LA MOLÉCULA CON EL ISÓTOPO

Maxam y Gilbert se basa en la

RADIACTIVA 32P
modificación de las bases nitrogenadas

REACCIONES DE MODIFICACIÓN

mediante reacciones químicas específicas.

QUÍMICA DE LAS BASES

Permite secuenciar fragmentos cortos de

NITROGENADAS
ADN y requiere cantidades elevadas de la
ELECTROFORESIS EN EL DE

molécula de ADN purificada. POLIACRILAMIDA DE ALTA

RESOLUCIÓN(10-20%)
AUTORRADIOGRAFÍA DEL GEL
ANÁLISIS DE LA AUTORRADIOGRAFÍA
 MÉTODO QUÍMICO DE MAXAM

Y GILBERT

FASE 1 FASE 2
Lo más adecuado es marcar La concentración de los

reactivos y las condiciones en

el extremo 5’, eliminando

las que se realizan las

primero el fosfato en

reacciones determinan que

posición 5’ del primer

se modifique un número

nucleótido de la cadena

pequeño de bases en cada

mediante una fosfatasa

molécula de ADN. La muestra

alcalina y fosforilándolo de

se divide en cuanto alícuotas

nuevo mediante una

y en cada una de ellas se lleva

polinucleótido kinasa y ATP

a cabo una reacción química

marcado con 32P.

distinta.
MÉTODO QUÍMICO DE MAXAM Y

GILBERT
FASE 3: ELECTROFORESIS
-Permite la purificación, análisis y

caracterización de proteínas.
-Las moléculas son sometidas a un campo

eléctrico.
-Se lleva a cabo en un soporye inerte, sobre gel

de poliacrilamida.
-Posee una serie de ventajas
-Ocurre en condiciones desnaturalizantes
-Se separan por tamaño los fragmentos.
-Los producciones se corren en las calles

adyacentes del gel.

-Imposible detectar actividad enzimática
MÉTODO QUÍMICO DE MAXAM Y GILBERT
FASE 4:
FASE 5:

AUTORRADIOGRAFÍA ANÁLISIS
-La autorradiografía se lleva a cabo
-Permite descifrar la secuencia de la

cuando las moléculas contienen átomos

molécula en estudio según el orden

radiactivos escalonado de las bandas oscuras.

-Si se han inyectado varias mezclas en sus
-Nos proporciona, los resultados de la

pocillos, se producirán separaciones

electroforesis.
paralelas (carriles). -La lectura se
-Proporciona un patrón de bandas
inicia por el extremo
oscuras. inferior
-Separaciones solapadas, si dos
, en sentido 5´-3´.
componentes tienen misma masa.
-Las bandas en diferentes carriles que se

encuentran a la misma altura contienen

moléculas que han atravesado el gel a la

misma velocidad.
VÍDEOS CURIOSOS CON EXPLICACIÓN

DE ESTE MÉTODO

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U.BE/GP0UDY
BE/_B5DJ8PL4

JA6JI E0
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U.BE/DUUMBKI
HTTPS://YOUTU.

BE/V_FG0HRUA

7FBA 68
 BIBLIOGRAFÍA/

WEBGRAFÍA
Libro Biología Molecular y Citogenética, editorial

Altamar.
https://es.wikipedia.org/wiki/Secuenciación_Maxam-

Gilbert
https://www.quimica.es/enciclopedia/Secuenciación

_de_ADN.html
https://www.uco.es/organiza/departamentos/bioqui

mica-biol-
mol/pdfs/16%20ELECTROFORESIS%20GELES%20PA

A.pdf
FIN