UNIVERSIDAD POTOSINA

7MO SEMESTRE

INFECTOLOGÍA

CULTIVOS

Dra. Karla Lorena Salazar

Contreras Trujillo Paulina Iyali

15/03/2023

CULTIVO PARA E. COLI

Escherichia coli es un bacilo gram negativo, anaerobio facultativo de la
familia Enterobacteriaceae, tribu Escherichia.
Esta bacteria coloniza el intestino del hombre pocas horas después del nacimiento y se le considera un microorganismo de
flora normal, pero hay cepas que pueden ser patógenas y causar daño produciendo diferentes cuadros clínicos, entre ellos
diarrea
Cuál es el proceso para realizar un cultivo celular
Todo cultivo celular inicia con un cultivo primario, éste se obtiene ya sea por la propagación de células que migraron de
un fragmento de tejido o por la dispersión enzimática o mecánica de un tejido.
El cultivo primario es el inicio de una serie de procesos selectivos que pueden dar lugar en última instancia a una línea
celular relativamente uniforme. Un cultivo primario está constituido por células seleccionadas con base a su capacidad
para migrar de un fragmento de tejido.
En un cultivo primario después de alcanzar la confluencia, las células cuyo crecimiento es sensible a la inhibición por
contacto dejarán de dividirse, mientras que cualquier célula que haya sufrido transformación (insensibles a la limitación
por densidad) tenderá a proliferar más.
Una vez que las células del cultivo primario llenan el recipiente donde estaban creciendo, se realiza un “pase”, también
llamado primer subcultivo, que consiste en tomar una muestra de esas células y ponerlas a crecer en otro recipiente, como
se explica en el capítulo 11 de este libro. En ese momento, el cultivo primario cambia de nombre y ahora es conocido
como línea finita.
Al tercer pase, la población celular es más estable. En presencia de suero y ausencia de condiciones de selección
específicas, las células mesenquimatosas derivadas del tejido conectivo predominan.
Indagar el protoclo que siguen en un laboratorio de biología molecularpara el desarrollo de dicho cultivo

Protocolo en un laboratorio de biología molecular para el desarrollo de dicho cultivo

El correcto manejo y eliminación de material descartable y de residuos patogénicos se debe realizar según las normas
legales vigentes y de acuerdo al manual de procedimientos de seguridad e higiene establecido en los laboratorios de
biología molecular.
Estas normas de seguridad son equivalentes a las que rigen a los laboratorios clínicos en lo que se refiere a manejo y
descontaminación, así como también a los cuidados orientados a preservar la integridad de los operadores y el medio
ambiente.
1. Para trabajo en laboratorio se deben utilizar prendas de vestir adecuadas, preferiblemente que permitan aislar el 100 %
de nuestro cuerpo y así evitar accidentes por derramamiento
2. Los anillos, manillas y demás accesorios que interfieran con el trabajo en laboratorio deben retirarse antes de iniciar el
procedimiento.
3. Debe usarse zapatos adecuados, completamente cerrados y con suela antideslizante.
4. Las personas con cabello largo deben recogerlo; preferiblemente se debe usar gorro
descartable.
5. Las batas de laboratorio deben ser de manga larga y deben abotonarse completamente
para la protección contra contaminación o accidentes por la manipulación inadecuada de
reactivos.
6. Se debe realizar un lavado de manos al comenzar y al finalizar los procedimientos.
7. Se recomienda el uso de gafas y máscaras de protección para evitar el impacto de objetos, sustancias perjudiciales y luz
ultravioleta.
8. Las sustancias deben ser pipeteadas con micropipeta, peras, pipeteadores; nunca debe
hacerse con la boca.
9. El uso de guantes es exclusivo para la manipulación del material y reactivos utilizados en el procedimiento.
10. Las mujeres en estado de embarazo deben informar de su situación a la persona que esté dirigiendo el laboratorio,
puesto que deberán evitar exponerse a vibraciones, radiaciones.
11. Las áreas de trabajo deberán ser desinfectadas antes y después de ejecutar el trabajo en laboratorio.
12. La manipulación de reactivos, materiales y equipos durante el desarrollo del procedimiento deberá realizarse de
manera correcta bajo la asesoría y supervisión del profesional a cargo
13. Para la manipulación de patógenos se debe estipular el uso obligatorio de una cabina de flujo laminar vertical tipo II,
la cual será desinfectada haciendo uso de alcohol 70 % con
posterior exposición de 15 minutos con luz ultravioleta; después de su uso se debe
proceder de la misma manera.
14. Se debe usar campana de extracción cuando exista posible manipulación de reactivos
peligrosos o solventes orgánicos.
15. Es prohibido comer, beber, fumar, almacenar alimentos y usar cosméticos en el laboratorio.
16. En general se debe mantener un comportamiento adecuado dentro del laboratorio y
cualquier anomalía, debe informarse a la persona responsable de la práctica.
Qué tipo de antibióticos son los que comúnmente utilizan para revisar la resistencia de cultivo celular
Antibióticos de selección para células eucariotas y procariotas:
Blasticidina
Es un antibiótico peptidil-nucleótido aislado de un cultivo de Streptomyces griseochromogenes, cuya función es la de
inhibir la síntesis de proteínas en células eucariotas y procariotas (altera la terminación de la traducción y/o formación del
enlace peptídico
Higromicina-B Gold:
Es un antibiótico aminoglucósido producido por Streptomyces hygroscopius, originalmente desarrollada para un uso
veterinario. Hoy en día, es un antibiótico usado universalmente para la selección y mantenimiento de células tanto
eucariotas como procariotas que portan el gen hph(sintetiza una quinasa que fosforila el propio antibiótico).
Puromicina:
Es un antibiótico aminonucleósido producido por Streptomyces alboniger, con amplio espectro de actuación; sobre
células procariotas, eucariotas, hongos, protozoos y amebas
Fleomicina:
Es un antibiótico metalo-glucopeptídico de la familia de las bleomicinas, isolado de una cepa mutante de Streptomyces
verticillus activo frente la mayoría de bacterias, hongos filamentosos, levaduras; resulta tóxico sobre células animales y
vegetales.
Zeocina:
Se trata de una formulación especial que contiene feomicina D1 (la zeocina es un antibiótico glucopeptídico, análogo a la
fleomicina) con quelación de cobre, aislado de un cultivo de una cepa mutante de S. verticillus.
G418:
Es un antibiótico que bloquea la síntesis de polipéptidos en células eucariotas por medio de la unión irreversible a la
subunidad mayor del ribosoma, interrumpiendo la correcta síntesis proteica.

BIBLIOGRAFIA
 Rodríguez-Angeles, G. (2002). Principales características y diagnóstico de los grupos patógenos de Escherichia
coli. Salud Pública de México, 44(5).
 Manual de Biología Molecular: Procedimientos Básicos / Edith Mariela Burbano Rosero… [et al.].- Pasto:
Editorial Universitaria – Universidad de Nariño, 2017.
 Gutiérrez-Venegas, G., Sánchez-García, S., Golzarri-Moreno, A., Peralta, R., & Hernández Bermúdez, Cristina.
(2014). Evaluación de protocolos de biología molecular en la asignatura de Bioquímica de la Facultad de
Odontología, Universidad Nacional Autónoma de México. Revista Odontológica Mexicana, 18(2), 120–127.