RECOMENDACIONES EN CULTIVOS

Cultivo de bacterias - recomendaciones para el

estudiante, clasificacion de bacterias
INDICE
PRECENTACION

RECOMENDACIONES

bacterias
que es una bacteria
clasificación de bacterias

PRACTICA # 1
Preparación y esterilización de materiales de medio de cultivo.
Preparación del material de vidrio y medios de cultivo.
Esterilización de materiales y medios de cultivo.
Preparación de las cajas de Petri y tubos con medio de cultivo.
Prueba de esterilidad de materiales.

PRESENTACION

La Microbiología, es una ciencia relativamente reciente con respecto a otras ramas de

la biología. El estudio de los microorganismos se inicio a partir de que Antonie van
Leeuwenhoek en 1670 invento el microscopio, y que apartir de los estudios de Luis
Pasteur en 1876, se logro el mayor desarrollo y reconocimiento de los
microorganismos como actores de una gran diversidad de procesos.

Aunque durante mucho tiempo estos organismos causaron graves problemas de

enfermedades en plantas, animales y humanos también es cierto que desde la
antigüedad algunas especies microbianas han sido utilizadas en procesos de
producción de alimentos fermentados como queso, vino, pan y cerveza, entre otros y
actualmente se ha reconocido su importancia en diversas areas de investigación
basica, en la industria alimentaria, ambiental y farmacéutica.

El objetivo general de este manual de cultivo de bacterias es que aprenda los

conocimientos de la biología basica de los microorganismos, en sus características
morfológicas, nutricionales de crecimiento, control y que adquiera las habilidades
necesarias para su manipulación en el laboratorio.Este manual esta dirigido a
estudiantes que iniciaran su experiencia en el manejo de los microorganismos, por lo
que considero de gran importancia incluir al principio del mismo una serie de
recomendaciones relacionadas con las reglas generales del laboratorio y de los
principales procedimientos que el estudiante debera de aprender, para que manipule
en forma adecuada a los microorganismos y garantizar tanto su seguridad como la de
sus compañeros.

RECOMENDACIONES PARA EL ESTUDIANTE

Reglas de laboratorio
Durante las sesiones, siempre debera usar una bata de laboratorio bien abotonada,
que debera quitarse antes de abandonar el laboratorio.

No debera sacar del laboratorio ningún equipo, medios o cultivos microbianos.

Evitara la acumulación sobre la mesa de trabajo de objetos no relacionados con la

practica de laboratorio. Colocara todos los objetos personales (libros, mochilas, etc.)
en la zona especificada por el profesor.

Se prohíbe ingerir y/o almacenar cualquier tipo de alimento o bebida

dentro del laboratorio.

Se prohíbe fumar, aplicar cosméticos o tocarse la cara con las manos o algún
otro objeto. Se debera lavar meticulosamente las manos con jabón y agua
antes de salir del laboratorio, incluyendo cuando salgan por breves momentos.

Por seguridad no debera pipetear oralmente ningún tipo de cultivo microbianos,

esta actividad debera realizarse con pipetas accionadas de forma mecanica o
automatica, tratando de evitar la formación de aerosoles.

No se admitiran visitas personales que distraigan la atención y pongan en

riesgo laseguridad en el trabajo que se realiza.

Procedimientos de laboratorio

Antes y después de cada sesión practica los alumnos deberan limpiar las mesas
de trabajo con el desinfectante que se le proporcionara para este fin.

Cuando se utilice el mechero, este debera colocarse alejado del microscopio y

otros equipos así comode sus cuadernos y otras prendas de vestir.

Al concluir cada sesión el estudiante debera asegurarse de que los materiales

se desecho u objetos contaminados sean colocados en recipientes específicos
para ello, colocados en lugares apropiados, que les indicara el profesor.
Siempre debera dejar perfectamente todos los equipos utilizados (microscopio,
balanzas analíticas, autoclave, potenciometros, etc.) y reportar al maestro
cualquier irregularidad en el funcionamiento.

En caso de producirse un incendio o una herida personal, el alumno debera

notificarlo de inmediato al profesor. En caso de derrame de cultivo o rotura de
recipientes con cultivos activos, debera conservar la calma y ademas de
informar al profesor, seguir inmediato el procedimiento:

Colocar las toallas de papel sobre el material derramado para evitar su

dispersión

Poner abundante solución desinfectante sobre la toallas

Dejar transcurrir al menos 15 minutos, retirar las toallas y tirarla en el

receptaculo destinado a la eliminación de materiales contaminados.

Materiales indispensables en cada sesión de laboratorio

Bata de laboratorio limpia y con botones

el protocolo de la practica y bitacora de laboratorio

un pedazo de tela sin pelusa, cerillos,tijeras, cinta de enmarcar, marcador

permanente o etiquetas pequeñas.

BACTERIAS

¿QUE ES UNA BACTERIA? Las bacterias son microorganismos unicelulares que

presentan un tamaño de algunos micrómetros de largo (entre 0,5 y 5 μm, por
lo general) y diversas formas incluyendo cocos(esferas), basilos(barras) y
espirilos (hélices). Las bacterias son procariotas y, por lo tanto, a diferencia de
las células eucariotas (de animales, plantas, etc.), no tienen el nucleo definido y
presenta organulos internos de locomoción. Generalmente poseen una pared
celular compuesta de peptidoglicano. Muchas bacterias disponen de flagelos o
de otros sistemas de desplazamiento y son móviles. Del estudio de las bacterias
se encarga la bacteriología, una rama de la microbiología.
Las bacterias son los organismos mas abundantes del planeta. Son ubicuas, se
encuentran en todos los habitats terrestres; crecen hasta en los mas
extremos como en los manantiales de aguas calientes y acidas, en desechos
radioactivos, en las profundidades tanto del mar y como de la corteza terrestre.
Algunas bacterias pueden incluso sobrevivir en las condiciones
extremas del espacio exterior. Se estima que se pueden encontrar en torno a
40 millones de células bacterianas en ungramo de tierra y un millón de células
bacterianas en un mililitro de agua dulce. En total, se calcula que hay
aproximadamente 5×1030 bacterias en el mundo.

Las bacterias son imprescindibles para el reciclaje de los elementos, pues

muchos pasos importantes de los ciclos biogeoquímicos dependen de
éstas. Como ejemplo cabe citar la fijacióndel nitrógeno atmosférico. Sin
embargo, solamente la mitad de los filos conocidos de bacterias tienen especies
que se pueden cultivar en el laboratorio, por lo que una gran parte (se supone
que cerca del 90%) de las especies de bacterias existentes todavía no ha sido
descrita.

En el cuerpo humano hay aproximadamente diez veces tantas células

bacterianas como células humanas, con una gran cantidad de bacterias en la
piel y en el tracto digestivo. Aunque el efecto protector del sistema inmune
hace que la gran mayoría de estas bacterias sea inofensiva o beneficiosa,
algunas bacterias patógenas pueden causar enfermedades infecciosas,
incluyendo cólera, sífilis, lepra, tifus, difteria, escarlatina, etc. Las
enfermedades bacterianas mortales mas comunes son las infecciones
respiratorias, con una mortalidad sólo para la tuberculosis de cerca de dos
millones de personas al año.

En todo el mundo se utilizan antibióticos para tratar las infecciones

bacterianas. Los antibióticos son efectivos contra las bacterias ya que inhiben la
formación de la pared celular o detienen otros procesos de su ciclo de vida.
También se usan extensamente en la agricultura y la ganadería en ausencia de
enfermedad, lo que ocasiona que se esté generalizando la resistencia de las
bacterias a los antibióticos. En la industria, las bacterias son importantes en
procesos tales como el tratamiento de aguas residuales, en la producción de
queso, yogur, mantequilla, vinagre, etc., y en la fabricación de medicamentos y
de otros productos químicos.

Aunque el término bacteria incluíatradicionalmente a todos los procariotas,

actualmente la taxonomía y la nomenclatura científica los divide en dos
grupos. Estos dominios evolutivos se denominan Bacteria y Archaea
(arqueas). La división se justifica en las grandes diferencias que presentan
ambos grupos a nivel bioquímico y en aspectos estructurales.

CLASIFICACION DE BACTERIAS

Cocos: forma esférica u ovalada

Estreptococos (en cadena).

Diplococos (dobles).

Estafilococos (en racimos).

Bacilos: en forma de bastón.

Espirilos: en forma de espiral.

Vibrios: en forma de coma.

· Estructura de las bacterias

-Capsula: no es constante, es una capa gelatinosa de tamaño y composición

variable formada de polisacaridos.

-Pared celular: es rígida, dúctil y elastica. Su originalidad reside en la

naturaleza química delcompuesto macromolecular que le confiere su
rigidez. Formada por peptiglucal y acido teitoico.
-Membrana celular: semejante a la membrana celular, es una envoltura que
rodea al citoplasma.

-Citoplasma: masa de materia viva donde se encuentran los ribosomas (que

intervienen en la fabricación de proteínas) y granos de grasa o de glúcidos que
le sirven de almacén. En las bacterias autótrofas se encuentran cromatóforos,
donde se almacena la clorofila.

-Plasmidio: formado por DNA, de forma circular.

-Flagelos: no existen mas que en ciertas especies. Filamentosos y de longitud

variable, constituyen los órganos de locomoción. Según las especies, pueden
estar implantados en uno o en los dos polos de la bacteria o en todo su
entorno. Constituyen el soporte de los antígenos 'H'.En algunos bacilos Gram
negativos se encuentran Pili, que son apéndices mas pequeños que los cilios y
que tienen unpapel fundamental en genética bacteriana.

-Pili: estructura que sirve de adherencia a la superficie. Sirve de puente

citoplasmatico entre la transferencia de información genética.

-Ribosomas: son granulos y se componen generalmente de RNA.

-Mesosoma: repliegue de la membrana celular, tiene gran importancia en la

división celular y la reparación de la célula.

Las paredes de las células de las bacterias pueden ser:

Gram positivas: tienen una pared gruesa, es decir mas capas. Se tiñen con
tinsón yoduro yodurado. Tiene capa gruesa de peptidoglical y acido teitoico

Gram negativas: tienen una pared delgada, una capa. No se tiñen con yoduro
yodurado sino con suframina. Tienen una capa de peptidoglical y por fuera una
membrana externa.

· Reproducción de la bacteria

Generalmente las bacterias se reproducen por bipartición, como se ve en el

siguiente esquema

Tras la duplicación del ADN, que esta dirigida por la ADN-polimerasa que se
encuentra en los mesosomas, la pared bacteriana crece hasta formar un
tabique transversal separador de las dos nuevas bacterias.

Pero ademas de este tipo de reproducción asexual, las bacterias poseen unos
mecanismos de reproducción sexual o parasexual, mediante los cuales se
intercambian fragmentos de ADN.

Puede realizarse por:

Transformación: Consiste en el intercambio genético producido cuando una

bacteria es capaz de captar fragmentos de ADN, de otra bacteria que se
encuentran dispersos enel medio donde vive.
Transducción: En este caso la transferencia de ADN de una bacteria a otra, se
realiza a través de un virus bacteriófago, que se comporta como un vector
intermediario entre las dos bacterias.

Conjugación: en este proceso, una bacteria donadora F+ transmite a través de

un puente o pili, un fragmento de DNA, a otra bacteria receptora F-. La bacteria
que se llama F+ posee un plasmidio, ademas del cromosoma bacteriano.

· Bacterias patógenas

Casi 200 especies de bacterias son patógenas para el ser humano, es decir,
causantes de enfermedades. El efecto patógeno varía mucho en función de las
especies y depende tanto de la virulencia de la especie en particular como de
las condiciones del organismo huésped.

Los efectos patógenos provocados por las bacterias en los tejidos pueden
agruparse en las cuatro clases siguientes:

1.- efectos provocados por la acción directa local de la bacteria sobre los
tejidos, como en la gangrena gaseosa causada por Clostridium perfringens.

2.- efectos mecanicos, como cuando un grupo de bacterias bloquea un vaso

sanguíneo y causa un émbolo infeccioso.

3.- efectos de respuesta del organismo ante ciertas infecciones bacterianas en

los tejidos, como las cavidades formadas en los pulmones en la tuberculosis, o
la destrucción de tejido en el corazón por los propios anticuerpos del organismo
en las fiebres reumaticas.

4.- efectos provocados por toxinas producidas por las bacterias, sustancias
químicas que resultan tóxicas en algunos tejidos. Las toxinas son, en general,
específicas de cada especie; porejemplo, la toxina responsable de la difteria es
diferente de la responsable del cólera.

· Bacterias resistentes

La aparición de bacterias con resistencia a antibióticos y otras drogas

antimicrobianas fue, es y probablemente seguira siendo uno de los grandes
problemas de la medicina. Su causa es el mecanismo mas basico de la
evolución de los seres vivos: la mutación espontanea y la recombinación de los
genes durante la reproducción, que al crear variabilidad permite que actúe la
selección natural. Esto favorece el desarrollo de las variantes que mejor se
adaptan al ambiente. Cuando las bacterias se desarrollan en medios que
contiene una droga antibacteriana, sólo creceran aquellas que por mutación
adquirieron genes que confieren resistencia; mientras que no lo haran las que
son sensibles a la droga. Este caso de selección natural hace que con el
correr del tiempo todas las bacterias sean resistentes a la droga.

Entre los factores que favorecen la selección y la diseminación de genes que

confieren resistencia, cabe mencionar:

· El uso indiscriminado de las drogas antibacterianas.

· La exposición de las bacterias a otros agentes capaces de seleccionar

variedades resistentes. Unejemplo es la exposición al mercurio, presente en
algunos desinfectantes.

· El aumento en la población de pacientes cuyo sistema inmune se encuentra

deprimido (enfermos de SIDA, pacientes que han recibido transplantes de
órganos y pacientes sometidos a tratamientos contra el cancer). Estas
condiciones favorecen la aparición de infecciones, llamadas oportunistas, que
debenser tratadas mediante el suministro prolongado y en dosis altas de drogas
antibacterianas.

· El uso de antibióticos en la alimentación de animales.

· El desarrollo de los medios de transporte que permite la rapida diseminación

de cepas resistentes.

Uno de los hechos que preocupan es que, a pesar del esfuerzo de los
científicos, se esta tornando cada vez mas difícil encontrar nuevos antibióticos.
Por ejemplo, las penicilinas ya han llegado a la sexta generación, las
cefalosporinas, a la cuarta y las quinolonas, a la tercera. Mientras tanto estan
apareciendo cepas de bacterias causantes de enfermedades infecciosas que se
consideraban ya dominadas, las cuales adquirieron resistencia a las drogas mas
indicadas para combatirlas.

SEGUN SU GRAM

La tinción de Gram es un tipo de tinción empleado en microbiología para la

visualización de las bacterias, debe su nombre al bacteriólogo danés Christian
Gram que desarrolló un método de tinción en 1884.

Por mas de una centuria las bacterias han sido clasificadas a la reacción de
Gram, la habilidad de retener un complejo de iodo violeta cuando se trata con
con un solvente organico tal como el alcohol o la acetona , las bacterias Gram
positivas retienen la tintura y aparecen de color violeta, mientras que las Gram
negativas no lo pueden retener y se tiñen de color rojo para ser vistas con el
microscopio, como se muestra a continuación.

Preparación y esterilización de materiales

y medio de cultivo

Objetivos

Conocer los principios generales de las técnicas de esterilización de los

materiales de vidrioy medios de cultivo en uso común en el
laboratorio. Observar el efecto de las condiciones de asepsia en el control de la
contaminación microbiana en el lab.

Introducción

Los microorganismos como otros seres vivos, son susceptibles a los cambios de
condiciones ambientales y en la medida en que se han podido adaptar a estos
cambios, se han distribuido en una gran diversidad de habitats incluyendo los
de condiciones extremas sobre todo de tipo físico y químico.
Se han desarrollado y aplicado diversos procesos de desinfección y
esterilización para limitar su presencia o eliminarlos. La esterilización
es un método de eliminación total de todo tipo de organismos y que asegura la
ausencia absoluta de cualquier forma viviente, mientras que la desinfección es
un proceso que solamente elimina formas vegetales de los microorganismos.

La esterilización con calor seco y húmedo son los procedimientos de mayor

utilización en Microbiologia. El calor seco desnaturaliza las enzimas y destruye a
los microorganismos por oxidación, por ejemplo al ponerlos directamente a la
flama de un mechero o en horno a150-180ºC durante 2 horas. Estos métodos
se aplican principalmente en la esterilización de asas de inoculador y todo tipo
de material de vidrio y quirúrgico.

Los procesos con calor húmedo se aplican para esterilizar medios de cultivo,
soluciones, y cultivos bacterianos que se desechan, el mas recomendable es el
autoclave en el que se utiliza vapor de agua a presión para alcanzar
temperaturas de 121ºC. El material se deja a esta temperatura durante 15
minutos paraasegurarse de la destrucción de endoesporas, que son las
estructuras bacterianas mas resistentes al calor.

Cuando se requiere esterilizar diferentes materiales sensibles al calor como las

soluciones de vitaminas, aminoacidos, etc. se esterilizan por filtración en
membranas estériles de 0,2 micras de diametro y para el caso de materiales de
plastico es recomendable el uso de gases como oxido de etileno o con
radiaciones gamma. Las superficies generales se desinfectan son radiaciones
U.V. O compuestos químicos en forma liquida como: los fenoles, compuestos
cuaternarios de amonio, formaldehido, alcoholes, halogenos y detergentes.

Cada uno de estos procedimientos tienen ventajas y desventajas de uso, los

sistemas de filtración son muy eficientes y rapidos para la esterilización pero
solo se aplican en pequeños volúmenes. Los fenoles y compuestos cuaternarios
de amonio son muy efectivos para la desinfección de superficies pero son muy
corrosivos. Los detergentes y los alcoholes tienen actividad limitada contra
esporas bacterianas y algunos virus por lo que solo son desinfectantes.

Materiales

7 tubos de cultivo de 16 x 150 mm con tapón de baquelita

3 tubos de cultivo de 16 x 150 mm sin tapón de baquelita

9 cajas de Petri de vidrio

3 pipetas de 1 o 2 mL

3 pipetas de 10 mL

1 pipeta Pasteur

3 matraces Erlenmeyer de 250 mL

1 parrilla de calentamiento con agitación

1 autoclave
 1 ponteciometro

1 horno de calor seco

1 mechero Fisher

1 incubadora a 35º

1 isotopo estéril, algodón y gasa

papel manila o estraza para envolver

QUE SIGNIFICA TENER UNA BUENA SIEMBRA

BACTERIANA

Diferentes Métodos de Siembra

- Sembrar: Es el acto de colocar el material
bacteriológico en el medio de cultivo para promover
su crecimiento y desarrollo, y subsiguiente
multiplicación.
El resultado de una siembra se llama: Cultivo
 Las siembras pueden ser:
- Primarias: cuando el material es inoculado en los
medios por primera vez
- Secundarias: cuando el material a inocular procede
de una siembra primaria
Métodos Generales:
1) Siembra por dilución: Se toma el tubo de ensayo
con medio líquido, como el caldo simple. Se toma el
material a diluir y se siembra en el tubo con el uso del
asa cargada con el material bacteriológico, se agita,
con movimientos moderados.
Medio de cultivo: Liquido
Instrumento: Asa
Finalidad: poner la bacteria en suspensión
2) Siembra por estrías en superficie: Se siembra el
material en la superficie de el agar inclinado en un
tubo de ensayo, allí se extiende por toda la superficie
con el asa bacteriológica, previamente esterilizada y
cargada con el material a sembrar, haciendo estrías
no muy amplias, pero tampoco muy estrechas. Se
inicia por la parte más profunda de la superficie
inclinada y se termina la estría en la parte más cerca
de la boca del tubo.
Medio de cultivo: agar base inclinado
Instrumento: asa o aguja bacteriológica

3) Siembra por estría por agotamiento:

3) Siembra por estría por agotamiento: Con éste

procedimiento se puede conseguir una buena
separación de las colonias y aislarlas fácilmente. Para
ello se funde el medio de cultivo, se vuelca en caja de
Petri y se deja solidificar. Con el asa previamente
esterilizada se toma material de un cultivo
heterogéneo y se descarga sobre la superficie del
medio formando estrías. Esto puede realizarse de
varias formas:
a- Al comienzo se coloca el inoculo, luego se continúa
con las estrías. Cuando se quiere obtener colonias
muy separadas se puede utilizar dos o tres placas de
Petri, para lo cual se repite la operación sin tomar con
el asa nuevo material.
b- Se puede dividir la placa de Petri en cuatro
cuadrantes; una vez depositado el material en el
primero, siguiendo el sentido de las agujas del reloj,
se hace una estría luego en el segundo, tercero y
cuarto cuadrante sin cargar nuevamente el asa; en el
último cuadrante aparecerán las colonias aisladas
c- El inóculo se extiende sobre una pequeña zona de
la placa, próxima al borde, se esteriliza el asa y se
traza otra estría a partir del depósito y así
sucesivamente.
Medio de cultivo: solido en placa de Petri
Instrumento. Asa
Finalidad. Obtener colonias aisladas

4) Por picadura o punción: Con una aguja se toma

el material que se quiere sembrar y se lo introduce en
el tubo, con medio semisólido. Introducir la aguja
hasta el fondo, formando un canal de punción,
trayecto por el cual la retiraremos luego. Este método
se utiliza para estudiar la movilidad de las bacterias.
Medio de cultivo. Semisólido
Instrumento: aguja bacteriológica
Finalidad: Estudiar la movilidad de las bacterias
5) Siembra en TSI: (Por picadura y estrías en
superficie): el TSI (Triple Sugar Iron) es un medio
que contiene glucosa, sacarosa y lactosa, hierro y un
indicador que es el rojo fenol.
En este medio sembraremos por picadura y estrías en
superficie, como ya conocemos, para estudiar los
cambios que ocurrirán en superficie y profundidad. A
lo largo del canal se desarrollan los microorganismos,
y según lo hagan en la parte superior o inferior del
tubo, estarán indicando su comportamiento frente a
los azucares, los cambios indican lo siguiente:

TINCION GRAM Y ARGUMENTO CRITICO

Hans Christian Joaquim

Gram (1853-1938)
EN 13 SEPTIEMBRE 2014 POR JOSÉ L. FRESQUET
FEBREREN ANIVERSARIOS, BIOGRAFÍAS , RECURSOS

Tal día como hoy, pero de 1853, nació en Copenhague Hans Christian
Joachim Gram, figura que asociamos con la historia de la microbiología. Su
padre fue Frederik Terkel Julius Gram, abogado y profesor de
jurisprudencia; su madre fue Louise Christiane Roulund.
Recibió el titulo de bachiller de la Escuela Metropolitana de Copenhague en
1871. Por entonces ya era ayudante del profesor de botánica y zoología
Japetus Steenstrup. El conocimiento de estas disciplinas fue decisivo para su
posterior dedicación a la farmacología y a la microbiología.

Estudió medicina en la Universidad de Conpenhague y obtuvo el título en

1878. Durante varios años ejerció como interno, y después como médico
residente, en el Hospital Municipal de Copenhague. Realizó investigaciones
sobre el número y tamaño de los glóbulos rojos que le hicieron merecedor, en
1882, de una medalla de oro de su Universidad. Su tesis doctoral trató este
tema.

Como era habitual entonces, Gram viajó por Europa durante dos años
formándose en farmacología y bacteriología. Estudió en Estrasburgo,
Marburgo y Berlín. De regreso a Copenhague se habilitó y estuvo de
ayudante de farmacología entre 1886 y 1889. En 1891 alcanzó el grado de
profesor, cargo que desempeñó hasta 1900. Después permutó esta cátedra
por la de patología y terapéutica. En 1892 fue nombrado jefe de Medicina
interna en el Hospital Kongelige Frederiks, puesto que mantuvo hasta su
jubilación en 1923.

La figura de Gram es conocida porque su nombre se convirtió en epónimo

que todavía hoy sigue utilizándose, aunque algunos desconocen, sin duda, su
origen. Gram estudió las técnicas de tinción de las bacterias, trabajo que
desarrolló en Berlín cuando trabajaba con Karl Friedländer (1847-1887). Sus
hallazgos se publicaron en la revista Fortschritte der Medezin. Gram señaló
que “He publicado un método, aunque soy consciente de que todavía es
defectuoso e imperfecto; pero deseo que en manos de otros investigadores
pueda resultar de utilidad”.
Mientras analizaba los tejidos de los fallecidos por pulmonía descubrió que
algunas mantenían la coloración y otras no. Realizó la tinción con violeta de
genciana, después la fijó con lugol; luego las lavó con etanol. Había bacterias
que retenían el color y aparecían de color violeta al micoscopio y otras que
no. Más tarde Carl Weigert incorporó un nuevo paso al proceso; añadió
safranina después del lavado con etanol. De esta manera las bacterias que no
retenían la coloración morada aparecían teñidas de rojo, y fueron llamadas
gram negativo, frente a las que sí se teñían primitivamente de violeta que
eran las gram positivo.

Gram fue en realidad un gran clínico. Sus trabajos sobre el tema se

convirtieron en todo un clásico en Dinamarca, especialmente los cuatro
volúmenes de su Klinisk-therapeutiske Forelæsninger, que se publicaron entre
1902 y 1909. Los aspectos sobre terapéutica son especialemente interesantes.
Mantuvo una consulta privada que tuvo mucho éxito y que abandonó cuando
se jubiló en 1923.

Recibió en vida el reconocimiento de sus colegas y de las instituciones de

varios países. Murió en Copenhage el 14 de noviembre de 1938.

José L. Fresquet Febrer

Universitat de València (Spain)

Bibliografía
Madani, Kaivon. Dr. Hans Christian Jaochim Gram: inventor of the Gram
stain. Primary Care for OB/GYNS, 2003; 10(5): 235-237.
Snorrason, E. Gram, Hans Christian Joachim.
En: Encyclopedia.com [Complete Dictionary of Scientific Biography, 2008].
Disponible
en: http://www.encyclopedia.com/topic/Hans_Christian_Joachim_Gram.a
spx. Consultado el 27 de agosto de 2014.