BIOTECNOLOGÍA: TÉCNICAS CELULARES

1. Biotecnología: uso de cultivos celulares y tisulares (pp. 4-29).

2. La Biotecnología en valoraciones de problemas ambientales

(Biotecnología en ecotoxicología) (pp. 30-31).
3. Biotecnología ecotoxicológica con sistemas biológicos
animales: Las biovaloraciones (pp. 33-78).

4. Biotecnología celular eucariótica vegetal (pp. 80-107).

5. Biotecnología ecotoxicológica con sistemas biológicos

vegetales (pp. 109-129).
6. Biotecnología de las transfecciones y la diferenciación
celular dirigida (pp. 131-150):
6.1. Aplicaciones biotecnológicas en sistemas biológicos
animales (pp. 152-168).
Rafael
6.2. Aplicaciones biotecnológicas en sistemas biológicos Torronteras
vegetales (pp. 170-178). Santiago

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 6.1. BIOTECNOLOGÍA CELULAR
EUCARIÓTICA APLICADA A
SISTEMAS BIOLÓGICOS
ANIMALES

Aplicaciones biotecnológicas de
la transfección y diferenciación
en células y/o tejidos animales

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 Terapia Génica Sustitutiva

Gen
defectuoso
Integración
del gen sano

Células sanas
Tipo celular diferenciado

3
 DIFERENCIACIÓN DIRIGIDA

1. Inserción de genes específicos: Terapia génica en mamíferos

4
 DIFERENCIACIÓN DIRIGIDA
Terapia génica en animales (ratón).
Inserción del gen de hormona del crecimiento en rata

5
 DIFERENCIACIÓN DIRIGIDA

1. Inserción de genes. Modificación organismos. Bioproducción

6
 EXPERIMENTACIÓN CON CTP-I
NEURONAS DERIVADAS DE CTP-I OBTENIDAS A PARTIR DE CÉLULAS
CUTÁNEAS DE UNA PACIENTE CON PARKINSON.
ESTUDIO DE LA MUTACIÓN CAUSANTE DEL PARKINSON

7
 Bioingeniería en Terapia Génica:
Los rechazos inmunológicos

Bioingeniería Genética

Eliminación
Genes MHC Tejido sin MHC

Células Troncales
Sustitución
genes MHC Tejido con MHC
igual al receptor

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 DIFERENCIACIÓN

1. Señales internas: Control génico de la propia célula

Sustancias secretadas por otras células

2. Señales externas Contacto físico con las células vecinas
Moléculas del microambiente

DIFERENCIACIÓN DIRIGIDA

1. Inserción de genes específicos

2. Modificación de las condiciones de cultivo

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 Obtención de las células troncales
embrionarias

Blastocisto
Masa celular
interna a

Células disociadas y
sembradas
Capa alimenticia de fibroblastos de ratón

Nueva capa alimenticia de fibroblastos de ratón

LÍNEA DE CÉLULAS MADRE EMBRIONARIAS

10
 DIFERENCIACIÓN DIRIGIDA

2. Modificación del medio de cultivo

Células madre
embrionarias
Eliminación de capa alimenticia
indiferenciadas

Cuerpos embrionarios

Medio N2, bFGF, Medio N2, bFGF,

laminina medio B27

Células precursoras Células precursoras

de neuronas pancreáticas

Eliminación de bFGF,
Eliminación de bFGF
adición de nicotinamida

Células
Neuronas productoras de
insulina
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 APLICACIONES CON CÉLULAS TRONCALES

Experimentación animal:
Curación de ratones diabéticos tratados
con células madre embrionarias y adultas de páncreas

Ratón diabético
Diferenciación

AA

Secreción
de insulina Células tipo islote
12
pancreático
APLICACIONES CLÍNICAS CON CÉLULAS TRONCALES DE ADULTO

Regeneración del músculo cardíaco humano

Inyección de células troncales musculares

Clínica Universitaria de Navarra Adulto 72 años
Hospital Bichat Claude Bernard. Paris.

Células
mioblastos

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 Biotecnología con Células Troncales
Identificar Comprender
lugares acción Prevenir y
de Estudio de la
Diferenciación Tratar los
medicamentos
y test celular defectos de
terapéuticos nacimiento
potenciales Cultivos de Células
Madre Pluripotentes

Tests de Células/Tejidos para Gen

Terapia
Toxicidad Trasplantes
Terapy
Génica

Médula Ósea Neuronas para Células Células de los

para musculares islotes
enfermedades cardíacas para
leucemia y de Parkinson y pancreáticos
quimioterapia enfermedades para diabéticos
Alzheimer del corazón

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 BIOTECNOLOGÍA TISULAR:
Hacia la Reconstrucción de Tejidos y Órganos

1. Células encapsuladas
- células secretoras de insulina
- células cromafines (tratamiento dolor crónico)
- células hormona crecimiento (para enanismo)
- células secretoras de endostatina (sustancia antiangiogénica)
- células factor neurotrófico ciliar (retinosis pigmentaria)

2. Ingeniería de Tejidos y Órganos:

15
 HACIA LA RECONSTRUCCIÓN DE
ÓRGANOS Y TEJIDOS

3. Estructuras organizadas tridimensionalmente

- Prótesis óseas biológicas (trozos coral + células madre mesénquima)

- vejiga urinaria en perros (células músculo liso + células interior)
- arterias funcionales artificiales (células lisas + células endoteliales)

- Tejidos artificiales aprobados:

Transcyte (células dermis, quemaduras)

Dermagraf (fibroblastos dermis, úlceras pies diabéticos)
Apligraf (dermis y epidermis del prepucio, úlceras)
Carticel (condrocitos paciente, cartílago rodillas), y
16 Chondrocel (condrocitos autológos, reflujo e incontinencia).
HACIA LA RECONSTRUCCIÓN DE ÓRGANOS Y TEJIDOS

© CARTICEL (condrocitos paciente,

cartílago rodillas), © TRANSCYTE (células dermis, quemaduras)

17
© DERMAGRAF (fibroblastos dermis, úlceras pies diabéticos)
 Líneas celulares: ejemplos

• BHK: Fibroblastos de riñón de hamster sirio dorado

• CrFK: Fibroblastos de riñón de gato doméstico
• MDCK: Epitelio de riñón canino (Cocker Spaniel)
• CHO: Epitelio de ovario de hamster chino
• VERO: Fibroblastos de riñón de mono verde africano
• HeLa: Epitelio tumoral de cuello uterino humano
• MDBK: Epitelio de riñón de bovino adulto
• HUVEC: Endotelio de vena umbilical humana
• FHBE: Endotelio de corazón fetal bovino.
• RTG-2: Células gonadales de peces (trucha).
• BF-2: Fibroblastos de tronco caudal de peces
(bluegill, lepomis).
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 BIOTECNOLOGÍA: TÉCNICAS CELULARES

1. Biotecnología: uso de cultivos celulares y tisulares (pp. 4-29).

2. La Biotecnología en valoraciones de problemas ambientales

(Biotecnología en ecotoxicología) (pp. 30-31).
3. Biotecnología ecotoxicológica con sistemas biológicos
animales: Las biovaloraciones (pp. 33-78).

4. Biotecnología celular eucariótica vegetal (pp. 80-107).

5. Biotecnología ecotoxicológica con sistemas biológicos

vegetales (pp. 109-129).
6. Biotecnología de las transfecciones y la diferenciación
celular dirigida (pp. 131-150):
6.1. Aplicaciones biotecnológicas en sistemas biológicos
animales (pp. 152-168).
6.2. Aplicaciones biotecnológicas en sistemas biológicos Rafael
vegetales (pp. 170-178). Torronteras
Santiago
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 6.2. BIOTECNOLOGÍA CELULAR
EUCARIÓTICA APLICADA A
VEGETALES

- Biotecnología vegetal de clonado

- Biotecnología vegetal agrario-sanitaria

- Biotecnología vegetal industrial

- Bioingeniería metabólica vegetal
- Biotecnología vegetal de bio-producción

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 Tecnología de Clonado molecular en vegetales

• Vectores de clonado
(plásmidos o virus):
Vectores en los que la
secuencia de ADN es
introducida usando una
DNA ligasa.
Cuando es necesario, el
fragmento de ADN de
interés puede ser
liberado del vector por
medio de enzimas de
restricción.

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 Tecnología de Clonado molecular

Una vez aislados los

genes de interés son
incorporados al
organismo blanco, a
través de cultivos
celulares y resultando
en un organismo
genéticamente
modificado (OGM) y
esta característica
adquirida pasa a ser
hereditaria.

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 Resistencia a insectos en el campo agrario y medio ambiental
• Puede ser obtenida mediante la utilización de inhibidores vegetales de
proteasas o a partir de toxinas bacterianas (Bacillus thuringiensis).
• Como ejemplos de plantas resistentes a insectos están el maíz, batata y
soja transgénicos.
Tolerancia a herbicidas en el campo agrario y medio ambiente
• Esta modalidad engloba a la mayor parte de las plantas transgénicas
actuales.
• Ejemplos: maíz, eucalipto, soja, caña de azúcar

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 Resistencia a virus en el campo agrario y medio ambiente

• Las perspectivas son cada vez mayores a medida que aumentan los
conocimientos acerca de fitovirus.
• protección mediada por ARN.
• Por medio de la tecnología del Agrobacterium tumefaciens o de la
biolística y el cultivo de tejidos, es posible introducir en la planta
genes de la cápside viral posibilitándose así la adquisición de
resistencia por parte de la planta.

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 Alteración del color floral

• Dentro del mercado de la

floricultura se abren nuevas
perspectivas con el clonado de
genes asociados con la
coloración de las flores.

• También se abre la posibilidad

de modificar la arquitectura
de la planta y de las flores, las
fragancias y la mayor
durabilidad de las flores.

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Obtención de nuevos productos y alteración de la calidad nutricional

• Producción de ácido oleico.

• Tubérculos con mayor contenido de almidón.
• Arroz Dorado: Arroz genéticamente modificado que produce
beta- carotenos (precursor de la vitamina A), etc. (Fundación
Rockefeller y la UE; Univ. Friburgo; Univ. de Córdoba, España).

Bioingeniería metabólica

• Es posible alterar rutas metabólicas para permitir que las

plantas, o sus células, funcionen como bioreactores (reactores
biológicos).
• Es posible, de esta manera, la producción de sustancias de valor
farmacológico, como por ejemplo, vacunas y biofármacos.
• La manipulación del metabolismo secundario de vegetales, por
medio de la transformación genética, promete ser una de las
contribuciones más importantes de la bioingeniería genética
aplicada a la industria.
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 Micropropagación

• Mantiene la identidad genética del material propagado sin

introducir ninguna variabilidad genética
• Propagación clonal rápida (floricultura, fruticultura, plantas
medicinales, silvicultura)
• Eliminación de virus (cultivo de meristemos) hibridación o fusión
somática (fusión de protoplastos)
• Bancos de germoplasma
• Semillas sintéticas (embriones somáticos recubiertos de gel de
alginato que también encapsula nutrientes para el desarrollo del
embrión)

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