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Producción, optimización de alfa amilasa de Bacillus altitudinus

ArtículoenRevista Internacional de Investigación Científica y de Ingeniería · Enero 2014

CITAS LEE
7 12,459

6 autores, incluido:

Ajay Kumar Singh Yashab Kumar

Sam Higginbottom Universidad de Agricultura, Tecnología y Ciencias Sam Higginbottom Universidad de Agricultura, Tecnología y Ciencias

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 ISSN 2319-8885
Vol.03, Número.04,
Abril-2014,
Páginas:0564-0573
www.semargroup.org,
www.ijsetr.com

Optimización de la Producción de Alfa Amilasa de Bacillus Altitudinis

YASHABkUMAR1, PAGRADEEPkUMARSINGH2, AARRENDAJOkUMARSINGH3, hARISONMETROASIH4, jYOTSNAkIRÁN
6 7
PAGETER 5, jANECB
ENJAMÍN, SANATRATH
1Research ScholaDr, ept of Microbiology and Fermentation Technology, mSHiggibottom Institute of Agriculture,

Tecnología y Ciencias, Allahabad, UP, India.

2Research ScholaDr, ept of Microbiology and Fermentation Technology, mSHiggibottom Institute of Agriculture,
Tecnología y Ciencias, Allahabad, UP, India.
3Research ScholaDr, ept of Microbiology and Fermentation Technology, mSHiggibottom Institute of Agriculture,
Tecnología y Ciencias, Allahabad, UP, India, Emsainil: ghs_ajay@rediffmail.com.
4Research ScholaDr, ept of Microbiology and Fermentation Technology, mSHiggibottom Institute of Agriculture,

Tecnología y Ciencias, Allahabad, UP, India.

5Research ScholaDr, ept of Microbiology and Fermentation Technology, mSHiggibottom Institute of Agriculture,
Tecnología y Ciencias, Allahabad, UP, India.
6Research ScholaDr, ept of Microbiology and Fermentation Technology, mSHiggibottom Institute of Agriculture,
Tecnología y Ciencias, Allahabad, UP, India.
7Research ScholaDr, ept of Microbiology and Fermentation Technology, mSHiggibottom Institute of Agriculture,
Tecnología y Ciencias, Allahabad, UP, India.

Abstracto:α-Las amilasas son una clase de enzimas que degradan el almidón. ateaslyzcing la hidrólisis de interna Enlaces αl-1,4-O-glucosídicos
en polisacáridos y juega un papel fundamental en raievtya de áreas como el uso como digestivos, para el upcrotidon de etanol y jarabe de maíz
de alta fructosa, detergentes, deseando tesx, tm almidones odificados, hidrólisis de yacimientos petrolíferos ll fluidos, y reciclaje de papel.
plataforma

En el presente trabajo, la fermentación sumergida (Sm oF-) - se ha utilizado la producción de familasa. bacilo uiln se ha utilizado titisud
para la producción de alfa amilasa y fue probado ng fermentación sumergida. Bacillus altitudisnhiseed máximo
producción de enzima a 40°C durante 48 horas a pH 7.h0e. TLa producción máxima de enzimas se obtuvo mientras su mpepnle
ting almidón como
fuente de carbono, sulfato de amonio y levadura exatnradc2t 0,5% de concentración de sal.

Palabras clave:αAmilasa, Bacillus Altitudinis, Sumergido Fermeinotna.t

I. INTRODUCCIÓN como en la industria alimentaria, textil, papelera , creación de dbr,

Hoy en día, la aplicación de enzimas en el sector industrial jarabes de glucosa y fructosa, detergentes, combustible o elthfaronm

está aumentando debido al aumento de la industria, almidones, jugos de frutas, bebidas alcohólicas, swneeerste,
especialmente en alimentos, bebidas y textiles, cueroIndustrias.
y papel. ayuda digestiva y quitamanchas en limpieza en seco h(K Leaetn et
Las amilasas constituyen una clase de enzimas industriales que ocupan al., 1996).
aproximadamente el 25% del mercado de enzimas (Sidhu et al. 1997;
Rao et al., 1998). Las amilasas se caracterizan por su capacidad para La alfa amilasa se puede derivar de diversas formas, como
hidrolizar enlaces glucósidos en polish. criarclub británico plantas, animales y microorganismos. Las principales ventajas de
Automóvil

Alfa amilasa α[-amilasa, endo1, α4-D-glucano
glucohidrolasa, EC 3.2.1.1] es un yemnez extracelular que actúa
sobre el almidón y lo degrada en disacárido ana crihsaride
(Crabb y Mitchinson, 1997). La alfa amilasa hidrata los enlaces
internos α-1, 4 en el almidón de forma aleatoria, lo que lleva a
la formación de maltodextrina soluble. msa, ltosa,
y glucosa Esta enzima se usa ampliamente en las industrias
de licuefacción, elaboración de cerveza, alimentos, papel,
textil y farmacéutica (Akpan et al., 2004; Te hsipwpamy
et al., 2006; Gangadharan et al., 2008; Rajagopan tierra
usar microorganismos para la producción de amilasas son la
capacidad económica de producción a granel y los microbios
también son fáciles de manipular para obtenerlos. ee
nzoyf
características deseadas (Vidyalakshmi et al., 20. 0S9e)veral
especie de Bacillus produce una amplia gama de ecxetrla lular
enzimas de las cuales las amilasas son de importancia
significativa en el medio (Pandey et al., 2000). Los
microorganismos termofílicos han ganado mucha atención
recientemente (Becker et al., 1997; Beg et al., 2000n). 81

Krishnan, 2008; Rasiah y Rehm, 2009). Amylasesehav

aplicación potencial en un número de cpero industrial sss ;

Copyright @ 2014 SOCIEDAD TÉCNICA GRUPOS SEMAR. Reservados todos los derechos.
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jANECBENJAMÍN, SANATRATH

Fitter y Heberle, 2000). Suelen ser estearoC. Desarrollo del inóculo termófilo,Bacillus
subtilis, Bacillus licheniformis, Bacillus amyloliquefaciens (Boyer eElIngle, fue preparado mediante la inoculación de th ae
1972
inóculo ctebrial
a;jeSdi et cultivo en el medio de cultivo (caldo nutritivo) 1 cuatro horas
al., 2005). Las especies de Bacillus producen una gran cantidad y luego se añadieron 2 ml de cultivo líquido al medio
de enzimas celulares, como las amilasas, que tienen una gran thoedpurction.
importancia industrial (Cordeiro et al., 2003). Memoria rsbof
Los géneros Bacillus son heterogéneos y parecen muy D. Producción de alfa amilasa bajo fermentación
versátiles en su adaptabilidad al medio ambiente. Hay varios sumergida
factores que influyen en la naturaleza de ellos. ee
irtabólico La producción de amilasa se realizó en medios ushinegbtasal
procesos y enzimas producidos. Un gran trato fuera comprendidos en g/L; almidón 10, peptona 10, extracto de tYeas 20,
se le está dando a los termofílicos y extremadamente theprm hiólico cloruro de manganeso 0,015, calcio icdhelo0r.05
microorganismos y sus enzimas (Ajayi y Fagade, Potasio di hidrógeno fosfato 0.05, magnesiupmhastuel 2006; Oyeleke y
Oduwole, 2009). 0,25, Sulfato ferroso 0,01 y se mantuvo el pH.0e±d0,72 El
medio de producción se esterilizó en autoclave intg
La producción de alfa amilasa es muy importante para el 121°C durante 15 minutos. El medio de producción se inoculó con
método de cultivo. La alfa amilasa se puede producir por 2 ml de inóculo de Bacillus ultitudinina, se incubó asépticamente a
medio de estado sólido (Omori et al., 1994; Akpan y 40 ± 2 °C durante 48 horas. Después de la incubación, el caldo
Adela2j0a0, 4) y técnica de fermentación sumergida fermentado se sometió a centrifugación a 7000 rpm durante 20
(Castro ,e1t 9a9l.2; Haq et al., 1997; Allan et al., 1997; Kim et minutos a 4 °C. el sobrenadante se usó como preparación de
al. al.9,917; Vanova et al., 2001). El método de cultivo enzima cruda y se analizó adicionalmente para determinar la
sumergido que produce amilasas tendría claras ventajas actividad enzimática
porque el producto podría emplearse directamente sin
concentración ni purificación (Julian et al., 19.95). La 1. Ensayo enzimático por método DNS
fermentación sumergida se ha utilizado para el período. nuocf La enzima cruda obtenida después de centrifugatw ioanos
enzimas de importancia industrial debido a la co afse ensayó la actividad de amilasa midiendo el azúcar reductor
manejo y mayor control de fa ambiental rsctsouch de sreleoaf siguiendo el método DNS (Fisher y Stein, 1961).
como temperatura y pH. Debido a las ventajas de la
aplicación de hidrolasas termoestables como la ascrteiodnuof
tiempo de reacción y riesgo de contaminación que proporcionan2. preparación de la curva estándar de maltosa
considerable ahorro de energía, siempre hay un rem reina Una solución madre de 1 mg/ml de maltosa se preparó con
para hidrolasas capaces de funcionar a temperatura tampón de fosfato de sodio 0,1 M (pH 7,0) y se diluyó. eh .
Delaware

elevada. Además, con el fin de cumplir con este dnedmth ae el gráfico se trazó entre diferentes concentraciones de maltosa y
identificación de nuevas cepas y desarrollo de locw ost sus respectivas OD como se indica a continuación1()F
proceso de fermentación son necesarios. Por lo tanto en ovfi el
El presente estudio anterior informa sobre la producción y
cb..)
moizpatición de alfa amilasa del nuevo Bacillus ultitudinis C(METRO
aislado del suelo.

II. MATERIAL Y MÉTODOS

A. Lugar de trabajo
El estudio se llevó a cabo en el Departamento de
Microbiología y Tecnología de Fermentación, Instituto Sam
Higginbottom de Agricultura, Ciencias Tecnológicas,
(Considerado-a-ser-Universidad), Allahabad, tta (rU Pradesh),
India.

B. Adquisición de microorganismos y su mantenimiento

La cepa bacteriana Bacillus altitudinis (F6N76875) se aisló
anteriormente del suelo y luego se realizó 16S rDNAswa y la
secuencia se envió al banco de datos de presentación
secqeuen del NCBI. El cultivo se mantuvo en Nutrient Agar
Mediuam
subcultivado de vez en cuando.
Figura 1: Curva estándar de maltosa.
3. ensayo enzimático de alfa amilasa
Un ml de sobrenadante de enzima cruda se colocó en un tubo
Dakota del Norte
tanketnesit y 1,0 ml de sustrato (solución de almidón) a metido en
tubo de ensayo. Las probetas estaban tapadas e incuabta3t5 e°C
durante 15 minutos en caldo de agua. Luego 2,0 ml de DNeSagrent

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se añadió en cada tubo y la reacción se detuvo hirviendo la cloruro, nitrato de sodio, sulfato de amonio, amm em
Oní
mezcla de reacción en baño de agua durante 10 min utes fuentes de nitrato y nitrógeno orgánico como bxetreafcet y
Después de enfriar a temperatura ambiente, el absorbanOc.eD)( extracto de levadura se inocularon con el orgm de prueba anis
se midió a 540 nm por espectrofotómetro y se incubó a 40±2°C durante 48 horas a pH 7,0. El azúcar liberado
mi. se realizó un ensayo para determinar el alfaaasm máximo eyl
Thendsatard se determinó a partir de maltosa stancduarvrd
Una unidad de actividad de amilasa se definió como la cantidad de producción con diferentes enzimas ngiterones orgánicos e
inorgánicos que liberaban fuentes equivalentes de azúcar reductor de 1 µmol.
maltosa por minuto en las condiciones del ensayo.
3. Efecto de diferentes concentraciones de NaCl en la producción de
E. Optimización de los parámetros del proceso para la α amilasa
producción de alfa amilasa usando una variable a la vez (OVAT) Los medios de producción (50 ml) se complementaron
La optimización de la producción de alfa amilasa se evaluó con concentraciones adicionales de NaCl y se inocularon
variando la temperatura de incubación, el pH, el tiempo de con el organismo de prueba y se incubaron4 d0a±t2°C
fermentación, las fuentes de carbono, las concentraciones de NaCl durante 48 horas a pH 7,0. Pcrotid de alfa amilasa máxima UNED
norte

en las aguas nitrogenadas. con concentraciones variables de sal se determinó el método de

1. Efecto del tiempo de incubación en la producción de alfa
amilasa El tiempo óptimo de incubación para la producción de
alfa amilasa se determinó inoculando 50 ml de purcotd ion
medio con el inóculo bacteriano e incubar4 d0a±t2°C.
Las muestras fueron retiradas a las 24 hrs tiempo interiv.e a.ls24,
48, 72, 96, 120 y 144 horas. La enzima actúa ivatys
determinado para cada vez por el ensayo estándar d.eth
2. Efecto de la temperatura en la producción de alfa amilasa La
temperatura óptima para la elevación de la alfa amilasa se
determinó mediante la inoculación de 50 ml de inóculo bacteriano
medio blanco en caldo y se incubó a diferentes plazos. atpueres
(30, 40, 50, 60, 70, 80, 90 y 100°C durante 48 h Trhse.
actividades enzimáticas se determinaron en los respectivos petera maduro
por el método de ensayo estándar.
3. Efecto del pH sobre la producción de alfa amilasa
Para determinar el pH óptimo para el máximo alfa aam se
yl
producción, 50 ml de medio de caldo se ajustó con febrero a
diferentes pH (5, 6, 7, 8, 9, 10 y 1a1n) d se inoculó con el inóculo y se
ensayo enzimático de Bayndard.
tercero ANÁLISIS ESTADÍSTICO
La optimización de los parámetros de crecimiento, como el tiempo
de incubación, la temperatura, el pH y los medidores de nutrición,
como las fuentes de carbono, las fuentes de nitrógeno y la
concentración de sal para la producción de alfa amilasa, se realizó
utilizando ANOVA (técnica de análisis de varianza), la clasificación
oneywa y la conclusión se extrajo del análisis sbaosfi. de la técnica de
la varianza (Fischer y Ya1t9 e6s,8) en
5% de nivel de significancia.
IV. RESULTADOS Y DISCUSIÓN
A. Optimización de los parámetros de producción para la
producción de alfa amilasa bacteriana
1. Efecto del tiempo de incubación en la producción de α-
amilasa La producción de enzimas por la bacteria
StrBaaincillus altitudinis se estudió sobre la base de incubación en
fermentación sumergida. El rendimiento significativo de alfa
asmeyla se obtuvo para el período de incubación de 8- 4
120 horas Se observó que la enzima producftriom norte

incubó a 40°C±2°C durante 48 horas. Durante la incubación, la la bacteria se encontró como máximo a las 48 horas. aneia nsce
r
actividad enzimática a cada pH se determinó mediante un en la producción de enzimas se observó a partir de las 24h8tho. 4 Después
procedimiento de ensayo estándar. de 48h de incubación una tendencia decreciente de enezym

F. Optimización de los parámetros de nutrientes para la TABLA 1:EFECTO DEL TIEMPO DE INCUBACIÓN EN Α-
producción de alfa amilasa PRODUCCIÓN DE AMILASA POR BACILLUS
1. Efecto de diferentes fuentes de carbono en la producción de ALTITUDINIS
α amilasa
Cada medio de producción de 50 ml suplementado con
fuentes de carbono adicionales como almidón, sacarosa,
selenio, dextrosa, maltosa y lactosa al 1 % (p/v) se inoculó con
el inóculo de Bacillus ultitudesini y se incubó a 40 ± 2 °C
durante 48 horas. y pH 7,0. Se realizó el ensayo Thendsatard
para determinar el alfaaasm máximo eyl
producción variando las fuentes de carbono.

2. Efecto de diferentes fuentes de nitrógeno en la producción

de α amilasa
Cada medio de caldo de 50 ml complementado con fuentes
de nitrógeno inorgánico adicionales como amiummon FCalifornia= 33,18 > Fpestaña(5%) = 3.11 (debido al tiempo)

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Estadísticamente significante (CFAlabama30.31 > Fpestaña2.66 Debido a

la temperatura) al 5% de nivel de significancia. Bhaskeatral. (2011)
encontraron una producción óptima de amilasa por Bla usil
marini a 40°C y a medida que la temperatura aumentaba o
disminuía, se producía una disminución gradual de la actividad
enzimática. A 50°C, la producción de amilasa wastrem x ely
bajo. Podría deberse a la inhibición del crecimiento bacteriano. que en alto
temperatura y, por lo tanto, también se prohibió la formación de
enzimas. Un hallazgo similar también fue informado por azRiet al.
(2003) cuando se realizó un estudio sobre la producción de amilasa
por Bacillus subtilis GCUCM-25 a los 30, 35, 45 0,
50, 55 o 60°C en incubadora rotatoria agitadora.

TABLA 2:EFECTO DE LA TEMPERATURA EN Α-

Fig. 2: Actividad de amilasa en diferentes tiempos de incubación PRODUCCIÓN DE AMILASA POR BACILLUS
ALTITUDINIS
se observó actividad (Tabla 1 y Figura 2). Tfhfece t de
el tiempo de incubación sobre la producción de alfa amilasa no fue
estadísticamente significativo. (CF Alabama33.18 > Fpestaña3.11 Debido a
Tiempo de incubación) .

Los resultados son similares al estudio realizado por Jogezai et al.

(2011) producción de onα-amilasa por Bacillus subtilis en matraz de
agitación durante diferentes intervalos de tiempo (0 a 2 7 h). El
la producción de enzima alcanzó el máximo a las 48 horas después de la
inoculación. Sin embargo, un mayor aumento en el período de incubación
no mostró ningún aumento significativo en la enzimadp. ucroción
FCalifornia= 30,31 > pFestaña(5%) = 2,66 (debido a la temperatura)
más bien se redujo. Esto se debe a que thewco UE
Tendré
alcanzó la fase de declive con una síntesis de enzima reducida.
Además, Lealem y Gashe (1994) también informaron sobre la
producción de la enzima con un aumento en el período de
incubación. Puede deberse al agotamiento de los nutrientes, la
fase de muerte del organismo o debido a la producción de
metilflasa en el medio, como sugiere. Este resultado también fue
respaldado por Oyeleke et al. (2010) donde el opm timu
El período de incubación sobre el rendimiento de las enzimas amilasa se
encontró a las 48 h. Después de esto se obtuvo una disminución de la
amilasa vaitcyti. Este resultado también estuvo de acuerdo conmK
aruand
Sivasudha (2011) para la tecnología de producción de amilasa por
dssotlai te. Los resultados similares se obtuvieron bayqHet al. (2010)
para la producción de α-amilasa de Bacillus amyloliquefaciens. El
resultado reveló que después de la incubación de h4, la disminución
del rendimiento de la enzima podría deberse a la desnaturalización
Figura 3: Actividad de amilasa a diferentes temperaturas
de la enzima provocada por la interacción con los componentes del
medio. La máxima producción de af-amilasa se obtuvo a 40°C. La
producción de la enzima disminuyó con el aumento de la
2. Efecto de la temperatura en la producción de α-amilasa La temperatura. La producción de la enzw mmm
Plaza bursátil norteamerica
actividad enzimática de la cepa bacterianaacB ilus muy inhibida a temperatura más baja (30°C). Efecto de la
altitudinis se estudió sobre la base de paramet.er. i temperatura sobre la actividad de la amilasa producida por lB
luasci
temperatura en fermentación sumergida. En esteepnrtew trabajo
megaterium se encontró que era máximo a 40°C seguir adiós
la actividad máxima de amilasa fue estudiada por una fuerte disminución en la actividad de amilasa a 50°C redpobrty
temperatura de 30°C-100°C. Se observó en el estudio de Oyeleke et al. (2010) que es similar al estudio prnetsse.
presente estudio que la máxima producción de enzimas m de (Jogezai et al., 2011) también informaron la máxima reducción de α-
se encontró que la bacteria era máxima después de 48 hofur amilasa a 40 °C mediante el uso de Bacillus subtilis. como el
tiempo a 40°C (Tabla 2 y Figura 3). Se incrementó el efecto de la temperatura de incubación, la temperatura del
producto sobre la producción de alfa amilasa fue foola enzima unbdet se redujo. Según Liu y Xu ()2008

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En el estudio de la cepa Bacillus aquimaris VITP4 se observó una tendencia decreciente del rendimiento enzimático.eStihnecre
producción máxima de enzima a 40°C. Aunque el crecimiento no hubo un cambio constante en la actividad de la amilasa w despedir
se observó en el rango de temperatura de 30°C a 6i0 t°wCa,s aumento o disminución del pH, se encontró que los datos eran
encontrado máximo a 40°C indicando cortrioen uno a unola estadísticamente significativos. (CFAlabama21.02 >Vpestaña2,85 a un nivel
entre la producción de enzimas y la biomasa, que icela srif de significancia del 5% (Tabla 3 y Figura 4) Bhaskara et (2a0l.11)
que la producción de enzimas depende del crecimiento. Los informaron que el pH de los medios es uno de los parámetros de
resultados coincidieron con los presentes informes. regourilato durante la fermentación. Amilasia más alta eeNueva Zelanda

Bacillus ultimatinis.A partir de estos resultados, la producción de enzima parecía observarse más alta a pH 7,0. Se obtuvo una
grladua que tiene una termoestabilidad considerable, que puede ser una disminución en el rendimiento de la enzima, favorable
en las operaciones industriales para el barleing tradicional. por debajo de 5,0 y por encima de 10. (Oyeleke et al., 201h0a,
y procesamiento de alimentos. faSat et al., 2011 y Vaseekaran et al., 2011) informaron un pH
óptimo similar para la producción de aamsyel.
3. Efecto del pH sobre la producción de α-amilasa
El pH del medio de producción juega un papel importante en el La actividad óptima de la enzima a pH bajo aluvios
crecimiento microbiano y, por lo tanto, influye en la producción de (pH 6,5–7,0) es muy importante desde el punto de vista de la
thnezyeme. En el presente estudio se determinó la activación de la aplicación industrial. El uso de amsyelas licuantes que son
enzima a diferentes pH que oscilan entre 5,0 y 11,0 manteniendo activas y estables alrededor de la saccharificatiH en ISP
la combinación óptima de tiempo y temperatura. atractivo porque podría evitar o reducir el ouf saecid a
La máxima producción de amilasa se encontró a pH 7,0. baje el pH de licuefacción a sacarificación corrió, gaend Después de
pH 7 un gradual también simplificar los procedimientos durante epsro aguas abajo cantar
Además, el uso de -amilasas que operan a valores de pH más
TABLA 3:EFECTO DE LA PRODUCCIÓN DE PH bajos reduce la formación de algunos subproductos. , sal
SOBRE LA AMILASA POR BACILLUS ALTITUDINIS maltulosa, que generalmente se produce a mayor pH adicional
(Goyal et al., 2005). Sin embargo, diferentes organismos hasve
diferentes pH óptimos y disminución o aumento de inonpH cualquiera

lado del valor óptimo da como resultado un microbgiraolwth

FCalifornia= 21.02 > Fpestaña(5%) = 2,85 (debido al pH)
pobre (Ramesh y Lonsane, 1991). En contraste, se reportaron
actividades máximas en el rango de pH de 4.8 y 9.2. terd el
producción de amilasa de B. licheniformis a partir de residuos del
procesamiento de yuca (Oguntimehin, 1998). Ellaiah .e(t2a0l02)
mostró que a un pH más alto, la actividad metabólica de la bacteria
sería suprimida, inhibiendo así la producción de enzimas. (Carvalho
et al., 2008) llevaron a cabo la producción de yemnez a pH neutro e
informaron que un aumento en el pH probablemente se deba a la
liberación de varios moelitaebs a medida que avanza el crecimiento
que favorece la producción. nnozfyme.
La variación en el pH resultó debido al consumo de sustratoyo G.
hidrólisis de proteínas) y/o producción de metabolitos (por
ejemplo, ácidos orgánicos). Son indicadores de cambios eintam bolic
actividad (Bellon et al., 2003)(.Kunamneni et al., 2005) también
reportaron que el cambio de pH observado durante thwy tg hora
los microbios también afectan la estabilidad del producto en el pantano rm
tación
medio.

4. Efecto de diferentes fuentes de carbono en la producción de

α-amilasa
Varias fuentes de carbono como almidón, sacarosa, fructosa,
dextrosa, manitol y lactosa (1%) se utilizaron para complementar
los medios de producción. La máxima producción de asmey se
encontró cuando el medio de producción se complementó con
almidón seguido de maltosa (Ta4ba prestar

Figura 5). Dado que los datos con respecto a los carbonos son
estadísticamente significativos, se puede concluir que la degradación
en diferentes fuentes de carbono afectaría significativamentecte α-
Figura 4: Actividad de amilasa a diferentes pH en la producción de
producción de amilasa. (CAlabama
F 130.96. > Fpestaña3.11, al nivel del 5% de
α-amilasa
significado). La adición de fuente de carbono en ftohrem de

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tanto los monosacáridos como los polisacáridos pueden influir en la almidón como el mejor suplemento de fuente de carbono para la
producción de la enzima amilasa. En este presente estudio, se encontró producción de lasaemia por Bacillus lichenifomis y Bacillus .Is-3p.
que la influencia del almidón es mejor fuente de carbono que otras Varalakshmi et al. (2008) también observaron un rendimiento máximo de
fuentes de carbono. Un hallazgo similar fue observado por Bhaskara et al. lasmey con almidón soluble.
(2011) cuando se optimizó la producción de amilasa usando diferentes
azúcares a una concentración del 1% (p/v). Bacillus marini mostró la 5. Efecto de las fuentes de nitrógeno en la producción de α-amilasa
máxima actividad enzimática idad Diferentes orgánicos (extracto de levadura y aecxtt de res)r y
la presencia de almidón como fuente de carbono, donde ee as, t nitrógeno inorgánico (cloruro de amonio, nte de sodio eso, ra
se observó una actividad enzimática mínima en la dextrosa fuentes de nitrato de amonio y sulfato de amonio) se
preesonfc. complementaron en los medios de producción para determinar inee t
máximo rendimiento enzimático. La máxima producción de
TABLA 4:EFECTO DE DIFERENTES FUENTES DE α-amilasa se observó con extracto de levadura (org)aa nn icd
CARBONO EN LA PRODUCCIÓN DE ALFA AMILASA POR sulfato de amonio (inorgánico) (Tabla 5 y Figu)r.eA6ll otros
BACILLUS ALTITUDINIS parámetros de producción a saber. temperatura ntcio b Unidas
Naciones

el tiempo, el pH y la fuente de carbono se mantuvieron constantes. Los datos

de eStihnec con respecto a las fuentes de nitrógeno son staatilslytic

TABLA 5:EFECTO DE LAS FUENTES DE NITRÓGENO EN

PRODUCCIÓN DE AMILASA POR BACILLUS
ALTITUDINIS

FCalifornia= 130,96 > pestaña

F (5%) = 3.11 (Debido a la fuente de carbono)

Figura 5: Actividad de amilasa en diferentes fuentes de carbono. FCalifornia= 87,98 > Fpestaña(5%) = 3.11 (Debido a la fuente de nitrógeno)

Srivastava y Baruah (1986) informaron sobre el mejor sustrato

basado en varios aspectos, como la tasa de crecimiento espacial, el
nivel de actividad enzimática, la enzima específica. mcetividad

nivel, tasa de formación de enzimas específicas, etc. Solusbtla Erch

se encontró como el mejor sustrato para la producción α-
amilasa por Bacillus stearothermophilus, por lo que se seleccionó
almidón como sustrato para estudios de fermentación sumergida
de producción de alfa amilasa. Sin embargo, el ef efecto

las fuentes de carbono cambian con las condiciones de producción de

strnadinoather. La disminución en la producción de enezywm yo
otras fuentes de carbono pueden deberse al catabolito srseiporne. El
hallazgo en el presente estudio estuvo de acuerdo con (Kumar y
Sivasudha, 2011) donde el almidón fue probablemente la mejor fuente
de carbono utilizada por el organismo. estimular hilar Figura 6: Patrón de rendimiento enzimático con respecto a
resultado también fue encontrado por Goyal et al. (2005) que es estoble diferentes fuentes de nitrógeno orgánico e inorgánico.

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significativo, está claro que la variación en differteo orgánico y
las fuentes de nitrógeno inorgánico afectarían significativamente la
producción de amilasa. (CF
Alabama87.98 > Fpestaña3.11 al nivel del 5% de
significado) Los compuestos de nitrógeno son fuentes de energía
secundarias para los organismos y juegan un papel importante en
producción. (F California47.76 > Fpestaña3.11, al nivel del 5% de
significado). El cloruro de sodio es un importante n ieunttr
factor de crecimiento y actividades fisiológicas. a Vyijabaskar
et al. (2012) informaron una concentración de NaCl del 3 % esperable como
valor absoluto para la producción de amilasa. Bhaskara et al. (20r1 e1
p)portado

la producción de metabolitos secundarios. el naotu f rtehe producción de enzimas a diferentes concentraciones oC f norte tierra
El compuesto y la concentración utilizada pueden regular el rendimiento enzimático óptimo encontrado al 4,5% de NaCl concentrado
en la producción de enzimas. En el presente estudio la Además, hubo una disminución gradual en el ptriod enzimático. nuacs
suplementación de fuentes de nitrógeno en amylaseupcrto yodo la concentración de NaCl aumentó o disminuyó.
mostró que se encontró que el extracto de levadura es una fuente
de bneitttreorgen para la producción de alfa amilasa. Añoxstrtacet
fue la mejor fuente de nitrógeno para la concentración de producción de amilasa de NaCl. Amplia gama de sal tolerable probablemente
debido a su alto contenido en minerales, viitnasm, se informaron concentraciones en amylafrsoem halófilo s m
coenzimas y componentes nitrogenados (Guerra andaP na, calle halobia (Onishi y Sonada, 1979) halófilo moderado
2002). Halomonas meridian (Coronado, et al., 2000), Buascill
dipsosauri (Deutch, 2002) y Halobacterium halm obiu
Los hallazgos en el presente estudio fueron en e soy
gran con (Bueno y Hartman, 1970). Una cepa termófila de Bacillups SMIA-2
los estudios realizados por Roohi et al, (2011) consideran el extracto de retuvo un rendimiento enzimático del 63,4 % en 2,0 % aCNl
wiethasyt como la mejor fuente de nitrógeno orgánico. Teodonrdo a Martins (Carvalho, et al., 2008).
(2000) también reportó resultados similares cuando se usó extracto de asito
como fuente de nitrógeno en combinación. décimo
norte TABLA 6:EFECTO DE LAS CONCENTRACIONES DE NACL EN
se reportó peptona. Los resultados también fueron inea mgernet PRODUCCIÓN DE Α-AMILASA POR BACILLUS
con informes proporcionados por Dettori et al. (1992); Narnaaya y ALTITUDINIS
Vijyalakshmi (2008) cuando se utilizó extracto de levadura como
fuente de nitrógeno para Bacillus stearothermophilus y Sn.d
albidoflavus respectivamente. El hecho de que el máximo soy
El crecimiento de Bacillus altitudinis ocurre en la parte altanitrógeno
contenido de peptona que ejemplifica el papel de los compuestos de
carbono fácilmente fermentables en el medio. La producción de
metabolitos primarios por parte de los microorganismos está muy
influenciada por su crecimiento, lo que se determinó editado por

la disponibilidad de nutrientes en el medio. Theorreef la

mejora del valor nutricional en el mediubm y el
suplementación de fuentes orgánicas e inorgánicas lsio
F
California= 47,76 > Fpestaña(5%) = 3,11
mejorar el crecimiento del cultivo bacteriano y posteriormente en la
producción de enzimas. De manera similar, la producción de yema fue
más eficiente en fuentes de nitrógeno orgánico de contenido medio,
especialmente extracto de levadura como croem. dpwaith
fuentes inorgánicas de nitrógeno (Bhattacharya et al.1, 12 ) . 0
Estudios anteriores indicaron que se prefería el nitrógeno
orgánico seco para la producción de amilasa y máxima α-
La producción de amilasa se observó mediante extracto de
levadura o extracto de carne (Krishnan y Chandra 1982). Saánn
tods
Martin (2003) también reportó la producción óptima de amilasa por
Bacillus sp. cuando el extracto de levadura se evaluó como fuentes de
nitrógeno.

6. Efecto de la concentración de NaCl en la producción de

α-amilasa Varias concentraciones de NaCl como 0.5% . 5,%1,
El 2,5% y el 3,5% se utilizaron para complementar la producción.Figura 7: Efecto de diferentes concentraciones de NaCl en
medios de comunicación. Entre las diversas concentraciones, la máximarendimiento
enzimático. La producción de amilasa se indujo cuando el medio se complementó con
V. RESUMEN Y CONCLUSIÓN
2,5% (Tabla 6 y Figura 7). Los datos de eSitnhce con respecto a las concentraciones de NaCl
son rígidos. El rendimiento óptimo de -amilasa se encontró a 40°C y
significativa, se puede concluir que la variacióndiferente 48h y pH 7.0 bajo fermentación sumergida. Eso da
Los iones metálicos afectarían significativamente a la amilasa y se encontró que era estadísticamente significativo. Entre tvharious

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 YASHABkUMAR, PAGRADEEPkUMARSINGH, AARRENDAJOkUMARSINGH, hARISONMETROASIH, jYOTSNAkIRÁNPAGETER,
jANECBENJAMÍN, SANATRATH

fuentes de carbono, almidón soportado higheαs-a t milasa xilanasa y pectinasa de Streptomyces sp. QG 3.-11-
producción seguida de maltosa bajo fermentación Revista de Microbiología y Biotecnología de la India,
sumergida. Máxima respaldada por sulfato de amonioα-al 24:963-402.
producción de amilasa a partir de diferentes fuentes de nitrógeno
(orgánicas e inorgánicas). Una concentración de NaCl (2,5 %) ioas [8] Bellon, MV, Orliac, O. y Christen, P., 230,0Sensores
observado para la producción de highesαt-amilasa bajo sumergido y mediciones en fermentación en estado sólido. PAG ssroce
fermentación. Se encontró que la α-amilasa producida por Bacillus Bioquímica, 38: 881–896.
altitudinis era potente, ya que podía ser activa en un rango de pH,
temperatura, carbono, fuentes de nitrógeno (inorgánicas y [9] Bhaskara RKV, Ashwini, K., Gaurav, K. y Karthik, L., 2011,
orgánicas) y concentración de cloruro de sodio en fermentación Optimización, producción y purificación tpi alr de α-amilasa
sumergida. Por lo tanto el seleccionadoinso trfa extracelular de Bacillus sp. marini Archivos de Investigación
Bacillus altitudinis podría ser beneficioso para Indruisatl en Ciencias Aplicadas, 3: 3(13)-42.
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