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1. OBTENCIN DE AMILASAS FNGICAS A PARTIR DE ASPERGILLUS SP.

SEMILLAS DE LENTEJAS

AISLADO DE

Las amilasas son enzimas que catalizan las reacciones hidrolticas del almidn, dando origen a diversos productos que poseen una gran relevancia para algunas operaciones y procesos industriales. Las amilasas son comnmente halladas en animales y en plantas; sin embargo, para fines industriales, las ms utilizadas son aquellas de origen bacteriano o fngico. Las amilasas poseen una gran importancia en la produccin de alimentos y de biocombustibles, Las -amilasas presentan una gran utilidad tanto para la industria textil como para la de alimentos pues rompen la molcula del almidn en fracciones ms cortas (dextrinas). Actan directamente sobre los enlaces -1,4 de la molcula, dando origen a molculas como la maltotriosa, maltotetraosa, maltopentaosa y maltohexaosa, entre otras. Concluciones Se realizaron tcnicas apropiadas para el aislamiento de microorganismos productores de amilasas presentes en semillas de lentejas. Aunque se logr aislar dos microorganismos, el nmero 1, identificado como Aspergillus sp. Demostr mayor capacidad hidroltica del almidn, confirmado de forma cualitativa mediante la ausencia de reaccin ante la adicin de revelador lugol. La actividad amiloltica del complejo enzimtico fue cuantificada como equivalente de dextrosa, el cual present un valor de 6,5 g de glucosa/100 g de almidn, evidenciando la capacidad de hidrlisis de las enzimas obtenidas mediante cultivo de Aspergillus sp. Sobre salvado de trigo. Es importante resaltar que este trabajo se limit a la medicin de la actividad a 37C y un pH de 5. Por lo tanto es necesario realizar ms estudios acerca de la influencia del pH y la temperatura sobre la actividad amilasa e igualmente sobre las condiciones de cultivo del microorganismo aislado. 2. TRICHODERMA EN EL CONTROL BIOLOGICO DE ENFERMEDADES DE PLANTAS ENZIMAS PRODUCIDAS POR TRICHODERMA SPP. La pared celular de los hongos est formada principalmente por quitina y -1,3 glucans embebidas en una matriz de material amorfo, por lo tanto se espera que para el xito de la degradacin de la pared celular intervengan ms de una enzimas. Trichoderma spp. Son eficientes productores de polisacaridasas, proteasas y lipasas, compuestos que pueden ser usados en la degradacin de la pared de las clulas del patgeno. Se han purificado dos enzimas quitinoliticas (endoquitinasa y quitobiosdasa), obtenidas a partir de Trichoderma harzianum; se comprob que el grado de inhibicin del patgeno fue proporcional al nivel de quitina en la pared celular del hongo atacado, e igualmente se verifico que la combinacin de las dos enzimas resulto ser sinergostica (54, 56, 57, 75), aunque la mezcla de estas dos enzimas no es requerida para la inhibicin del hongo atacado (56). Es interesante resaltar que las dos enzimas se enfrentaron a cultivos de Trichoderma y este no se vio afectado por las mismas, a pesar de tener quitina en sus paredes.

Haran et al. Encontraron niveles diferentes de produccin de las enzimas hidroliticas, cuando Trichoderma se enfrenta a S. rolfsii o a R. solani, la actividad de una de las enzimas, la cual se produjo durante la accin parastica de Trichoderma y S. rolfsii, no se detecto en la relacin Trichoderma y R. solani, resaltando que la expresin de estas enzimas durante la interaccin con el patgeno fue afectada por el hongo patgeno al cual se enfrento. 3. LIPASAS DE HONGOS INMOVILIZADAS. ESTUDIO DE SU SELECTIVIDAD FRENTE A UN ESTER RACMICO Introduccin. Las lipasas (E.C 3.1.1.3), son enzimas de gran especificidad, capaces de hidrolizar una sola especie en una mezcla racmica. Debido a esta propiedad que presentan y a la gran variedad de sustratos que aceptan, se han convertido en catalizadores de gran inters para obtener ismeros pticamente puros, muy usados en la industria farmacutica y agroqumica. Por la importancia del tema, as como el inters por estas enzimas para trabajos posteriores, se ha decidido en el presente trabajo estudiar la esterereo especificidad de diversas lipasas inmovilizadas en la reaccin de hidrlisis de un ester bajo diferentes condiciones de reaccin de pH y temperatura. Resultados y Discusin. Los resultados obtenidos arrojaron que todos los hongos eran productores de lipasas, alcanzndose niveles de actividad lipoltica entre 0.05-0.26 UI/mL. Se pudo comprobar que todos los micoorganismos se desarrollaron de modo similar en el medio de cultivo empleado (los resultados de crecimiento no se reportan). Por otra parte se puede aadir que aunque la cepa J-1 de A.niger no sea la misma a la empleada por otros autores, la misma result la mejor productora de enzima lipasa, de igual modo la cepa de A.fumigatus mostr niveles altos de expresin y en la literatura no se encontr reporte alguno sobre lipasa producida por este microorganismo. Los estudios de selectividad de la enzima arrojaron a resultados interesantes, algunos de ellos se presentan a continuacin: Derivado Octil Aspergillus fumigatus Aspergillus fumigatus Aspergillus niger Aspergillus niger Aspergillus oryzae Aspergillus oryzae Condicin experimental E(S/R) pH 5 4oC pH 4 4oC pH 7 4oC pH 5 4oC pH 7 25oC pH 7 4oC 0.12 16.7 0.56 0.50 0.17 0.5

Mucor grysoceanum Mucor grysoceanum Trichoderma hartzianum Trichoderma hartzianum

pH 7 4oC pH 4 4oC pH 5 4oC pH 4 4oC

0.4 20 0.16 2.78

Como se puede apreciar todos los derivados de las distintas lipasas fueron sensibles a las condiciones experimentales estudiadas en mayor o menor grado, por ejemplo la lipasa de A.niger inmovilizada increment su enantio selectividad hacia el ismero S de 0.12 a 16.7 cuando se disminu el pH del medio de reaccin, al igual sucedi con la lipasa de Mucor grysoceanum aumentando la enantio preferencia hacia el ismero S, mientras que para otros derivados las variaciones fueron pequeas. De este modo una misma lipasa inmovilizada puede presentar enantioselectividades diferentes por simples cambios de las condiciones de reaccin. Concluciones La posibilidad de modular la enantio selectividad de una enzima ha sido ampliamente discutida en la literatura y diversas herramientas se han empleado para modificarla. Se comprob que la variacin de las condiciones del medio de reaccin contina siendo una de las ms fciles y econmica, siempre y cuando puedan promoverse cambios en la enzima que causen modificacin de la enantio selectividad de las mismas en diversas biotrans formaciones. 4. DETERMINACIN DE LA ESPECIFICIDAD DE PROTEASAS FNGICAS EN LA HIDRLISIS DE PROTEINA Hoy en da la tecnologa enzimtica ocupa un lugar preponderante dentro de la biotecnologa. Alrededor de un 65% de las enzimas proteolticas o proteasas que se producen industrialmente estn de una u otra manera relacionadas con la industria alimentaria, entre los usos ms comunes se encuentra la maduracin de quesos, ablandadores de carnes, produccin de hidrolizados de protena, fabricacin de pan, por mencionar algunos; aunque es conveniente sealar que con las proteasas alcalinas empleadas en detergentes ocupan 25% del total de la distribucin, el 10% restante corresponde en las reas farmacuticas y analtica. Actualmente se conoce la existencia de ms de 2,000 enzimas, de las cuales muchas de ellas han sido aisladas, purificadas y cristalizadas gracias a la experiencia ganada en este terreno. En la Tabla se muestran algunas enzimas de uso industrial, as como sus Aplicaciones.

Las bacterias producen principalmente proteasas alcalinas mientras que las proteasas provenientes de hongos puedes ser cidas, neutras y alcalinas; lo que ofrece una gran ventaja ya que pueden crecer tanto en medio slido como lquido. Gracias a que los hongos como Aspergillus oryzae y Rhizopus oryzae son productores de proteasas alcalinas as como de - amilasas, glucosamilasas, lactasas, celulasas, lipasas y pectinasas; estos crecen naturalmente en medios slidos y se pueden emplear en la fermentacin en medio slido utilizando generalmente salvado de trigo como soporte, adems que las enzimas que se extraen de este sistema son de mejor calidad y se necesitan menos solventes para extraerlas Para la aplicacin industrial de proteasas se recurri inicialmente a la produccin de preparados enzimticos provenientes, en su mayora de tejidos animales y vegetales, al incrementarse la demanda de proteasas como consecuencia de su aplicacin como aditivo en detergentes utilizados a nivel industrial y domstico, se desarrollaron tecnologas para producir proteasas de origen microbiano, ya que renen propiedades deseables como gran estabilidad en intervalos de pH y temperatura de procesos, as como de la elevada actividad en presencia de compuestos que normalmente inhibiran a las de origen animal y vegetal, adems de ser ms factible su produccin a partir de microorganismos que a partir de tejidos .

Hoy en da existen en el mercado enzimas de origen fngico que se emplean para la obtencin de hidrolizados de protena como son: Bioproteasa LA450 (Gygyc Biocon), Delvolase (Gist.Brocades), Novozym FM 2,0L, Alcalase 2,4L grado alimenticio, Neutrasa 0.5L grado alimenticio, Flavourzyme 500 MG y Kojizyme (Novo Nordisk), por mencionar algunas. Pero el uso de este tipo de enzimas encarece la recuperacin de la protena, ya que su costo oscila entre 280 y 420 pesos por gramo de enzima. Cabe sealar que existen varias posibilidades de eleccin de la enzima para una buena obtencin de hidrolizados de protena como es su origen microbiano, tipo de reaccin catalizada, naturaleza del centro cataltico, especificidad del sustrato, concentracin del sustrato, pH ptimo de actividad, as como la relacin costo - rendimiento. 5. PRODUCCIN DE LA ENZIMA LACASA POR EL HONGO CLADOSPORIUM CLADOSPORIOIDES EN PRESENCIA DE FENANTRENO El hongo deuteromiceto Cladosporium cladosporioides tuvo la capacidad de producir la enzima lacasa (EC:1.10.3.2, benzenodiol: oxgeno reductasa) en medio lquido sin y con fenantreno (172 mg/l). ste hongo, sin fenantreno, mostr una actividad enzimtica de lacasa mxima a los 3.5 das de incubacin (1.01 U/g biomasa en peso seco), y con fenantreno la mxima actividad fue al da 3 de incubacin (3.09 U/g biomasa en peso seco). La presencia de fenantreno fue significativa (p>0.01) para la actividad especfica de la enzima lacasa y present una correlacin positiva (p>0.01), es decir la presencia del fenantreno aument la actividad especfica de la enzima. Hubo una remocin mxima de fenantreno de 54 % en el da 4 de incubacin (de 172 a 125 mg/l), sin embargo ninguna de las variables dependientes e independientes tuvo un efecto significativo en la remocin del fenantreno en el medio de cultivo. INTRODUCCIN Los hidrocarburos aromticos policclicos (HAP) se encuentran en suelo, aire y agua; son de origen natural y antropognico [1], Por sus efectos negativos a la salud humana, la Environmental Protection Agency en Estados Unidos de Norteamrica (EPA), ha considerado a 16 de ellos de alta importancia, entre los que se encuentra el fenantreno, ya que son txicos y/o cancergenos. Los hongos de la divisin basidiomicota (Pleurotus ostreatus, Trametes versicolor, entre otros) pueden degradar tales compuestos. Lo anterior se debe a su produccin de enzimas ligninolticas, las cuales son extracelulares y poco especficas. Dentro de dichas enzimas se encuentra la lacasa (EC:1.10.3.2, benzenodiol:oxgeno reductasa) quien reduce el oxgeno molecular a agua. Sin embargo existen hongos deuteromicetos que pueden biotransformar HAP, como Cladosporium cladosporioides, quien degrad sustancias hmicas en agua y una de las enzimas que estuvo involucrada fue la lacasa. Una cepa de C. cladosporioides encontrada en suelo de humedales, contaminado con fluoranteno, fue inoculada en medio lquido sinttico, y observaron que hubo una reduccin del 26% de antraceno (de 0.01 a 0.0023 g/l) y 78% de fluorantreno (de 0.01 a 0.0078 g/l). En medio slido de agar C. cladosporioides, aislado de suelo contaminado con hidrocarburos, tuvo la capacidad de producir la enzima lacasa.

Existen pocos estudios sobre la intervencin de la enzima lacasa en la degradacin de HAP por el hongo C. cladosporioides, en medio lquido. El objetivo de ste trabajo fue medir la actividad de la enzima lacasa producida por C. cladosporioides, en presencia (172 mg/l) y ausencia de fenantreno, en medio lquido.