TEMA 3: CINÉTICA ENZIMÁTICA

La cinética enzimática nos permite determinar la velocidad de la reacción.

Basándose en el esquema de reacción de Michaelis y Menten, en 1925 Briggs y Haldane

propusieron que, durante las reacciones enzimáticas, la [ES] se mantiene constante
hasta que una cantidad significativa de sustrato ha sido consumida; por tanto, la
aproximación de estado estacionario es aplicable para ES.

[S] → sustrato
[P] → Producto
[ES]→enzima y sustrato = cte
[E]→enzima libre

➔ Ecuación de MICHAELIS-MENTEN:

*La V0 es la cantidad de producto que se genera por unidad de tiempo o

bien cantidad de substrato que se consume por unidad de tiempo.

VF [ES] = K1 [E] · [S]

V0 [ES] = (k-1) ·[ES] + k2 · [ES]

Alcanzamos la máxima velocidad cuando [ES] = [ 𝐸𝑇]→Vmáx

Vmáx = K2 · [ 𝐸𝑇]
Km: nos va a indicar la afinidad entre enzima y sustrato
Km: es la concentración de substrato con la que se alcanza la mitad de la velocidad
máxima

- ¿Cuál es la actividad?→Velocidad reacción

A→P Necesita enzima con Km = 5 mM
B→Q Necesita enzima con Km = 5 μM

La enzima tiene más afinidad por la segunda reacción porque mayor Km indica menor
afinidad porque necesita más cantidad de la enzima para reaccionar.

La Vmáx se alcanza cuando todas las moléculas de enzima están ocupadas por
substrato; se dice entonces que la enzima está saturada.

- 1ª fase de reacción: la velocidad aumenta a la vez que la concentración de

substrato

V=K·[S] (orden 1)
Solo la enzima libre se puede unir al sustrato, por lo tanto, hay que tener en cuenta que:

[ 𝐸𝑇] = [𝐸𝐿] + [ES] enzima libre + enzima-substrato

Vf [ES] = Vd [ES] velocidad formación es igual a velocidad dirección

Kcat: es la constante de la reacción en el punto limitante. Es el número de moléculas de

substrato convertidas en producto por unidad de tiempo por una sola molécula de
enzima cuando la enzima está saturada. (Kcat aumenta cuando aumentan moléculas
que contiene substrato)

La eficiencia de catalítica es la constante de la fase limitante de una ruta enzimática, la

que determina definitivamente la velocidad.

Vmax = K2 cuando toda enzima está unida a substrato Vmáx = Kcat · [ 𝐸𝑇]

Unidades de Kcat = s^-1 ó min^-1

Constante específica Kesp

Kesp = Kcat / Km → cuanto mayor cociente, mayor eficiencia enzima. Cuando aumenta
Kesp aumenta actividad enzima

➔ Unidad internacional de la actividad enzimática:

Es la cantidad de enzima que transforma un micromol de sustrato por minuto en

condiciones óptimas de ensayo.

Hay que tener en cuenta que la curva de

arriba no es recta, sino asintótica con el
infinito.
Para conseguir valores exactos
transformamos la ecuación:

➔ Linealizándola, obtenemos la ecuación de

Lineweaver-Burk:

y obtenemos una recta del tipo y=mx + b

Cuando queremos saber la ordenada en el origen y = 0 entonces:

*OJO: si nos pide que digamos cual es Km en esta recta y=10 x + 5 no

podemos porque no nos da unidades*

➔ Linealización de Eadie-Hofstee:

➔ Linealización Hanes–Woolf:

➔ Cinética del estado preestacionario:

A + B→Medir pero esperar 5 min antes de medir (Tiempo de incubación)

Los tiempos de incubación son los utilizados para conseguir que la [ES] sea estable.
Durante ese periodo de incubación que es el tiempo preestacionario.