 Yessenia

León  Alexis Ortega  Horacio Santiago  Guillermo Méndez  Eduardo Guzmán

CULTIVO DE PROTOPLASTOS

Mantiene potencialidades de células vegetales completas. Células vegetales que han sido separadas de su pared celular mediante un tratamiento enzimático o mecánico y adoptan forma esférica en el medio de cultivo. Membrana plasmática completamente expuesta. por proceso mecánico o enzimático. Estado transitorio. . permite manipulación de esas células.Protoplasto:      Célula vegetal desprovista de pared celular.

1960 Aislamiento de protoplastos de plantas superiores con degradantes de pared celular.   1892 Primer aislamiento de protoplastos vivos de cebolla por métodos mecánicos. Sabias que!! . 1971 Regeneración de plantas a partir de protoplastos.

APLICACIONES  Producción protoplastos.  Manipulaciones genéticas. de híbridos por fusión de . plantas adultas.  Pueden multiplicarse y desarrollar estructuras similares a embriones y desde ellos.  Estudio de procesos fisiológicos y bioquímicos.

 Sistema de cultivo y la densidad de los protoplastos contenidos en él.Para el éxito del cultivo  Tipo y edad del material de origen de los protoplastos.  Adecuada composición del medio. .

 En células jóvenes es posible manejar fácilmente la inducción y el mantenimiento de la actividad mitótica que en las células altamente especializadas. .

SISTEMAS DE CULTIVO  MEDIO LÍQUIDO  MEDIO SÓLIDO .

depositándolo. en capas delgadas. en las cajas petri.  Se usa mezclando en él los protoplastos cuando tenga de 3540°C.MEDIO LÌQUIDO MEDIO SÓLIDO  Se usa colocándolo en capas delgadas de un medio de 50 a 250 uL. .

.Frecuentemente los protoplastos se cultivan en medio líquido y las células en división o las microcolonias derivadas se cultivan en medios sólidos.

Generalmente requieren auxinas citocininas. Se usan generalmente azúcares.ESTABILIZADORES OSMOTICOS y REGULADORES DE CRECIMIENTO  Para evitar el estrés celular y como resultado una baja eficiencia del cultivo. . para la división celular. y   Las auxinas también pueden ocasionar la vacuolización y ruptura de los protoplastos.

Regeneración . Purificación 3. Aislamiento y factores que lo afectan 2.METODOLOGÍA 1. Cultivo 5. Determinación de viabilidad 4.

hemicelulasas y pectinasas. Las preparaciones comerciales de dichas enzimas contienen además proteasas. nucleasas y lipasas. es un procedimiento tedioso y presenta una aplicabilidad limitada. Consiste básicamente en un choque osmótico para producir plasmólisis celular y ruptura de la pared. Aislamiento de protoplastos  Método mecánico: Posee un bajo rendimiento. Método enzimático: Consiste en la incubación de las células en una mezcla de enzimas que degradan la pared celular: celulasas.  . Los protoplastos se liberan de las células rotas mediante el restablecimiento de su nivel osmótico.1.

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El material de origen de los protoplastos. La composición del medio en que actuarán. Tratamientos pre-enzimáticos Osmolaridad .Factores que afectan la producción y viabilidad de los protoplastos      El tipo de enzimas que se usaran.

Purificación  Es la recuperación de los protoplastos.2. . incluye la eliminación de los enzimas por lavado y el paso a un medio de cultivo para la recuperación de la pared y la promoción de las primeras divisiones celulares de las células individuales obtenidas de los protoplastos.

Hibridación somática  En biotecnología.  . Los protoplastos son capaces de regenerar su pared celular después de algunos días de cultivo del medio adecuado. la hibridación somática es el proceso por el cual se obtienen plantas híbridas que contiene ambos núcleos y ambos citoplasmas a partir de la fusión de células o de protoplastos.

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.  Se realizan tratamientos y la selección del material frente a diversos agentes.  Actividad fotosintética  Tinciones  Medio de cultivo específico y complejo  Se incuba el material a 25°C en condiciones de oscuridad de 5 a 7 días.3. Determinación de la viabilidad  Toma de oxigeno.

Extractos naturales como:      Extracto de levadura Aminoácidos Vitaminas Ácidos orgánicos Azucares . Reguladores del crecimiento.4. B5 (líquido o sólido) Osmolaridad Densidad de plaqueo Condiciones de almacenamiento Material vegetal     Sales inorgánicas. Cultivo      Medio de cultivo: MS. Estabilizadores osmóticos.

 Se cultivan los microcallos obtenidos tras la división celular. se cambia en ella la densidad poblacional. la composición del medio de cultivo. . se hace menos exigente y la incubación se hace con luz.

Por ultimo se trasplantan y aclimatan las plantas obtenidas en invernadero. Regeneración  Regeneración de plántulas a partir del tejido de callo.5.  . mediante modificaciones de la composición hormonal-mineral del medio de cultivo.

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*GRACIAS POR SU ATENCIÓN* .

cgiar.org/biotechnology /cultivo_tejidos/capitulo10_parte1y2.ciat. Editorial Trillas.pdf  Cultivo . et al (2001) Cultivos de tejidos vegetales: México. Hurtada. http://webapp. de protoplastos capitulo 10.Referencias  Daniel V.

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