Transformación Bacteriana

Dr. Nicolas Guiliani

Universidad de Chile, Facultad de Ciencias

01 de abril 2022
 Transferencia horizontal
(Lateral Gene Transfer) :
1-Vía para donación de ADN; 2-Incorporación en el genoma del receptor; 3-Adquisición nueva característica.

Ø Conjugación
- Contacto Donadora/Receptora
- Transferencia entre dominios (bacteria/plantas; bacteria/levadura).
Cambio genético estable producido
- Plasmidio movilizable; transposons conjugativos; “cromosoma”.
al incorporar DNA exógeno
Ø Transducción (bacteriofago)
- Generalizada
- Especializada

ØTransformación genética natural

- ADN “desnudo” en el ambiente – NO hay contacto D/R
- Organismos relativemente alejados físicamente
- Estado de Competencia
- Codificada en el cromosoma
 Transformación Artificial
Estado de Competencia inducido
por tratamiento Físico, Químico, Enzimático

ØGolpe de calor (42°C) en presencia de CaCl2

ØProtoplastos (lizozima) en medio hipertónico y PoliEtilenoGlicol

ØElectropermeabilización/Electrotransformación.

90
80
8 ms
70
Flujo de ATP

60
50
40
30
20
10
0
0 6,4 6,7 7 7,3 7,5 7,8 8 8,5 9 9,5
E (Kv/cm)
Transformación bacteriana
Griffith, 1928
The significance of pneumococcal type
el “principio transformante”

Avery et al., 1944: el ADN es

el “principio transformante”.
Hotchiss, 1949.
Herschey y Chase, 1952.

Desarrollo de la
genética bacteriana
Transformación Bacteriana

Proceso biológico mediante él cual una bacteria

susceptible capta y integra un ADN doble cadena
exógeno libre en el medio ambiente, y, por ende,
adquiere por recombinación una variación hereditaria.

Estado de competencia
Propiedad de las bacterias de inducir un estado fisiológico
que permita la captación y la integración de un ADN exógeno
de manera tal que éste se encuentra en una forma resistante a
la acción de DNAsas exogenas.
Transformación Bacteriana

* ADN doble hebra

* Interacción de una sola molécula de ADN / Cinética de Saturación

* Estado de competencia está influido por:

- Densidad celular
- Temperatura
- pH
- Nutrientes
 Transformación bacteriana

Ø Liberación/aparición del ADN

exógeno en el ambiente.

Ø 1. Desarrollo del estado de competencia.

Ø 2. Unión del ADN.

Ø 3. Procesamiento y Internalización del ADN.

ØFase de Eclipse (período transitorio).

Ø 4. Integración del ADN exógeno en el

cromosoma de la célula receptora
(estabilización del ADN exógeno).
Fase de Eclipse
 Sin especificidad
de Entrada
Entrada del ADN en bacterias Gram-positivas

Endonucleasa-1
específica de transformación

EndA

ComG1
3’
 Homologías entre proteínas involucradas
en distintos procesos de translocación de ADN

Transformación
Conjugación ADN-T
Secreción de proteína
Secreción de proteína
Pilación
Transformación en Bacterias (107 cel/ml) Sin especificidad
Gram-positivas 17 AA de Entrada

Señales Ambientales Misma especie

o
Especie cercana

41 AA

Regulón inducido por competencia

NADH oxidase (Nox) (SSB) (E) (P) B B/I Autolisina

30-80 sitios
(~14 genes)

100% - FIN DE LA FASE EXPONENCIAL - 10/15 min.

Streptococcus pneumoniae
Transformación en Bacterias Sin especificidad
Gram-positivas de Entrada
Diferencias con S. Pneumoniae

Ø Fase estacionaria (20%).

Ø Cultivos competentes heterogéneos (dimorfismo C/NC). Misma especie

o
ØDesarrollo de la competencia: Especie cercana
Äfase de crecimiento (densidad celular).
Ätipo nutricional (glucosa; AA).

comS

Bacillus subtilis
Transformación en Bacterias Especificidad
Gram-negativas de Entrada

Hemophilus influenzae
(Gram-negativo)

Ø Fase estacionaria
Ø 100% del cultivo
Ø Inducción “interna”
Ø 80 % T4SS / 20 % autolisis
Transformación en Bacterias Especificidad
Gram-negativas de Entrada

DUS (“DNA Uptake Sequence”)

Transformasoma (~12)
o
Pseudopili (T4P)