Universidad Nacional “Pedro

Ruiz Gallo”

Avances en transformación en Papa

para inducir resistencia a tizón tardío*
Docente : MSc. Martha Vergara Espinoza
Alumno : Rómulo Aycachi Inga

* María Luisa Guevara Fujita; Bióloga; MSc.

Centro Internacional de la Papa – Departamento de Mejoramiento y
Recursos Genéticos.
 INTRODUCCIÓN

ENFERMEDADES

Produccion de papa en el
mundo se ve afectada
VIRUS BACTERIAS HONGOS

Graves pérdidas en la
produccion agrícola
Tizón tardío de la papa Phytophthora infestans

•Ocasiona pérdidas de mas de 15% de la pro-

ducción mundial.
•Causante de hambruna 1845 – 1847.
•Distribución mundial (en casi todas las zonas
paperas del mundo).
¿Qué se estaba haciendo?
Mejoramiento
convencional

Combinación de progenitores
altamente resistentes
al tizón tardío

Dificultades

Complejidad de características
genéticas del patógeno que son
heredadas de forma cuantitativa

Presencia de nuevas cepas

Mas resistentes (recom-
Binación sexual)
¿Qué se está haciendo ahora?

Introducción de genes fo-

ráneos que confieran re-
sistencia a la enfermedad
¿Qué es lo busca hacer este trabajo?
 Usar genes que expresen pp. con efecto
antifúngico y antimicrobiano con la idea de
incrementar las respuestas defensivas de la
planta frente al ataque del patógeno
 Se busca un efecto sinérgico en la acción de
estos genes cuando se usan más de dos genes
por evento de transformación.
¿Cómo hacerlo?
 ¿Qué se utilizó?
 Osmotina, lisozima (bovina y del fago T4)
y glucanasa. Familia de genes
altamente con-
servada en So-
Osmotina: pp. que se expresa en las plantas en lanaceas
respuesta a situaciones de estrés (salinidad
↑ resistencia a infec-
estímulo hormonal, ataque de patógenos). ciones causadas
por hongos

Glucanasa: pp. que cataliza la hidrólisis de poli-

Sacáridos presentes en la pared celular del hongo.

Lizosima: pp. con actividad antimicrobiana, a ni-

Vel de la pared celular de las bacterias.
 ¿Cómo se hizo?
Desarrollo de construc- Se hicieron clonamientos a par-
ciones genéticas tir de un ADNc de osmotina
pA13 de S. commersonii
En
Llevan uno, dos y tres de
los genes mencionados Vector binario de transforma-
ción (pMOG800)
Se adicionaron

Lisozima bovina c2 y la lisozima

del fago T4

Estos genes con sus respectivos pro-

motores y terminadores, han sido
aislados en ambos sentidos de ori-
entación respecto al vector inicial
 Es ADNc (clon G46) de S. tuberosum
Gen de glucanasa
Se le escogió el promotor
Ubiquitin 3

Ha sido insertado entre la osmotina

y lisozima en una sola orientación

Se seleccionó variedad Amarilis INIA

Transformación de Resistencia moderada al

Tizón tardío
las plantas
Estos genes se introdujeron en la ce-
pa LBA4404 de Agrobacterium
Efiencia de esta variedad
es relativamente baja
 Regeneración y selección

Se hicieron modificaciones Medio de selección a base

a los medios de de kanamicina, también
regeneración fue modificada
De 100 mg/L a 50 mg/L
ya que los explantes a
Regenerantes obtenidos fue- dosis altas sufrían ne-
Ron colocados en ½ con anti- crosis y morían
Biótico (Km 50 mg/L)

Luego fueron pasados a

“Magentas”

Prueba de callos ↑ dosis de Km, formac

Líneas transgénicas ob- de callos → transgén.
tenidas
PCR Primers de Km, selec.
Líneas amplif. Produc.
Osmotina
Osmotina

Matar a P. ADNc pA13 de S.

infestans Clonamientos commersonii
Célula vegetal
Se le adiciona lisozi-
Agrobacterium ma bovina c2 y del
fago T4
DNAc Osmotina

Vector binario de
transformación pMOG800

Cepa LBA4404 Kanamicina

 Transformación
de las plantas

Variedad Amarilis
INIA

Prueba de callos y
PCR

Chequeo

Medio de selec-
ción Km 50 mg/L

Medio de regene-
ración Km 50 mg/L
 RESULTADOS Y DISCUSIÓN
 Se logró transformar algunas líneas.
 Eficiencia de transformación baja: 30%
(32/107 líneas chequeadas).
 Estas líneas serán sometidas a infección
por el patógeno, tanto a nivel de
laboratorio como de campo.
 Se espera aumentar el número de genes
en aquellas construcciones que sean
prometedoras.
¡¡¡Gracias!!!