UNIVERSIDAD NACIONAL DEL SANTA

FACULTAD DE INGENIERIA

ESCUELA PROFESIONAL DE INGENIERIA AGRÓNOMA

"INOCULACIÓN E INCUBACIÓN DE Metarhizium anisopliae

EN SUSTRATO DE ARROZ"

DOCENTE

Ing. Vega Miranda Máximo Vidal

CURSO

BIOTECNOLOGÍA AGRÍCOLA

INTEGRANTES

Evangelio Caballero Jeampierre

Haro Valerio Yojan
Loja Zavaleta Joaquin
Lopez Infantes Lincoln
Minaya Chavez Omar
Ramirez Bonilla Rull Stuart
Vega Pacaya Karol

VI CICLO – 2023

NUEVO CHIMBOTE
I. INTRODUCCION.
El uso excesivo de productos químicos en los cultivos agrícolas es un
problema, ya que algunos insectos han desarrollado resistencia a estos. Por lo tanto,
se ha vuelto necesario buscar medios alternativos para el control biológico de plagas
para poder minimizar el uso de estos químicos.

El control biológico provee herramientas adicionales para el manejo de plagas

que permite romper los ciclos de resistencia de los insectos, así como solventar
problemas de residuos para la producción de alimentos orgánicos. Existen más de
750 especies de hongos entomopatógenos diseminados en el medio ambiente que
provocan infecciones fungosas a ciertos insectos, las cuales pueden regular hasta en
80% sus poblaciones. Dentro de los géneros más importantes están: Metarhizium,
Beauveria, Aschersonia, Entomophthora, Zoophathora, Hirsutella, Fusarium y
Verticillium.

En este contexto Metarhizium anisopliae es un hongo filamentoso

caracterizado y utilizado para el control de plagas, además el uso de sus enzimas es
empleado como catalizador biológico en el sector industrial. Es una de las especies
más comunes que se han encontrado, estudiado y utilizado en todo el mundo
principalmente como agente de control biológico.Este hongo se ha aplicado con
éxito desde la década de 1970 en Brasil para controlar plagas en caña de azúcar. M.
anisopliae también se ha utilizado como agente de control biológico o ACB de
plagas de diversos insectos: termitas (Isoptera), langostas (Locusta migratoria L.),
salivazos (Aeneolamia spp. F., Prosapia spp. F., Nilaparvata lugens Stål),
escarabajos (Adoryphorus couloni B., Antitrogus parvulus Britton, Aphodius
tasmaniae Hope, Oryctes rhinocerus L.), gusano barrenador (Diatraea saccharalis
F.) y para el control de los mosquitos vectores de la malaria, incluyendo sus estados
larvales (Buti et al., 1994).
 II. MARCO TEORICO.
II.1. Taxonomía.
Metarhizium robertsii –antes conocido como M. anisopliae, e incluso antes como
Entomophthora anisopliae (basionimo) es un hongo que crece naturalmente en suelos
de todo el mundo y causa enfermedades en varios insectos al actuar como parasitoide.

Reino: Hongos

División: Ascomycota

Clase: Sordariomicetos

Orden: Hipocreales

Familia: Clavicipitáceas

Género: Metarhizium

Especies: M. robertsii

II.2. Biología.
La enfermedad causada por el hongo a veces se llama enfermedad de la
muscardina verde debido al color verde de sus esporas. Cuando estas esporas mitóticas
(asexuales) (llamadas conidias) del hongo entran en contacto con el cuerpo de un
insecto huésped, germinan y las hifas que emergen penetran la cutícula. Luego, el hongo
se desarrolla dentro del cuerpo y finalmente mata al insecto después de unos días; Es
muy probable que este efecto letal se vea favorecido por la producción de péptidos
cíclicos insecticidas (destruxinas).

II.3. Modo de acción.

Además de su efectividad para el control de insectos plaga, Metarhizium
anisopliae ha sido identificado como un organismo que aporta positivamente en el
crecimiento de las plantas, aunado a que no ataca insectos benéficos para los cultivos,
como las abejas o mariposas.

El proceso de infección de los HEP comienza cuando las conidias o esporas se

adhieren al insecto. Luego, dependiendo de condiciones de humedad y temperatura, las
conidias germinan sobre la cutícula (capa exterior del insecto), para posteriormente
degradarla mediante procesos mecánicos y enzimáticos e ingresar al insecto por las
partes blandas del mismo (espacios entre la cabeza y tórax, tórax y abdomen, y pliegues
en las patas), para desarrollarse en su interior, colonizando distintos órganos. En ese
proceso, el hongo produce toxinas que afectan principalmente el sistema muscular y
excretor del insecto. Es en esta etapa donde pueden evidenciarse los primeros síntomas
de la infección, puesto que los individuos modifican su conducta habitual, dejando de
alimentarse y reproducirse. Del mismo modo, se afectan los mecanismos de defensa,
permitiendo que el ciclo de la enfermedad siga avanzando.

Producto de la acción de las toxinas el insecto muere, siendo totalmente

colonizado por el hongo, incluso en su exterior, produciendo nuevas conidias que se
dispersarán en el ambiente y darán inicio a un nuevo ciclo si las condiciones
ambientales son las adecuadas.

Figura 1.

Modo de acción de Metarhizium anisopliae

III. MATERIALES Y METODOLOGIA.
III.1. Materiales para la elaboración del sustrato.
 3 kilos de arroz
 Una bandeja
 Agua corriente de la llave
 Antibiótico (Tetraciclina)
 Una cuchara
 Una malla mosquitera
 Un colador de cocina de plástico grande.

III.2. Materiales para la inoculación de Metarhizium anisopliae.

 30 ml de aceite vegetal para cocina
 Una cuchara grande para batir el arroz con el aceite
 Bolsas de polipropileno de 25 x 35 cm
 Un encendedor
 Polvo soluble de Metarhizium anisopliae
 Agua destilada

III.3. Preparación de sustrato de arroz.

1. Se coloca el arroz en la bandeja y empieza a llenarla con agua hasta que el arroz
esté bajo el agua, agita vigorosamente para lavar el arroz y empiece a soltar
polvo y suciedad.
2. Vierte el agua sin perder el arroz y repite el procedimiento dos veces más. El
propósito de este proceso es eliminar la mayor cantidad posible de hongos y
bacterias que puedan haber crecido durante el almacenamiento del arroz.
3. Para el último lavado, llenarlo con agua y agregar una cucharada de antibiótico
(bactericida) tetraciclina por cada 25 litros aproximadamente. Agita
vigorosamente y deja reposar el arroz con el agua y el antibiótico durante 30
minutos. Cada 10 minutos se agita vigorosamente el arroz para que el antibiótico
penetre bien en los granos.
4. Cuando finalice el tiempo, se retira el agua y se separa completamente el arroz
del agua mediante un colador.
5. Finalmente, coloca el arroz sobre una superficie inclinada previamente
desinfectada y deja escurrir el exceso de agua, esto puede tardar de 10 a 30
minutos, dependiendo del tiempo. Preferiblemente realizar este procedimiento
en un área cubierta, evitando fuertes corrientes de aire.
6. Pasado un tiempo, se controla el arroz cogiendo un puñado de granos con la
mano y abriéndola. El arroz no debe estar mojado, sino pegado a la mano y la
mano debe estar moderadamente húmeda. Si sale del todo es que hay demasiada
humedad y no es recomendable. Con la práctica se llega al punto exacto
necesario para el crecimiento óptimo del hongo.
7. Cuando tengamos asegurada la humedad deseada, vertemos todo el arroz en la
base y añadimos unos 10 ml de aceite vegetal por cada kilogramo de arroz.
Mezclar bien con una cuchara grande hasta que el arroz esté bien cubierto de
aceite.
8. Luego pesa 250 gramos de arroz y mételos en una bolsa de polipropileno. Cierra
la bolsa con un nudo ciego e intenta dejar aproximadamente un 50% de aire en
la bolsa.
9. Cuando hayas terminado, mete todas las bolsas en la olla a presión para
esterilizarlas.
10. Una vez finalizada la esterilización, las bolsas se sacan y se llevan a un lugar
cerrado, preferiblemente cerca de la campana, donde se realiza la siembra.

III.4. Pasos para la inoculación e incubación de Metarhizium anisopliae.

1. El docente del aula prepara una solución llamada suspensión de esporas
mezclando polvo de esporas de Metarhizium anisopliae en agua esterilizada y
agitándola durante 3 minutos, luego procede a dispensar la cantidad a utilizar.
2. Agregue el alcohol a la jeringa dejando correr hasta que se vacíe, luego coloque
el tubo en el agua esterilizada y llénelo inmediatamente. Esto limpiará la jeringa
y eliminará cualquier resto de alcohol.
3. Limpiar toda el área de trabajo, encender una vela, encender la aguja, inyectar
10 ml de la suspensión de esporas en la bolsa, retirar la jeringa, limpiar el lugar
de la inyección con un algodón empapado en alcohol y poner cinta adhesiva para
sellar el agujero. Limpie la jeringa con otro bastoncillo de algodón empapado en
alcohol y vuelva a colocar la aguja.
4. Repita el proceso de inoculación hasta terminar todas las bolsas.
5. Bolsa por bolsa se moverá para que toda la solución de esporas quede
uniformemente en todo el sustrato.
6. Completa el proceso colocando bien la bolsa en la caja, el crecimiento máximo
ocurrirá entre 17 y 20 días después de la inoculación.
7. Durante el periodo de incubación cada 4 días hay que tomar bolsa por bolsa y
fraccionar el micelio, ya que este va endureciendo el arroz y crea poca
disposición de oxigenación, si no se ejecuta esta acción corremos el riesgo de
que el hongo no esporulará. Se debe de hacer al menos 4 rompimientos de
micelio durante el periodo de incubación.

Figura 2.

Solución de esporas con el agua destilada para la inoculación.

Figura 3.

Inoculación en las bolsas con sustrato de

arroz.