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BIOQUMICA Y FISIOLOGA VEGETAL Ii PRCTICA 1.

GERMINACIN Y VIGOR DE LAS SEMILLAS INTRODUCCIN Las semillas constituyen, dentro del ciclo de vida de las plantas, la unidad de dispersin y el medio de perpetuacin de la especie y a la vez son importantes como fuente alimenticia para el hombre. Las caractersticas de viabilidad y vigor de una especie de inters pueden ser observadas en una curva de germinacin o a travs de otras tcnicas, tales como la prueba del colorante de tetrazolio. El vigor es un atributo solamente de semillas capaces de germinar, por lo que dichas pruebas son designadas para evaluar uno, varios o la mayora de los efectos menores del deterioro sobre el potencial de desempeo de las semillas. Para determinar el efecto de condiciones ambientales en semillas es til producir un envejecimiento en ellas, el cual puede ser evaluado mediante pruebas de vigor y de germinacin en relacin a un testigo sin tratar. OBJETIVO GENERAL Determinar la viabilidad y el vigor de semillas de maz (Zea mays L.) sanas y envejecidas. OBJETIVOS PARTICULARES 1. Elaborar una curva de germinacin de semillas de maz para determinar su viabilidad. 2. Determinar el efecto del estrs por calor en la viabilidad de las semillas de maz. 3. Evaluar el vigor de un lote de semillas de maz mediante la prueba de tetrazolio. 4. Determinar el efecto del estrs de calor en el vigor de semillas de maz mediante la prueba de tetrazolio. MATERIALES Y MTODOS MATERIAL POR EQUIPO 1 recipiente para siembra cuadrado (25 x 25 cm) o rectangular (20 x 30 cm) 3 bolsas de plstico sin asas (para 1kg). 1 piceta de agua destilada 1 probeta de 100 mL 1 mosca Algodn 1 vernier o regla Hojas de papel filtro o toallas absorbentes 3 vasos de precipitados de 250 ml 3 navajas de costilla 4 tubos de ensaye grandes con tapn de rosca 1 gradilla Gasas de algodn o red de plstico

2 parrillas elctricas 2 termmetros 2 vasos de precipitados de 1000 Ml. Marcador indeleble y cinta adhesiva para etiquetar Papel aluminio MATERIAL POR GRUPO. 1 Balanza 1 estufa de temperatura controlada Cloralex o cualquier otra solucin de cloro comercial Agua destilada MATERIA BIOLGICO 300 semillas de maz (Zea mays L.) por equipo REACTIVOS Solucin de 2,3,5-trifenil-tetrazolio al 1%. Cloruro de amonio (NH4Cl) METODOLOGA I. TRATAMIENTOS Y SIEMBRA DE SEMILLAS TRES DAS ANTES DE LA PRCTICA. 1. Seleccionar 300 semillas de maz y desinfectarlas con una solucin de cloro al 5% por 10 minutos. Enjuagar con agua destilada hasta que desaparezca el olor a cloro. 2. Separar 4 lotes de 70 semillas cada uno. El lote 1 ser el control, a los tres lotes restantes se les aplicarn los siguientes tratamientos de envejecimiento: ESTRS POR CALOR. El dao causado en las semillas por este mtodo se basa en el efecto de las altas temperaturas en la desnaturalizacin de las protenas. a) Lote 1. Tiempo corto. 1. Colocar las semillas dentro de una malla de gasa y sumergirlas en agua caliente a 70 durante 30 segundos. C, 2. Sacar la gasa y secar las semillas sobre papel o sanitas a temperatura ambiente. b) Lote 2. Tiempo largo. 1. Colocar las semillas dentro de una malla de gasa y sumergirlas en agua caliente a 70 durante 2 minutos. C, 2. Sacar la gasa y secar las semillas sobre papel o sanitas a temperatura ambiente. INMERSIN EN CLORURO DE AMONIO. El dao causado se basa en un aumento de la permeabilidad de la testa y la acumulacin de niveles txicos de la sal en el interior de la semilla.

1. Sumergir las semillas del lote 4 en una solucin de NH4Cl al 4% durante 1 hora a temperatura ambiente. 2. Enjuagar con agua destilada y dejar secar sobre papel o sanitas. SIEMBRA. 1. Reservar 20 semillas de cada Lote para la prueba de Tetrazolio. 2. Sobre la bolsa de plstico colocar una capa de algodn delgada (procurar no romperla) y humedecer con agua destilada. 3. Colocar 50 semillas del Control (Lote 1) en filas, cubrir con otra capa de algodn y humedecer con suficiente agua destilada El agua no debe escurrir, presionar con la palma de la mano para eliminar el exceso. 4. Colocar cuidadosamente el algodn en la bolsa de plstico, etiquetar con plumn indeleble y dejar en la estufa a 25 C. 3. Hacer lo mismo con los otros lotes . II. MEDICIN DE PARMETROS DE VIGOR. CURVA DE GERMINACIN 1. Observar las semillas sembradas, a partir de las 12 hrs. y despus de cada 6 h, hasta alcanzar las 72 h. Contar el nmero de semillas germinadas en cada tiempo. Calcular el porcentaje de germinacin en cada observacin mediante la siguiente frmula: (# de semillas germinadas/# total de semillas) x 100= % de germinacin 2. Tabular los datos. VELOCIDAD DE CRECIMIENTO DE LA RADCULA 1. A partir del momento de germinacin (cuando la radcula ha roto la testa y se asoma por lo menos 3 mm) medir el crecimiento de la radcula cada 12 h en cada lote hasta alcanzar las 72 h. 2. Tabular los datos PRUEBA DE TETRAZOLIO 1. Sembrar de la manera descrita previamente cada lote de semillas por 24 horas antes de comenzar la determinacin. DA DE LA DETERMINACIN 2. Cortar las semillas longitudinalmente con la navaja, asegurndose de dejar expuesto el embrin.

FIG 1. Corte longitudinal de una semilla de maz. a) embrin.

3. Descartar una mitad de cada semilla y poner las otras mitades en un tubo de ensaye con suficiente solucin de tetrazolio para cubrirlas y envolver completamente el tubo con papel negro. Hacer lo mismo con cada lote. 4. Dejar los tubos a temperatura ambiente durante una hora. 5. Examinar la superficie del corte para observar algn cambio de color. Si las semillas estn vivas, el reactivo se volver rojo. 6. Registrar los resultados. 7.-Contar el nmero de semillas coloreadas en cada lote. Si no se completa la observacin durante el horario del laboratorio, se pueden guardar en el refrigerador los tubos con las semillas en tetrazolio para hacer ms lentas las reacciones enzimticas y observarlas al da siguiente. 8.-Expresar el nmero de semillas viables con la siguiente frmula: (# de semillas coloreadas con rojo en ms del 50% del eje/# total de semillas) x 100= % viabilidad GUA PARA REPORTAR E INTERPRETAR LOS RESULTADOS Nota: para elaborar el reporte, se deben complementar todos los resultados con los de los otros equipos. 1. Construir una curva de germinacin para todos los lotes graficando el porcentaje de semillas germinadas (y) contra el tiempo de imbibicin en h (x). 2. Sealar en la curva correspondiente cuando se alcance el 50% de germinacin en las semillas de cada lote (Velocidad de germinacin). 3. Graficar la longitud de la radcula (mm) contra el tiempo de germinacin (h) para cada lote. 4. Comparar los resultados de los parmetros de vigor (curva de germinacin y velocidad de crecimiento de la radcula) con los resultados de la prueba de tetrazolio. CUESTIONARIO 1. Qu es la germinacin? 2. Qu es el vigor? 3. Qu es la viabilidad? 4. Qu proceso fisiolgico debe estar ocurriendo en las semillas para mantenerlas vivas? 5. La sal de tetrazolio es un indicador que por accin qumica o fotoqumica se reduce a un componente insoluble (trifenil-formazan) de color rojo brillante. Qu lo reduce en las semillas? BIBLIOGRAFA 1. Barcel Coll, J.; Nicols Rodrigo, G.; Sabater Garca, B. y Snchez Tamez, R. 1992. Fisiologa Vegetal. Ediciones Pirmide, Madrid 2. Bidwell, R.G.S. 1993. Fisiologa Vegetal. AGT Editor, Mxico. 3. Salisbury, F.B y Ross, C. W. 1994. Fisiologa Vegetal. Grupo Editorial Iberoamrica. Mxico D.F. Mxico.