TEMA 5.

PROCESAMIENTO DEL
TRANSCRITO DE ARN MENSAJERO.
Modificación del transcrito primario. Eliminación de
secuencias. Intrones y exones. Variedades de splicing.
Síntesis de la caperuza y poliadenilación.
TEMA 5. PROCESAMIENTO DEL TRANSCRITO DE ARN MENSAJERO.

1.-Introducción.
Nos centraremos en aquellas modificaciones sobre los transcritos primarios de ARN que portan la información
codificante de proteínas (pre-ARNm) en organismos eucariotas

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TEMA 5. PROCESAMIENTO DEL TRANSCRITO DE ARN MENSAJERO.

1.-Introducción.

Nos centraremos en aquellas modificaciones sobre los transcritos primarios de ARN que portan la
información codificante de proteínas (pre-ARNm) en organismos eucariotas

Pierce, Benjamin. Genetics A Conceptual Approach, 4th ed

David L. Nelson y Michael M. Cox. Lehninger. Principles of Biochemistry. 7ªEd
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1.-Introducción.

La adición de la Cap, la cola de Poli(A) y el proceso de corte y

empalme (splicing) ocurren de manera simultánea al proceso de
transcripción (procesamiento nuclear).

Las enzimas responsables “cabalgan sobre la cola fosforilada

(CTD)” de la ARN pol II a medida que se transcribe un ARN y
procesan el transcrito de manera secuencial a medida que este
emerge de la ARN polimerasa

Cuando algún transcrito presenta una edición de ARNm, esta tiene

lugar sobre el transcrito maduro y puede tener lugar en el núcleo o
el citoplasma, siempre después de la transcripción

Alberts. The Molecular Biology of the Cell (6th edition).

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2.- Adición de la estructura Cap o caperuza.

La estructura Cap se genera mediante la condensación

de una molécula de guanosín trifosfato (GTP) en el
extremo 5’ trifosfato del transcrito de ARN seguida de
una modificación de la base nitrogenada de guanosina,
generando un ribonucleótido de 7-metil-guanosina
unido al nucleótido 5’ terminal del ARNm mediante un
enlace poco común enlace 5´-5´ trifosfato.

Secuencia de actuación de diferentes enzimas:

1.- Fosfohidrolasa hidroliza el grupo fosfato en posición

γ del nucleótido en el extremo 5´

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2.- Adición de la estructura Cap o caperuza.

2.- A partir de un ribonucleótido de guanosina trifosfato (GTP),
la enzima guanililtransferasa promueve la formación un nuevo
enlace fosfoanhidro entre el grupo P en posición α del residuo
de guanosín trifosfato (GTP) y el grupo P en posición β del
nucleótido en el extremo 5´, liberando pirofosfato

3.- Posteriormente, la enzima guanina-7-metiltransferasa

metila la base guanina en el átomo de N en posición 7,
transfiriendo un grupo metilo desde el co-sustrato S-adenosil-
L- metionina, liberando S-adenosil-L-homocisteína

4.- Otros dos grupos metilo, pueden (no en todos los

transcritos) ser añadidos metilo son añadidos a los grupos OH
unidos al C2’ de los dos primeros nucleótidos adyacentes a la
CAP mediante la enzima 2-O-metiltransferasa.
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2.- Adición de la estructura Cap o caperuza.

Todas estas reacciones tienen lugar durante los primeros estadios de la transcripción, después de añadir
los primeros 20-30 nucleótidos del transcritos.

Las enzimas responsables de la formación de la Cap (fosfohidrolasa, guanililtransferasa, guanina-7-

metiltransferasa y 2-O-metiltransferasa) están asociadas al dominio CTD de la ARN pol II formando un
complejo proteico denominado complejo de síntesis de la Cap (CSC; cap-synthesizing complex).

Este complejo se libera del extremo 5´ del transcrito y la Cap permanece unida a la región CTD mediante
su asociación al complejo de unión de Cap (CBC; cap-binding complex o CBP cap-binding Proteins )

Funciones de la CAP:

- Facilita la unión de los ribosomas en el extremo 5’ del transcrito de ARNm (reconocimiento

ribosomas)
- Protege al transcrito de la acción de las 5’exonucleasas (incremento de su estabilidad)
- Facilita la exportación del transcrito desde el núcleo.
- Potencia el splicing.
David L. Nelson y Michael M. Cox.
Lehninger. Principles of Biochemistry. 7ªEd
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3.- Corte y empalme (Splicing). Eliminación de intrones.

3.1.- Tipos de intrones.

Existen diferentes tipos de intrones:

Grupo I y Grupo II: aunque difieren de sus mecanismos de corte y empalme,

comparten la característica que son autocatalíticos, es decir no necesitan
enzimas proteicos, ni dependiente de ATP para el corte y empalme. Grupo ATP

ATP

I: en algunos genes nucleares, mitocondriales. Grupo II: en los transcritos

primarios de ARNm de mitocondrias

Autocatalíticos Espliceosoma
Grupo IV: requiere para el corte y empalme ATP, una endonucleasa y la
posterior acción de ligasa. Se encuentra en ciertos ARNt.

Grupo III (intrones de espliceosoma): se encuentra en los transcritos

primarios de ARNm nuclear. Requiere ATP para el ensamblaje del complejo
de corte y empalme
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3.- Corte y empalme (Splicing). Eliminación de intrones.

3.2.- Espliceosoma.

Macrocomplejo proteico que se forma durante los procesos de corte y empalme del ácido ribonucleico mensajero nuclear
para eliminar los intrones.

Formado por 5 snRNPs (small nuclear ribonucleoprotein particles, costituidas por snRNAs + una porción proteica), con
actividad endonucleasa y ligasa, junto a cientos de proteínas anejas conocidos factores de splicing (splicing factors).

Berg JM, Tymoczko JL, Stryer L. Biochemistry. 6th edition.

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3.- Corte y empalme (Splicing). Eliminación de intrones.

3.2.- Espliceosoma.

En un intrón perteneciente al grupo III suelen encontrarse 3 elementos fundamentales para el proceso de splicing:

1.- Secuencia consenso que comienza por el dinucleótido GU en el extremo 5’, marca el sitio de corte-empalme en el
extremo 5’ del intrón. Reconocida por el snRNA U1 de la snRNP U1

2.- Secuencia consenso que finaliza por el dinucleótido AG en el extremo 3’, marca el sitio de corte-empalme en el
extremo 3’ del intrón.

3.- Secuencia de de ramificación , con un una ribonucleótido de A situado a 20-50 nucleótidos aguas arriba del extremo 3’
del intrón. Reconocida por el snRNA U2 de la snRNP U2.

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3.- Corte y empalme (Splicing). Eliminación de intrones.

3.2.- Espliceosoma.

Comienza con la unión de la snRNP U1 al extremo 5’ del intrón

Seguidamente tiene lugar la unión de la snRNP U2 al sitio de

ramificación. Esta unión es dependiente de la hidrólisis de ATP.

Posteriormente las subunidades snRNP U4 + snRNP U6

preensambladas se unen a las dos anteriores (formando un puente)

Finalmente la snRNP U5 se posiciona en la frontera 3’intron-5’exón.

Esta unión es dependiente de la hidrólisis de ATP, generando el
complejo espleciosoma inactivo.

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3.- Corte y empalme (Splicing). Eliminación de intrones.

3.2.- Espliceosoma.

snRNP U6 se separa de snRNP U4 (inhibidor de la actividad catalítica

de snRNP U6 hasta que este se posicione correctamente), sufriendo un
cambio conformacional que le permite, por un lado, interaccionar
con snRNP U2 y por otro desplazar snRNP U1 del extremo 5’ del
intrón, generando el complejo espleciosoma activo.

La liberación de snRNP U4 y snRNP U1 es dependiente de la

hidrólisis de ATP

Las subunidades snRNP U6 + snRNP U2 forman el centro catalítico

del espliceosoma

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3.- Corte y empalme (Splicing). Eliminación de intrones.

3.2.- Espliceosoma.

Tiene ahora lugar la primera reacción de transesterificación, en el que OH

unido al C2’ del residuo de A en la secuencia de de ramificación induce un
ataque nucleofílico sobre el grupo P que forma parte del enlace fosfodiester
que mantiene unido el extremo 5’ del intron al exón previo. Esto induce la
formación de enlace fosfodiester atípico en el sitio de ramificación generando
una estructura en forma de lazo.

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3.- Corte y empalme (Splicing). Eliminación de intrones.

3.2.- Espliceosoma.

Seguidamente snRNP U5 alinea el extremo 3’OH del primer exón

posicionándolo cerca del grupo P que forma parte del enlace
fosfodiester que mantiene unido el extremo 3’ del intron al exón
posterior.

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3.- Corte y empalme (Splicing). Eliminación de intrones.

3.2.- Espliceosoma.

Este grupo OH induce un ataque nucleofílico sobre el P que forma

parte del enlace fosfodiester que mantiene unido al ultimo nucleótido
del intron (siempre una G) y el primero del exón. Generando la
segunda reacción de transesterificación, uniendo los dos exones
mediante un enlace fosfodiester.

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3.- Corte y empalme (Splicing). Eliminación de intrones.

3.2.- Espliceosoma.

Posteriormente snRNP U5, snRNP U6 y snRNP U2, se liberan unidos

al lazo

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3.- Corte y empalme (Splicing). Eliminación de intrones.

3.2.- Espliceosoma.

Durante el proceso se splicing un grupo de proteínas

denominadas EJC (Exon Junction Complex) permanecen
unidas al sitio de corte y empalme.

Este complejo marca físicamente el lugar donde ha tenido el

proceso de corte y ayudan a estabilizar el transcrito de RNA

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4.- Adición de la cola de Poli A.

La maduración concluye con la modificación del extremo 3’ del

transcrito al que se le añade una cola de poliA (30-250 o más
residuos seguidos de ribonucleótidos de A).

Estos nucleótidos no están codificados en el ADN se añaden tras

la transcripción.

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Pierce, Benjamin. Genetics A Conceptual Approach, 4th ed.

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4.- Adición de la cola de Poli A.

Esta adición está mediada por un complejo enzimático

multimérico de factores de poliadenilación asociados a CTD.
Además es necesaria la presencia en el transcrito de ARN de la
secuencia consenso AAUAAA posicionada 10-30 nucleótidos aguas
arriba del sitio de corte y una secuencia rica en U y G a 20-40
nucleótidos aguas abajo del sitio de corte.

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4.- Adición de la cola de Poli A.

Dos factores de poliadenilación multiméricos asociados al CTD denominados CPSF (cleavage
and polyadenylation specificity factor) y CstF (cleavage stimulation factor) son de especial
importancia:

CPSF reconoce la secuencia AAUAAA en el transcrito primario. CstF se situa de manera

adyacente forman un complejo que permiten la llegada de factores de corte como una
endonucleasa dimérica compuesta por las subunidades CFI y CFII (factor de escisión:
Cleavage Factor) que corta el ARNm 11 a 30 nt más abajo.

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Pierce, Benjamin. Genetics A Conceptual Approach, 4th ed.
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4.- Adición de la cola de Poli A.

El corte de la endonucleasa deja un 3’OH que es reconocido por la enzima Poliadenilato
polimerasa (PAP), que sólo acepta ATP como sustrato y añade hasta 250 ribonucleótidos de
A

A esta cola de poliA se le unen de manera específica una serie de proteínas denominadas
PBP (PoliA Binding Protein) que ayudan a su estabilización y su posterior reconocimiento
por los ribosomas

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5.- Visión integrada de los tres procesos

El transporte de los ARNm desde el núcleo hacia el citoplasma a través de los poros nucleares es altamente
selectivo, de manera que sólo los ARNm correctamente procesados son exportados.

Para ello el ARNm debe estar unido a un set de proteínas concretas que hemos venido mencionado, CBP
(cap-binding Proteins), EJC (Exon Junction Complex) y PBP (PoliA Binding Protein)

Essential Cell Biology (4th edition).

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5.- Visión integrada de los tres procesos

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Transcrito maduro (ARNm) bastante más corto que el transcrito primario

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6.- Modificaciones del proceso general. Splicing alternativo y sitios alternativos de poliadenilación.
Permite obtener a partir de un mismo transcrito primario de ARN,
distintas isoformas de ARNm maduro y proteínas, las cuales pueden
tener funciones diferentes (aumento de la diversidad fenotípica).

Nunca se altera la linealidad (orden).

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Biochemistry. 6ªEd

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7.- Edición de la secuencia de ARNm maduro

Cambios discretos a las secuencias específicas de nucleótidos dentro de una molécula de ARN después la actuación de la
ARN polimerasa, lo que afecta el mensaje del transcrito cuando es traducido a proteína

Las más comunes en animales las desaminación de las bases Adenina, para producir Inosina (A-I) (cuya base nitrogenada
es la hipoxantina), y Citosina, para producir Uridina (C-U) (cuya base nitrogenada es Uracilo).

codon stop

LDL (no editado) QM (editado)

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