Universidad Nacional de La Patagonia San Juan Bosco

QUÍMICA ANALÍTICA Trabajo Práctico de Laboratorio Nº5

ESPECTROFOTOMETRIA UV-VISIBLE

Objetivo: analizar la composición de una disolución que contiene una mezcla de indicador
azul de bromotimol en su forma molecular AH (acida) y disociada A- (básica). Las cuales
presentan absorción en la región visible del espectro. Las propiedades espectrofotométricas
de ambas formas son diferentes, lo que permite su cuantificación en disoluciones en las que
aparecen mezcladas. Para ello habrá que registrar los espectros de absorción de las dos
formas y obtener las correspondientes curvas de calibrado de las dos formas a dos longitudes
de onda seleccionadas.
Con los datos de estos análisis determinaremos la Ka del indicador determinando la
composición de cuatro mezclas.

Fundamento: las técnicas espectroscópicas se basan en la interacción de la radiación

electromagnética con la materia, A partir de esta interacción las moléculas pueden pasar a un
estado energético mayor, absorbiendo una cantidad de energía igual a la diferencia de
energías entre estos dos estados. Estos tránsitos energéticos dan origen a los espectros.
La espectroscopia Uv-Visible (espectros electrónicos) se debe a la transición de los electrones
mas externos de la molécula, desde niveles fundamentales hacia niveles más altos de
energía.

Ley de Lambert y Beer: si se hace incidir radiación monocromática sobre una muestra con
una concentración determinada que absorbe a esa longitud de onda, parte de la intensidad de
onda será absorbida y parte no, en proporción a dicha concentración.
Se llega mediante operaciones matemáticas a la expresión de la ley de Lambert y Beer.

A= ExLxC

Donde A es absorbancia, E es la absortividad molar que representa una medid de la radiación

absorbida por mol de sustancia y es un valor constante para cada sustancia a cada longitud de
onda, L es el recorrido de la luz por la solución que es equivalente al ancho de la cubeta y C
es la concentración de la solución.
Se deduce de la ecuación que la Absorbancia medible directamente en un espectrofotómetro
es directamente proporcional a la concentración de la solución.
Existen varios factores que afectan esta proporcionalidad, sobre todo las concentraciones
elevadas, por lo tanto, para cada muestra es necesario determinar el rango de estas a la cual
la ley es válida, esto se logra realizando curvas de calibrado que relaciona absorbancias con
concentraciones.
La ley de Lambert y Beer puede aplicarse al análisis cuantitativo de mezclas de dos o más
sustancias, siempre que sus respectivos espectros de absorción sean lo suficientemente
distintos. El procedimiento se basa en que la absorbancia es una propiedad aditiva, por lo
tanto, la suma de la absorbancia de cada uno de los componentes de la mezcla será igual a la
absorbancia total. Para una mezcla de dos componentes.

A= A1+A2 = E1xLxC1 + E2xLxC2

Supongamos, entonces, que nuestro problema es el análisis de una mezcla con dos
sustancias. En primer lugar, se habrá de registrar el espectro de absorción de cada una de
ellas por separado, al analizarlos podemos encontrarnos en dos situaciones.

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A) Los espectros no se solapan, por lo cual podemos analizar las muestras como si
estuvieran solas a cada longitud de absorbancia máxima.

B) Los espectros se solapan en una zona determinada de longitudes de onda, en este caso
se han de seleccionar dos longitudes de onda diferentes, λ1 y λ2 y obtener, con
disoluciones de las sustancias puras, las absortividades molares (E1 λ1; E1 λ2; E2 λ1; E2
λ2) de cada sustancia a esas longitudes de onda a partir de soluciones puras, con estos
datos se puede determinando la absorbancia de la mezcla a las dos longitudes de onda
determinar las concentraciones de cada componente en la mezcla despejando el siguiente
sistema de ecuaciones

A λ1= E1 λ1xLxC1 + E2 λ1xLxC2

A λ2= E1 λ2xLxC1 + E2 λ2xLxC2

Equipo:
Espectrofotómetro DR/3900 (intervalo de longitud de onda de 400 a 1100 λ)

Materiales:
Matraces 50 mL
Vasos de precipitado 125 mL.
Pipetas 5mL y de 10 mL

Soluciones:
Solución 5 x 10-5 de azul de bromotimol en medio acido(HA)
Solución 5 x 10-5 de azul de bromotimol en medio alcalino(A-)
Diluyente acido HCl 0,01M
Diluyente Básico Na(OH) 0,01M

Procedimiento:

A) Preparación de disoluciones de la forma acida de azul de bromotimol

Prepárense las siguientes diluciones a partir de la solución 5 x 10-5 de azul de bromotimol
en medio acido
Dilución 1: en matraz de 50 ml colocar 40 ml de la solución madre, llevar a enrase con
diluyente acido.
Dilución 2: en matraz de 50 ml colocar 30 ml de la solución madre, llevar a enrase con
diluyente acido.
Dilución 3: en matraz de 20 ml colocar 20 ml de la solución madre, llevar a enrase con
diluyente acido.
Dilución 4: en matraz de 50 ml colocar 10 ml de la solución madre, llevar a enrase con
diluyente acido.
A este pH el indicador se encuentra totalmente en su forma acida AH (pka 7,30)

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B) Preparación de disoluciones de la forma básica de azul de bromotimol

Prepárense las siguientes diluciones a partir de la solución 5 x 10-5 de azul de bromotimol
en medio básico
Dilución 1: en matraz de 50 ml colocar 40 ml de la solución madre, llevar a enrase con
diluyente básico.
Dilución 2: en matraz de 50 ml colocar 30 ml de la solución madre, llevar a enrase con
diluyente básico.
Dilución 3: en matraz de 20 ml colocar 20 ml de la solución madre, llevar a enrase con
diluyente básico.
Dilución 4: en matraz de 50 ml colocar 10 ml de la solución madre, llevar a enrase con
diluyente básico.
A este pH el indicador se encuentra totalmente en su forma básica A- (pka 7,30)

C) Obtención de los espectros en forma acida y básica del azul de bromotimol

Trabajamos para ello con las disoluciones A de la forma acida y básica

Utilizando los diluyentes acido y básico respectivamente como blanco, realizamos la

lectura de absorbancia para cada disolución desde 400 nm a 680 nm cada 10 nm. Es
importante recordar que cada vez que se cambie la longitud de onda hay que llevar a 0
nuevamente con el blanco correspondiente.
Realizar la curva Absorbancia vs λ.
Con estos datos obtendremos los máximos de absorción correspondientes a cada λ.

D) Obtención de las rectas de calibrado para las formas acida y básica de azul de
bromotimol

A la vista de los espectros de absorción antes realizados se observa un máximo para la

forma básica en torno a 620 nm y para la forma acida de 440 nm elegidos estos valores de
λ y llevando a cero con la solución diluyente adecuada se obtiene la absorbancia de las
diluciones preparadas en A y B.
Con estos datos se elabora una tabla

Dilución A B C D
Concentración [M]
Absorbancia 440nm
Absorbancia 680 nm

Trabajando en Excel se realizan las 4 curvas de calibrado que si dan como resultado una
recta con regresión mayor a 0,9 comprobaran que la solución cumple con la ley de
Lambert y Beer
Las rectas que se obtienen son de la forma y=ax
Si las comparamos con la ley de Lambert y Beer siendo
y = absorbancia
x = concentración
a= E.L
por lo tanto, E=pendiente /L
L para nuestra experiencia es 2,5 cm lo que nos daría un E con unidades M-1x cm-1,
calcularemos las E para ambas soluciones a las dos λ.

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E) Análisis de una muestra desconocida de Azul de bromotimol

Se determinará la absorbancia a 440 y 620 nm de 4 mezclas de solución de Azul de

bromotimol. Completando el siguiente cuadro.

Muestra Absorbancia 440 nm Absorbancia 620 nm

1
2
3
4

a partir de las ecuaciones correspondientes se determinará la concentración de AH y A-

F) Comprobación del pKa del azul de Bromotimol

Conociendo la concentración de AH y A- y midiendo el pH aplicando la ecuación de
equilibrio se determinará Ka y pka para comparar con los datos de tabla calculando
el error correspondiente a la experiencia.

Bibliografía:

Química Chang Décima Edición.

Análisis Químico Cuantitativo Tercera Edición (sexta edición original).
Fundamentos de Química Analítica Skoog; West; Holler; Crouch. Octava Edición.
Métodos Normalizados para Análisis de Aguas Potables y Residuales Diecisieteava
Edición.

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