Tabla de contenido

Introducción.........................................................................................................................................3
Metodología..........................................................................................................................................4
Nanopartículas y sus aplicaciones..................................................................................................4
Nanopartículas a base de polímeros...........................................................................................4
Nanopartículas sólidas: Nanopartículas de óxido de hierro, oro y plata.................................4
Nanopartículas a base de carbono..............................................................................................4
Nanopartículas a base de lípidos.................................................................................................5
Nanoemulsiones...........................................................................................................................5
Nanopartículas en aplicaciones biomédicas...............................................................................6
Dendrímeros.................................................................................................................................6
Nanopartículas y conjugados..........................................................................................................7
Nanopartículas dirigidas a células T en sangre.........................................................................7
Adhesión de fármacos mediada por receptores vasculares a células inmunes........................8
Las aAPC enriquecen la cantidad y la calidad de las células T. A...........................................8
Procesamiento......................................................................................................................................9
Acceso de las nanoestructuras a las células diana.........................................................................9
Rutas de administración..............................................................................................................9
Células diana y respuestas..........................................................................................................9
Diagnostico por Nanopartículas.......................................................................................................10
Nanopartículas multifuncionales para el inmunodiagnóstico del cáncer..................................10
Tratamiento en Linfoma No Hodgkin..............................................................................................16
Nanoterapía en Linfoma No Hodgkin..........................................................................................16
Liposomas...................................................................................................................................17
Nanopartículas poliméricas.......................................................................................................19
Tratamiento de Melanoma................................................................................................................19
Nanopartículas a base de lípidos..................................................................................................19
Nanopartícula de doble objetivo TAM similar a M2..................................................................21
Bibliografía........................................................................................................................................22
Introducción
Existen varios enfoques para usar la terapia génica como un componente del tratamiento del
cáncer. Algunos de estos pueden ser apropiados para neoplasias malignas hematológicas, así
como para tumores sólidos (1). A diferencia de la corrección de trastornos de un solo gen, la
terapia génica para el cáncer que intenta matar las células malignas presenta desafíos
adicionales relacionados con mutaciones adicionales o cambios inmunológicos utilizados por
las células cancerosas para sobrevivir. Uno de esos ejemplos será la Terapia de células T con
receptor de antígeno quimérico (1-2).
La inmunoterapia contra el cáncer ha cambiado el paradigma del tratamiento del cáncer.
Estas terapias tienen como objetivo mejorar las respuestas inmunitarias antitumorales con
menos efectos fuera del objetivo que las quimioterapias y otros agentes que matan
directamente las células cancerosas (1). En la inmunoterapia contra el cáncer, los agentes se
utilizan para activar o potenciar la activación del sistema inmunológico para atacar las células
cancerosas a través de mecanismos naturales, muchos de los cuales se evitan durante la
progresión de la enfermedad (2-3). Por lo tanto, la inmunoterapia se reconoce como una
estrategia prometedora para tratar, e incluso curar, ciertos tipos de cáncer (2).
Hace aproximadamente 10 años, los ensayos clínicos demostraron una eficacia significativa
del bloqueo de puntos de control y la terapia de células T del receptor de antígeno quimérico
(CAR) en ciertos cánceres, lo que llevó a la aprobación por parte de la Administración de
Drogas y Alimentos de los EE. UU. (FDA) de múltiples terapias y un cambio importante en
el papel de la inmunoterapia en la oncología en general (3). Estos tratamientos han inducido
remisiones completas prolongadas en un subconjunto de pacientes, lo que demuestra de
manera concluyente el potencial de la inmunoterapia en el cáncer. Estos éxitos han impulsado
un aumento dramático en la cantidad de agentes de inmunoterapia en pruebas en humanos y
una enorme cantidad de ensayos clínicos que exploran tratamientos combinados (3-4).
Sin embargo, tras los sorprendentes resultados iniciales observados en los ensayos de
inhibidores de la vía de muerte celular programada 1 (PD1) y la terapia con células CAR T
para leucemias y linfomas, el progreso ha sido moderado (1-2). Las combinaciones de
inmunoterapia, como el cotratamiento con anticuerpos que se dirigen al antígeno 4 de
linfocitos T citotóxicos (CTLA4) y PD1, han mostrado aumentos moderados en la eficacia,
mientras que provocan aumentos sustanciales en la toxicidad (1). Las terapias de células T con
CAR que han sido eficaces en cánceres hematológicos no han logrado hasta ahora tener un
impacto importante en el tratamiento de cánceres epiteliales sólidos mucho más prevalentes.
Por tanto, los enfoques adicionales para impulsar de forma segura y eficaz las respuestas
inmunitarias contra el cáncer siguen siendo una importante necesidad insatisfecha (2).
Una posible solución es romper con el paradigma tradicional de desarrollo de fármacos y
diseñar la administración de inmunoterapéuticos, centrando su acción en los tejidos diana (es
decir, los tumores y los ganglios linfáticos que drenan el tumor) o los tipos de células, para
controlar el momento y la ubicación de la inmunomodulación (1). Para lograr este objetivo, los
enfoques basados en la nanomedicina (la formulación de fármacos en materiales portadores
de menos de ~ 100 nm) pueden ofrecer los medios para aumentar tanto la seguridad como la
eficacia terapéutica de muchas inmunoterapias. Los desarrollos recientes en los campos de la
nanotecnología y la bioingeniería permiten nuevos enfoques que pueden mejorar
drásticamente no solo la seguridad sino también la eficacia de la inmunoterapia contra el
cáncer (2-3). La Formulación de inmunoterapéuticos en nanopartículas compuestas de lípidos,
polímeros u otros materiales se ha utilizado para alterar la exposición sistémica, promover la
acumulación en tumores, mejorar la captación en los compartimentos inmunitarios innatos y
alterar la señalización a nivel de una sola célula (2).

Metodología:
Nanopartículas y sus aplicaciones
Nanopartículas a base de polímeros
Las nanopartículas poliméricas (PNP) se utilizan ampliamente como portadores de fármacos
para que exista una controlada y sostenida liberación (5-6). La entidad encapsulada puede
unirse a la superficie de una nanoesfera o nanocápsula, o adherirse a una matriz o capa del
polímero (2). Frecuentemente se han utilizado dos polímeros, el ácido poliláctico glicólico
(PLGA) y el quitosano, los dos han sido aprobados por la FDA como uso clínico también,
debido al hecho de que son biocompatibles y biodegradables (5).
Nanopartículas sólidas: Nanopartículas de óxido de hierro, oro y plata
Los NP sólidos comprenden el óxido de hierro, oro, plata y otros NP a base de metales. Las
NP de óxido de hierro se originan conjugando un núcleo orgánico de magnetita (Fe 3 O 4 ) o
maghemita (Fe 2 O 3 ) a un polímero biocompatible (5-7). En la ultima década, ha tenido mucho
interés las NP de óxido de hierro, por su características de supermagnetismo (5). Las NP de
óxido de hierro se utilizan en biosensores en combinación con imágenes por resonancia
magnética (IRM), administración dirigida de fármacos y genes e hipertermia por fluidos
magnéticos (7). Además, las NP de óxido de hierro se han utilizado en diversas técnicas de
diagnóstico e imagen por sus propiedades ópticas únicas que les otorgan la capacidad de
actuar como biosensores en células vivas (6).
Dependiendo de su tamaño, forma y propiedades superficiales, se ha sugerido el uso de NP
de oro en el diagnóstico, la terapia y la radioterapia del cáncer (5-8). Las NP de oro incluso se
pueden utilizar para desarrollar sistemas teranósticos en los que se pueden combinar el
diagnóstico, la imagenología y la terapéutica para mejorar la terapia (6). Se ha evidenciado que
las NP de oro poseen una baja toxicidad en comparación con otras NP sólidos; sin embargo,
aún falta mejorar la información completa de su perfil de toxicidad (6).
Las NP de plata son otra clase han recibido cierta atención. Involucrándolas para el uso de
NP de plata como biosensores debido a sus propiedades ópticas y su disposición para
absorber y dispersar la luz (6). Las NP de plata se implementan mucho en dispositivos
electrónicos, textiles, apósitos para heridas, revestimientos antimicrobianos y dispositivos
biomédicos (8).
Nanopartículas a base de carbono
Las NP a base de carbono se emplean cada vez más en diversas aplicaciones biomédicas,
como la administración de fármacos, la terapia génica y las imágenes (5). Los nanotubos de
carbono (NTC), una clase importante de estas NP, incluyen los tipos de pared simple
(SWCNT) y de pared múltiple (MWCNT) (8). Las propiedades fisicoquímicas únicas de los
nantotubulos de carbono es que los convierten en óptimos candidatos para diversas
aplicaciones en campos biomédicos, como la administración de fármacos y genes,
biosensores y aplicaciones de ingeniería de tejidos (6-7). También muestran una alta estabilidad
y tienen una química de superficie específica que permite una mayor capacidad de carga de
fármacos. Sin embargo, la seguridad de los NTC sigue siendo cuestionable, ya que se ha
demostrado que son tóxicos para los tejidos sanos después de una exposición crónica (8).
Nanopartículas a base de lípidos
Los liposomas son el clásico ejemplo de NP basadas en lípidos vesiculares. Los liposomas
poseen una bicapa de fosfolípidos y colesterol que atrapa un núcleo acuoso, como se
describió por primera vez en 1965 (5). Los liposomas son uno de los sistemas de
administración de fármacos más utilizados, con varias formulaciones actualmente aprobadas
por la FDA en uso y muchas más en ensayos clínicos o preclínicos (6-8). Los liposomas se han
utilizado para la administración de fármacos, nutracéuticos y biológicos y pueden exhibir una
alta eficiencia de encapsulación y un tiempo de circulación prolongado (6-8). Estas propiedades
permiten que los liposomas se acumulen en sitios específicos de enfermedad, como tumores,
donde la capa endotelial es discontinua, falta un sistema linfático funcional y los liposomas se
acumulan pasivamente a través del efecto de retención y permeabilidad mejorada (EPR)
(6)
. Los primeros liposomas convencionales tenían limitaciones como una vida media corta y
un aclaramiento sistémico rápido después de su opsonización y aclaramiento por el sistema
reticuloendotelial (SRE) (6-7). Sin embargo, la conjugación de polímeros como el
polietilenglicol (PEG) o la PEGilación de liposomas, y el uso de lípidos de transición de fase
alta saturados, dio como resultado la generación de liposomas estabilizados estéricamente o
“ liposomas Stealth TM ” (SL), con medio prolongado -vida y mayor estabilidad (6-7). El largo
tiempo de circulación sistémica de los liposomas Stealth TM permite una biodistribución
alterada y una mayor acumulación en tumores sólidos, en comparación con las formulaciones
convencionales (5-6). Entre sus ventajas, se ha demostrado que los liposomas y otras NP
basadas en lípidos tienen los efectos menos tóxicos para aplicaciones in vivo (6).
Nanoemulsiones
Las nanoemulsiones (NE) se han implementado comúnmente en la administración de vacunas
y agentes anticancerígenos (5). Las NE son dispersiones coloidales que pueden utilizarse como
portadores de moléculas con una solubilidad en agua limitada (6). Suelen estar compuestos por
nanogotas de aceite dispersas en agua o nanogotas de agua dispersas en aceite (6). Los
tensioactivos se incluyen típicamente para mejorar su estabilidad. Sin embargo, una
limitación clave de estos portadores es que son termodinámicamente inestables si su tamaño
supera los 500 nm. Por el contrario, las NE en el rango de 20 a 200 nm son más estables
termodinámicamente (8).
Se sugiere que las Nanoemulsiones son indicadas para diversas vías de administración,
incluidas la parenteral, transdérmica y ocular, principalmente debido a su capacidad para
proteger a los fármacos encapsulados de la degradación enzimática y la hidrólisis (6). Las NE,
como muchos de los NP discutidos anteriormente, pueden modificarse conjugándolos con
diferentes ligandos para apuntar a macromoléculas expresadas selectivamente en
enfermedades específicas como el cáncer. Por ejemplo, se ha demostrado que los NE
conjugados con ligando, que pueden dirigirse a receptores cuya expresión aumenta en ciertos
cánceres, tienen una captación mejorada en las células cancerosas, lo que facilita la reducción
del crecimiento tumoral (6-8).
Nanopartículas en aplicaciones biomédicas
Varias Nanoparticulas, incluidos liposomas, NP de óxido de hierro y NP poliméricos, se están
probando en estudios clínicos y preclínicos para la administración de fármacos y genes con el
objetivo de mejorar su administración en sitios específicos (6). Muchos fármacos con eficacia
terapéutica tienen, lamentablemente, una escasa solubilidad en agua y su encapsulación en
NP puede mejorar su estabilidad minimizando la precipitación y reduciendo la necesidad de
codisolventes tóxicos (5-6). Los NP también pueden alterar las tasas de metabolismo y
aclaramiento del fármaco y, por tanto, mejorar la eficacia del fármaco. Por ejemplo, la FDA
aprobó los liposomas de doxorrubicina Doxil ®(Centocor Ortho Biotech, Horsham, PA, EE.
UU.) (6). Para el tratamiento del cáncer de mama metastásico y el sarcoma de Kaposi. Estas
nanopartículas tienen una eficacia significativamente mayor en comparación con el fármaco
libre (6-7).
Las NP convencionales o de primera generación no muestran el direccionamiento celular
específico, sin embargo, los restos de direccionamiento se pueden conjugar con los NP para
mejorar el suministro a células específicas (6). Como se mencionó anteriormente, los NP
pueden dirigirse activamente a diferentes sitios de la enfermedad conjugándolos con ligandos
específicos capaces de reconocer y unirse a proteínas de membrana que se sabe que se
sobreexpresan en diversas patologías, como en el cáncer (6).
Las NP también se utilizan como sistemas de administración de genes y han demostrado su
eficacia para reemplazar genes diana específicos afectados por el cáncer, ciertas infecciones
virales y otros trastornos genéticos (5). Desafortunadamente, las Nanoparticulas catiónicos
pueden causar respuestas inmunológicas que limitan su uso (5-7). Además, las NP se han
utilizado en imágenes celulares para detectar cambios celulares in vitro e in vivo. Las NP
pueden conjugarse con restos como anticuerpos y otros ligandos para aumentar su eficacia de
focalización (5).
A pesar de su prometedora eficacia como portadores de fármacos o genes, hay menos NP en
uso clínico de lo que uno podría predecir basándose en los amplios estudios preclínicos
(6)
. Esto se debe principalmente a la posible toxicidad por mecanismos que no se comprenden
completamente, lo que es especialmente cierto para los NP que se administran de forma
crónica (5-7).
Dendrímeros
Los dendrímeros son moléculas con un núcleo central y ramificaciones repetidas (7). Se
clasifican en función de su forma como polímeros, polímeros hiperramificados o polímeros
en cepillo y también se pueden clasificar por su peso molecular como de bajo o alto peso
molecular. Existen diversas aplicaciones de estas moléculas en los campos biomédico y
farmacéutico, en particular las nanopartículas de dendrímero se pueden funcionalizar con
ligandos variados para llegar al tejido tumoral a través de diferentes barreras en el cuerpo con
una mínima pérdida de actividad en el torrente sanguíneo. Por tanto, estas moléculas tienen la
capacidad de destruir selectivamente las células tumorales sin afectar a las sanas (7).
Fig. 1 | Paradigmas en nanomedicina del cáncer. a, b |Durante décadas, la nanomedicina del cáncer se ha
centrado en la administración de agentes terapéuticos a los tumores a través de mecanismos de selección
pasivos mediante la explotación del efecto de permeación y retención mejoradas (EPR) mediado a través de
vasos tumorales con fugas (parte a) o mecanismos de focalización activos en los que las nanopartículas se
funcionalizan con ligandos de focalización que se unen específicamente a los receptores en las superficies de
las células tumorales (parte B). c |Están surgiendo nuevos paradigmas que utilizan la nanomedicina para
activar las células inmunitarias. Estas nanomedicinas inducen citotóxicas respuestas antitumorales de las
células T en lugar de administrar fármacos al tumor. Las estrategias que utilizan estos nuevos enfoques
incluyen vacunas de ácido nucleico y el direccionamiento directo de las células T en la circulación o ex vivo.
Partesa yB están adaptados con permiso deárbitro.

Nanopartículas y conjugados

Nanopartículas dirigidas a células T en sangre.

Recientemente se han diseñado enfoques basados en el objetivo de los agentes
inmunoterapéuticos directamente en las células T. Las células inmunes, como las células T,
pueden migrar de forma activa a los tumores, aprovechando los gradientes de quimiocinas
para dirigirse a los sitios de inflamación dentro de los tumores (3). En contraste con la
administración de agentes citotóxicos a las células tumorales, que requiere nanopartículas
para matar la mayoría o todas las células diana para ser eficaz, se pueden usar
concentraciones más bajas de fármacos inmunoestimulantes para estimular o amplificar la
respuesta de las células T. En un enfoque, los polímeros de poli (ácido láctico-co-glicólico)
(PLGA) y PEG aprobados por la FDA se utilizaron para sintetizar nanopartículas que
encapsulan SD-208, un inhibidor de TGFβR1, para restaurar la función de las células T, o un
TLR7 / Agonista de TLR8 para reclutar linfocitos en tumores no inflamados. Los fragmentos
de anticuerpos se conjugaron a la superficie de las nanopartículas a través de tiolmaleimida.
Haga clic en química, de tal manera que las nanopartículas se unen a las células T que
expresan PD-1 en la circulación y en los tumores (4). Dirigir inhibidores de TGFβR1 a células
T mediante nanopartículas extendió la supervivencia en un modelo de cáncer colorrectal en
comparación con fármacos libres en dosis similares, y la administración dirigida del agonista
TLR7 / TLR8 aumentó la proporción de células T CD8 + que infiltran el tumor y tumores
sensibilizados a anti-PD- 1 terapia . En conjunto, dirigir la administración de inmunoterapias
basadas en nanopartículas a las células inmunitarias que infiltran el tumor en la sangre, en
lugar de dirigirse directamente a las células tumorales, es un medio potencialmente atractivo
para mejorar la localización inmunoterapéutica en los tumores y estimular una respuesta
antitumoral (3).

Adhesión de fármacos mediada por receptores vasculares a células inmunes

Se han desarrollado sistemas de administración de fármacos basados en liposomas para unir
las células inmunitarias en la circulación aprovechando las interacciones receptor-ligando
basadas en las interacciones entre las células inmunitarias y el endotelio inflamado. En dos
ejemplos, los liposomas se funcionalizaron con el receptor de adhesión vascular E-selectina
solo o junto con la citocina inmune TRAIL (también conocida como TNFSF10) para inducir
selectivamente la apoptosis de las células tumorales. Los ligandos para la E-selectina se
expresan tanto en las células tumorales circulantes como en las células inmunes, y TRAIL
activa los receptores de muerte en la superficie de las células cancerosas para inducir la
apoptosis. In vivo, las nanopartículas de Eselectina-TRAIL se unen a las células inmunitarias
en la sangre con efectos secundarios insignificantes, y la vida media de TRAIL aumentó
sustancialmente porque estaba atado a la superficie de las células inmunes (3).
Estas células inmunes recubiertas de nanopartículas se utilizaron inicialmente para atacar y
matar las células tumorales circulantes en el torrente sanguíneo para reducir la formación de
tumores metastásicos, y mataron a la mayoría de estas células en 2 horas. Este enfoque
también redujo la carga tumoral general en un modelo murino de cáncer de próstata, lo que
indica que las células inmunitarias que se infiltran en el tumor probablemente migren a los
tumores sólidos para liberar citocinas inmunes e inducir respuestas antitumorales (3). En
conjunto, estos resultados indican que las interacciones receptor-ligando que ocurren dentro
de la vasculatura pueden explotarse para administrar fármacos de base inmunitaria a las
células inmunitarias endógenas, que luego pueden migrar al tumor para administrar fármacos
(3)
.

Las aAPC enriquecen la cantidad y la calidad de las células T. A

El éxito de la fabricación de células T autólogas hasta la fecha, los ingenieros continúan
desarrollando enfoques que pueden mejorar el rendimiento y la función de las células T
cultivadas. La aplicación de un campo magnético a nanopartículas de hierrodextrano
funcionalizadas con proteínas que activan las células T promueve la agregación de estas
aAPC, agrupando así los TCR a los que se han unido y aumentando la activación de las
células T (3). Dichas partículas, que implican la activación específica de antígeno (complejo
principal de histocompatibilidad (MHC) - péptido) en lugar de la activación policlonal (anti-
CD3), se pueden utilizar para enriquecer y expandir células T específicas de tumores raros a
través de la separación mediada por columna magnética de poblaciones de leucocitos a
granel. Debido a que las células T específicas de antígeno a menudo están presentes a bajas
frecuencias, la capacidad de mejorar la cantidad de estas células deseadas es beneficiosa. El
tamaño, la concentración, la densidad del ligando y la elección del ligando de aAPC influyen
fuertemente en la recuperación, activación y expansión de poblaciones tan raras de células T
(4)
. Ingeniería de las formas, tamaños y estímulos de las aAPC también afecta la calidad de las
células T para la terapia con células adoptivas. El ajuste de la disposición espacial y la
difusividad de los factores de superficie puede promover la formación de sinapsis
inmunológicas y la agrupación de receptores (3). De hecho, imitar el contexto de presentación
de antígeno natural de las APC fisiológicas puede mejorar en gran medida las propiedades
antitumorales del producto de células T que se va a infundir. Además de los aAPC basados en
partículas, nanotubos de carbon y compuestos poliméricos de los mismos se han utilizado con
gran efecto, aprovechando la gran superficie de estos sistemas de materiales (3).
Recientemente,varillas de sílice mesoporosa, que igualmente cuentan con una gran superficie
y permiten la liberación sostenida de señales paracrinas, se recubrieron con una bicapa de
lípidos fluidos para permitir la presentación de factores estimulantes y coestimuladores de
TCR. Este andamio mimético de APC aumentó sustancialmente la expansión de poblaciones
de células T policlonales o específicas de antígeno en relación con Dynabeads, sin
comprometer la función de las células transferidas adoptivamente (4).

Procesamiento
Acceso de las nanoestructuras a las células diana
Rutas de administración
Las células clave involucradas en la inmunidad se concentran en los tejidos linfoides. Por
tanto, dirigirse a estos tejidos facilita el acceso a las células inmunes y, en consecuencia,
aumenta la eficacia de las nanovacunas. Una forma de administración es a través de las
mucosas. Los tejidos linfoides están asociados al entorno de las mucosas (MALT) a través de
las células M, especializadas en la transcitosis de cuerpos extraños para que sean reconocidos
por las células inmunes residentes en MALT (10). Para que tenga lugar el transporte de forma
eficaz, es necesario un equilibrio preciso entre las propiedades muchoadhesivas y de
mucodifusión de las nanopartículas. Además, la fisiología de la mucosa varía a lo largo del
cuerpo. Estas propiedades se definen por el tamaño y la composición de los nanovehículos,
en especial la composición de la superficie. Aunque las propiedades de las nanopartículas
dependerán de la zona del cuerpo en la que se administren, de forma general, el tamaño de la
nanopartícula debe ser inferior al tamaño de la mucosa, y la presencia de un revestimiento de
ácido poliláctico pegilado (PEG-PLA) favorece el transporte a través de las superficies
mucales (10).
La administración parenteral, que incluye las administraciones intramuscular, subcutánea e
intradérmica, es la principal vía de vacunación. A través de esta vía, según sus propiedades
fisicoquímicas y composición, las nanopartículas pueden viajar directamente al nódulo
linfático más cercano, o permanecer en el sitio de inyección y atraer a células dendríticas
migratorias y macrófagos. El drenaje al ganglio linfático es, generalmente, inversamente
proporcional al tamaño de las nanopartículas, siendo los 100 nm el tamaño óptimo (10). Por
otra parte, también es de gran importancia la carga superficial, de forma que el drenaje se ve
facilitado cuando las nanopartículas presentan carga negativa, debido a la repulsión que se
genera con la matriz extracelular, cargada negativamente, y que actúa como una la fuerza
motriz del desplazamiento. Aun así, también se ha observado que la presencia de PEG en la
superficie de los nanovehículos hace que su carga superficial se acerque a la neutralidad, con
un efecto positivo en el drenaje hacia el nódulo linfático (10).
Células diana y respuestas
Las principales células diana en la modulación del sistema inmune son las células inmunes
circulantes, que incluyen monocitos, macrófagos y células dendríticas. Una de las estrategias
para generar una respuesta inmune eficaz es diseñar nanovehículos que puedan alcanzar un
subconjunto de células inmunes. Aunque no existe una conclusión clara, el enfoque más
eficaz para dirigir a los nanovehículos hasta sus células diana parece ser proporcionarles
ligandos específicos de direccionamiento. En el caso de los macrófagos, este ligando puede
ser inmunoglobulina G, mientras que para las células dendríticas presenta buenos resultados
la funcionalización de las nanopartículas de ácido poli láctico-glicólico pegilado (PEG-
PLGA) con anticuerpos dirigidos a CD40, CD11c o DEC-205 (10).
Otra estrategia consiste en usar adyuvantes que modifican la respuesta de un conjunto de
células inmunes. Estas moléculas pueden imitar patrones moleculares asociados a patógenos
(PAMP), para activar a diferentes receptores que conducirán a la respuesta inmune (10).
Para conseguir inmunizar contra las enfermedades infecciosas, es necesario estimular la
respuesta celular y humoral. Se ha observado que existe una correlación entre el tamaño de
las nanopartículas y su capacidad para favorecer la presentación cruzada. En general, los
tamaños más pequeños mejoran la presentación cruzada y las respuestas Th1, mientras que
los tamaños micrométricos tienen una mayor preferencia a generar respuestas Th2. Esto
puede deberse a que las partículas más pequeñas, en especial con tamaños similares a los
virus, son endocitadas por las células dendríticas, favoreciéndose posteriormente el escape
endosomal, lo que impulsa la respuesta celular, mientras que los tamaños superiores a 500 nm
conducen a una presentación más eficiente por el MHCII, generando respuestas humorales
más fuertes. Aunque la unión de los antígenos a nanopartículas aumenta la activación de
células B y con ello la respuesta humoral, las nanopartículas se pueden dirigir de forma
directa hacia las células T CD8+ a través de células presentadoras de antígenos artificiales
(aAPCs), que presentan marcadores celulares, activando la respuesta celular. La activación de
células T CD8+ a través de aAPCs es mayor cuando se usan junto a partículas
paramagnéticas y Quantum Dots (10).
En las enfermedades autoinmunes, es necesario generar una respuesta tolerogénica para
controlar la respuesta inmune que tiene lugar contra los autoantígenos. En un individuo sano,
las APCs eliminan y procesan los restos producidos durante la apoptosis, para presentarlos en
los procesos de tolerancia. Para ello es esencial que los receptores de las APCs reconozcan la
señal apoptótica y endociten los residuos. En base a ello, se han diseñado nanopartículas que
porten en su interior las moléculas para las que se quiere generar tolerancia, y que presenten
en la superficie señales de apoptosis, como la fosfatidilserina, para potenciar su captación por
las APCs. Por otra parte, también es importante, la forma de la nanopartícula. Se ha
observado que las nanopartículas nanorod son más eficientes para inducir respuestas
tolerogénicas que las esféricas. Por último, cargar moléculas inmunomoduladoras, como la
rapamicina o la vitamina D3, en los nanotransportadores, ayuda a las APC a alcanzar un
estado tolerogénico (10).
Diagnostico por Nanopartículas
Nanopartículas multifuncionales para el inmunodiagnóstico del cáncer
La ventaja de anclar diferentes moléculas en un solo NP respalda el paradigma emergente en
la nanomedicina del cáncer para desarrollar sistemas multimodales que integran en una sola
plataforma capacidades tanto terapéuticas como de diagnóstico para rastrear la entrega a un
objetivo específico y monitorear su eficacia en tiempo real y a lo largo del tiempo (9). Por lo
tanto, los NP multimodales ofrecen nuevas oportunidades interesantes para el desarrollo de
agentes que combinan el tratamiento y el diagnóstico, para abordar las necesidades clínicas
de estadificación de la enfermedad y para monitorear la respuesta en el tratamiento
inmunoterapéutico del cáncer, lo que conducirá a mejores resultados en los pacientes (9).
Se han utilizado nanoestructuras bimodales que contienen sustancias químicas fluorescentes o
puntos cuánticos y NP de óxido de hierro superparamagnético (SPIO) para marcar las CD
tanto para imágenes ópticas como para resonancia magnética, pero sus aplicaciones clínicas
están limitadas por la citotoxicidad. En este sentido, una cuestión crucial sigue siendo la
seguridad de los NP utilizados (11).

Fig 2. Detección bimodal de CD. a) Fluorescencia NIR in vitro yb) Imágenes teñidas con azul de Prusia de DC
marcadas con nanopartículas de PLGA que contienen nanopartículas de óxido de hierro e ICG. c) Imagen
macroscópica NIR in vitro yd) Imagen de RM de la misma muestra que la utilizada en (a) y (b). e) Imagen de
fluorescencia NIR in vivo yf) Imagen de RM del ganglio linfático. Se obtuvo una imagen óptica de alta
resolución del ganglio linfático poplíteo (pata trasera izquierda de un ratón) mediante la técnica de imagen
NIR (e). El ganglio linfático de la pata trasera izquierda (inyección de DC marcadas) muestra una fuerte
reducción de la señal (contraste de RM oscuro), mientras que el ganglio linfático de la pata trasera derecha
(inyección de DC sin marcar) no muestra reducción de señal. El círculo rojo (ganglio linfático en la pata
trasera izquierda) representa la posición del ganglio linfático poplíteo donde se acumularon las CD marcadas
con nanopartículas de PLGA que contienen nanopartículas de óxido de hierro e ICG. Ampliación: a) 600, b)
40.

Se han utilizado nanoportadores de PLGA, cargados con sondas ópticas verdes de

indocianina disulfonadas y NP SPIO, para administrar Ags en las CD y provocaron fuertes
respuestas CTL. Sin embargo, el principal inconveniente relacionado con este método se
refiere al largo período de incubación del portador para la absorción de las CD y el uso de
disolventes orgánicos que pueden afectar la antigenicidad y estabilidad del Ag cargado y la
funcionalidad de las CD. Varios estudios han demostrado que el etiquetado con SPIO
afectaría a la expresión, maduración y migración del fenotipo de las CD, incluso con
productos clínicamente aprobados (9). Se diseñó una nanoprobe SPIO magneto-fluorescente
multimodal para etiquetar y rastrear los países en desarrollo in vivomigración a los ganglios
linfáticos de drenaje y para evaluar la inmunoterapia del cáncer en aplicaciones clínicas
mediante resonancia magnética e imágenes en el infrarrojo cercano. Sin embargo, este
sistema mostró algunos límites en términos de capacidad de migración de los países en
desarrollo etiquetados y el largo destino de SPIO dentro de los LN (11).

Fig 3. DC
marcadas con SPIO-NIR797 que se dirigen al ensayo in vivo de drenaje de LN. (A) DC etiquetadas que se
dirigen al LN poplíteo derecho por resonancia magnética. La flecha roja indica la ubicación de la pérdida de
señal dentro del LN poplíteo. La flecha blanca no muestra cambios de señal dentro del lado de control. (B) DC
etiquetadas que se dirigen al LN poplíteo mediante imágenes NIRF. La flecha roja indica NIRF en el LN
poplíteo. (C) Imagen de pseudo-color ampliada de los países en desarrollo etiquetados dentro del LN poplíteo.
(D) El volumen de LN se midió a partir de imágenes adquiridas antes de la inyección (0 h) y 24 h, 48 h, 3 días,
4 días y 5 días después de la inyección de PBS, DC no marcadas o DC marcadas. (E) El volumen vacío de
señal y (F) la pérdida de señal fraccional se midió a partir de imágenes adquiridas antes de la inyección (0 h) y
24 h, 48 h, 3 días, 4 días y 5 días después de la inyección de las CD marcadas. * P <0,05.

Se han implementado NP SPIO encapsuladas con policatión anfifílico para marcar y controlar
el destino de la migración de las CD murinas al LN de drenaje con el escáner clínico 3T in
vivo. Esta sonda demostró ser una herramienta eficaz, con baja toxicidad, en la evaluación de
inmunoterapias basadas en DC en imágenes clínicas de resonancia magnética. Además, en
contraste con trabajos anteriores que generalmente informaron el etiquetado de países en
desarrollo inmaduros, este estudio etiquetó los países en desarrollo maduros y el proceso de
etiquetado no afectó negativamente la viabilidad celular, la morfología y la expresión de
biomarcadores de superficie (11).

Fig. 4. (A) Imagen de resonancia magnética in vivo de la localización de CD cargadas de SPIO en los nodos
poplíteos de ratones. Tanto la FFE como la TSE describieron claramente la reducción del SI intraganglionar a
lo largo del tiempo en la extremidad posterior izquierda después de la s.c. inyección de 1 106 en la planta del
pie, con la pierna derecha inyectada con el mismo número de células sin marcar que el control (flechas
amarillas). En la imagen FFE a las 0 h, la señal de oscurecimiento dentro de los nodos bilaterales representa
artefactos de susceptibilidad, que se compensan eficazmente en TSE. (B) El estudio patológico reveló que la
partícula de hierro teñida de azul contenía células dispersas en la zona de células T del nodo. Insertar es la
vista microscópica de 400 de la región dentro del cuadro blanco punteado. (C) Con el aumento de la cantidad
de CD inyectadas, la señal de RM intranodal se volvió más oscura. La mayor sensibilidad de FFE permitió
detectar una caída de señal poco visible en TSE después de s.c. inyección de 1105 CD cargados de SPIO en la
almohadilla del pie izquierda. El control es el nodo contralateral dado el mismo número de países en
desarrollo sin marcar. (Para la interpretación de las referencias al color en la leyenda de esta figura, se remite
al lector a la versión web de este artículo).

Meir  y col . diseñó una nueva herramienta para el seguimiento longitudinal y cuantitativo de

células T específicas del cáncer in vivo con NP de oro y la modalidad de imágenes por
TC. Las células T, transducidas para expresar un receptor específico de melanoma y cargadas
con NP de oro, se inyectaron por vía intravenosa en xenoinjertos de melanoma humano
portadores de ratones y se utilizaron como agente de contraste para estudiar el destino de las
células inmunitarias en la inmunoterapia del cáncer sin afectar la T- función celular tanto in
vitro como in vivo. Además, la capacidad de realizar un seguimiento en línea de las células T
diseñadas podría ayudar a dilucidar las causas subyacentes de la toxicidad fuera del objetivo e
identificar los órganos objetivo que están sujetos a reacciones inmunitarias adversas en los
tratamientos adoptivos basados en la transferencia de células T (11).
La posibilidad de detectar si un tratamiento está funcionando o no e identificar a los
respondedores de los que no responden durante el tratamiento del cáncer representa un
desafío para los resultados del paciente, sobre todo para la inmunoterapia del cáncer, porque
la lectura anatómica temprana es a menudo discordante con la respuesta biológica (9).

Figura 1: Proceso de seguimiento de células T: las células T se marcaron con GNP in vitro; luego, las células
se inyectaron a ratones y se rastrearon in vivo utilizando imágenes de TC.

Fig 5: Tomografía computarizada de la distribución biológica de todo el cuerpo y la migración de las células T
"doradas". A. Imagen de tomografía computarizada de procesamiento de volumen en 3D de las células T que se
acumularon en los pulmones 48 horas después de la inyección (recuadro: imagen en 3D de los pulmones. Las
áreas amarillas son células T marcadas con GNP). B. Imagen 3D del bazo; C. Imagen 3D del hígado; D.
Imagen de CT 2D representativa de los pulmones; flecha que indica las celdas marcadas con oro.

Cho  y col . desarrollaron NP multifuncionales de núcleo-capa de óxido de hierro-óxido de

zinc que eran capaces de administrar Ag carcinoembrionario en las CD mientras actuaban
simultáneamente como un agente de imagen in vivo (9). Los NP fueron absorbidos por las DC
dentro de 1 h desde la administración y sin usar ningún agente de transfección. Se obtuvieron
imágenes de NPs in vitro usando un microscopio confocal e in vivo usando MRI. Además, las
CD cargadas con el complejo NP-Ag indujeron inmunidad antitumoral in vivo y prolongaron
la supervivencia de los ratones inmunizados (11).

Fig 6 | Resonancia magnética in vitro e in vivo de países en desarrollo marcados con nanopartículas. a,
Imagen de resonancia magnética in vitro (arriba) de países en desarrollo etiquetados con diferentes cantidades
de nanopartículas de Fe3O4-ZnO durante 1 hy gráfico de tiempo de relajación T2 (abajo). b, Imágenes de
resonancia magnética in vitro (arriba) y gráfico de tiempo de relajación T2 (abajo) de las CD incubadas con
40 mg ml21 de nanopartículas de Fe3O4-ZnO o Fe3O4 durante el tiempo indicado. c, Imágenes de resonancia
magnética in vivo de los ganglios linfáticos de drenaje de un ratón (izquierda) inyectado con CD marcadas con
Fe3O4-ZnO (flecha roja) o nanopartículas de ZnO (flecha amarilla) en las almohadillas de las patas
ipsilaterales. A la derecha se muestra un ganglio linfático de drenaje (flecha verde) de un ratón inyectado con
nanopartículas de Fe3O4-ZnO sin células. d, Inmunohistoquímica representativa del drenaje de los ganglios
linfáticos después de la inyección con CD marcadas con nanopartículas de Fe3O4-ZnO (puntos de color
marrón oscuro). T, zona de células T (Thy1.2þ), B, folículo de células B (B220þ).

Recientemente, se han desarrollado NP biocompatibles que actúan como vehículo de

administración y radiotrazador para imágenes de PET / tomografía computarizada por
emisión de fotón único (SPECT) in vivo (9). Más específicamente, los autores desarrollaron y
evaluaron una vacuna nanoparticulada basada en el marcaje de radiogalio selectivo de óxido
de hierro adecuado para imágenes de SPECT (67Ga) / PET (68Ga) y para la administración
eficiente de Ag (OVA) y agonistas de TLR9 (CpG), utilizando lípidos- micelas de magnetita
recubiertas. El tamaño medio de la construcción de aproximadamente 40 nm de diámetro
permitió dirigir el suministro linfático directo de la carga de vacuna a las APC en los
LN. Mientras que la construcción cargada con OVA / CpG mostró la entrega efectiva de la
vacuna a TLR9 endosomal en APC, las imágenes de SPECT demostraron una migración
desde el sitio de inyección a LN regionales y no regionales (11).
Fig 7. Imágenes SPECT / CT de ratones inyectados con las micelas IONP marcadas con 67Ga "desnudas" (8
µg de magnetita) 3 h después de la inyección en el lado izquierdo: a) antebrazo (7,7 MBq), b) corvejón trasero
(7,3 MBq) y c) flanco (6,4 MBq). Análisis ex vivo de la biodistribución después de 24 h (inyección s.c. en el
flanco): d) fotografía de órganos recolectados seleccionados, e) imagen SPECT / CT de los órganos
recolectados yf) biodistribución expresada como porcentaje de dosis inyectada por gramo de tejido. aLN, LN
axilar; inLN, inguinal LN; iLN, LN ilíaco; pLN, LN poplíteo; bLN: braquial LN; Lu, pulmones; L, hígado; S,
bazo; K, riñones; sitio de inyección (I

Tratamiento en Linfoma No Hodgkin

Nanoterapía en Linfoma No Hodgkin
Hasta hace poco, la radiación y la quimioterapia eran el curso de tratamiento más común para
el linfoma de células B. Aunque la radiación y la quimioterapia a menudo se usan juntas, el
régimen de tratamiento exacto depende del tipo y estadio particular del cáncer, así como del
individuo. La radioterapia, que utiliza radiación de alta energía para dañar el ADN de las
células, se administra de manera local enfocando un rayo externo de alta energía en áreas
cargadas de tumores. Los quimioterapéuticos, por otro lado, se administran típicamente por
vía sistémica y actúan a través de diversos mecanismos intracelulares, que incluyen
entrecruzamiento del ADN, inhibición de la mitosis y rotura de la cadena del ADN (12-13). Sus
variados mecanismos de acción les permiten ser dosificados con otros quimioterapéuticos
para lograr un efecto sinérgico (12).
Se ha llevado a cabo una gran cantidad de investigaciones debido a las terapias basadas en
nanoparticulas que pueden afectar potencialemnte a las células cancerosas. La terapia con
nanopartículas contra el cáncer se utilizará junto con los regímenes de tratamiento
tradicionales, ya sea para mejorar la eficacia general o para reducir las dosis de
quimioterápicos tóxicos (12).
En el caso de las neoplasias malignas de células B, como el linfoma, la mejor opción diana es
típicamente un receptor que se expresa solo en la superficie de las células B o que las células
B malignas sobreexpresan en comparación con las células normales (13). Además, es
importante considerar la función del receptor diana, ya que su respuesta a la unión de las
nanopartículas puede influir en el proceso de administración. Muchas de las nanopartículas
que se están desarrollando actualmente para el tratamiento del linfoma utilizan mecanismos
de focalización activos. Los receptores de la membrana celular que se han dirigido en el
contexto de la terapéutica del linfoma incluyen CD19, CD20 y CD22 (13).
El CD19 es una proteína de transducción de señales crítica que, como parte del correceptor de
células B, permite a regular el desarrollo, la activación y la diferenciación de las células B. Se
ha demostrado que CD19 se expresa en el 88% de los linfomas de células B (12-14). También, el
CD19 se encuentra en la superficie de las células dendríticas foliculares, que residen en los
centros germinales de los órganos linfoides secundarios donde atrapan y presentan antígenos
en forma de complejos inmunes contra las células B del centro germinal. Entonces, dirigirse a
CD19 puede dar como resultado una entrega preferencial tanto a las células de linfoma como
a las células dendríticas foliculares en lugares donde están presentes ambos tipos de células,
cuya consecuencia se desconoce actualmente (12). Otra diana de receptor alternativa es el
CD20, una glicoproteína transmembrana que se encuentra en el 90% de los linfomas de
células B (5). Se cree que regula los canales transmembrana de iones de calcio, la progresión
del ciclo celular y la proliferación y activación de células B. Por último, CD22, una
glicoproteína de membrana, presente en la mayoría de las células B maduras (excluidas las
células plasmáticas) y regula la señalización del receptor de células B predominantemente a
través de la inhibición. Los receptores CD20 y CD22 se han presentado con más frecuencia
en estudios de focalización recientes en comparación con CD19 (12).
Las características de los receptores pueden influir mucho en su utilidad en los sistemas de
administración. Por ejemplo, algunos receptores unidos a la membrana son propensos a
desprenderse (es decir, se convierten en una forma soluble a través de la escisión de la
superficie celular) (12). El desprendimiento logra afectar negativamente al proceso de
administración si las nanopartículas se unen competitivamente al receptor que circula
libremente en lugar del receptor unido a la membrana. Los receptores CD19, CD20 y CD22
no son eliminados por las células B. De hecho, cuando se unen, CD19, CD20 y CD22, junto
con su ligando, pueden internalizarse (12). La internalización rápida de las nanopartículas
puede reducir la citotoxicidad asociada al tratamiento y es especialmente importante para los
fármacos que requieren la entrada de células (p. Ej., SiRNA). Se ha demostrado que la
naturaleza del evento de unión al receptor de nanopartículas puede influir en la
internalización del receptor (12-14).
Liposomas
Los liposomas son vehículos versátiles capaces de encapsular una amplia variedad de agentes
terapéuticos; Pueden incorporarse fármacos hidrófilos en el núcleo hidrófilo y fármacos
hidrófobos dentro de las bicapas. Esta versatilidad ha permitido la encapsulación liposomal
de fármacos quimioterapéuticos, que pueden usarse para alterar la biodistribución del
fármaco y, al mismo tiempo, reducir potencialmente los efectos secundarios tóxicos
limitantes de la dosis asociados con el fármaco libre no encapsulado (5-6). Una de las versiones
más exitosas de los agentes terapéuticos liposómicos contra el cáncer hasta la fecha es la
doxorrubicina liposomal PEGilada (PLD). Este fármaco es conocido por DOXIL en los EE.
UU. Y como CAELYX. Sin embargo, varios ensayos clínicos activos o recientemente
completados continúan investigando el uso de PLD, así como la doxorrubicina liposomal no
pegilada, Myocet, para tratar el LNH (12).
En un estudio, se utilizaron liposomas conjugados con fragmentos variables de cadena única
antiCD22 para administrar doxorrubicina a células de linfoma de Burkitt humanas (12). El
fragmento de anticuerpo anti-CD22 en este estudio es un mutante del segmento de dirección
de la inmunotoxina HA22, que también se dirige a CD22. Se encontró el doble de
doxorrubicina en células de linfoma de Burkitt humano Raji incubadas con liposomas HA22
mutantes que en células incubados con liposomas de control no dirigidos. También se
demostró que los liposomas HA22 mutantes redujeron preferentemente la viabilidad de las
células positivas para CD22 en comparación con los liposomas no seleccionados, pero no
condujeron a una citotoxicidad mejorada en las células negativas para CD22 (14).
En otro estudio, se demostró que el tratamiento con doxorrubicina liposomal PEGilada
conjugada con mAb anti-CD22 (IL-PLD) reduce significativamente el volumen del tumor y
extiende el tiempo de supervivencia de los ratones que llevan xenoinjertos Raji subcutáneos
en comparación con PLD no dirigido e IL-PLD vacío. El análisis de biodistribución indicó
que había 1,8 veces más doxorrubicina en el tumor subcutáneo de los ratones tratados con IL-
PLD en comparación con los ratones tratados con PLD. Además, se acumuló más
doxorrubicina en los tejidos cargados de tumores de los órganos en comparación con el tejido
sano de esos órganos (13).
Aunque la doxorrubicina ha sido la quimioterapia más común investigada para su
administración a través de nanopartículas a las células NHL, también se están explorando
otras quimioterapias. El Marqibo, un liposoma encapsulante de sulfato de vincristina que
comprende colesterol y esfingomielina, se está probando actualmente en ensayos clínicos
como una formulación liposomal alternativa para el tratamiento de agresivos refractarios o
resistentes LNH (12-14).
El 25% de los pacientes con LNH agresivo resistente al tratamiento muestran una respuesta
objetiva (una respuesta completa, una respuesta completa no confirmada o una respuesta
parcial) después de someterse a un régimen de Marqibo. En este régimen, Marqibo se inyectó
por vía intravenosa a una dosis de 2 mg / m2 en el transcurso de una hora, una vez cada 2
semanas hasta por 12 ciclos. Estos datos sugieren que Marqibo puede ofrecer ventajas de
tolerabilidad en comparación con los regímenes quimioterapéuticos implementados
actualmente (12).
Los liposomas también se han implementado para administrar terapéuticas más nuevas.
Muchas de estas nuevas técnicas se implementan para alterar la expresión genética. Se han
utilizado liposomas para encapsular un péptido emulador que se dirige a la tirosina quinasa
del bazo, un regulador de diversas vías de apoptosis que se encuentra sobreexpresado en el
linfoma de células del manto. Estas nanoparticulas después de 24 h de exposición, indujeron
apoptosis en más del 90% en dos tipos de células de linfoma de células del manto cuando se
administraron a 13,7ºC. µM (13).
Otro estudio, se utilizaron liposomas dirigidos a encapsular la dexametasona para combatir
varias neoplasias malignas de células B. El mAb milatuzumab se integró a la superficie de las
nanopartículas para juntarse a la CD74, una proteína que en el LNH posee una alta expresión,
leucemia linfoblástica aguda y células de leucemia linfocítica crónica. Las células de
leucemia linfoblástica aguda tratadas con liposomas de dexametasona dirigidos mostraron
significativamente más apoptosis que las células tratadas con dexametasona libre o
inmunoliposomas vacíos (8).
Curiosamente, las nanopartículas de lípidos también se han utilizado para administrar lípidos
que inducen la apoptosis en las células del linfoma. Específicamente, se utilizaron
nanopartículas formuladas a partir del tensioactivo no iónico, Tween 80, y los lípidos
sintéticos, Compritol 888 ATO y Precirol ATO 5, para administrar edelfosina a un modelo de
xenoinjerto de linfoma de células del manto (14). La edelfosina es un alquil-lisofosfolípido que
causa apoptosis cuando se incorpora a la membrana celular.
Nanopartículas poliméricas
Se encontró que las nanopartículas PEGiladas de poli (ácido láctico-co-glicólico) (PLGA)
cargadas con doxorrubicina eran tan efectivas como la doxorrubicina libre y DOXIL. La
doxorrubicina encapsulada en PLGA inhibió el crecimiento tumoral de linfoma subcutáneo
en ratones Balb / c y, al mismo tiempo, prolongó el tiempo de circulación de la
doxorrubicina. Además, no se observó cardiotoxicidad significativa en ratones después del
tratamiento con una dosis acumulada de 18 mg / kg de doxorrubicina encapsulada con PLGA
PEGilado (5,8).
Además de administrar quimioterápicos, las nanopartículas poliméricas también se han
utilizado para la administración de ARNip a las células de linfoma in vitro. Para lograr el
silenciamiento génico, el ARNip captado por la célula debe lograr un escape endosómico
para interactuar con la maquinaria de interferencia del ARN ubicada en el citoplasma (12).
Existe otro estudió en donde la capacidad de una micela de copolímero de bloque para
escapar del endosoma y entregar una secuencia modelo de ARNip a las células de linfoma
folicular. El polímero constaba de un poli catiónico (N, N-bloque metacrilato de
dimetilaminoetilo), así como un bloque aniónico sensible al pH compuesto de ácido propil
acrílico, metacrilato de butilo y poli (N, N-metacrilato de dimetilaminoetilo). Se mostró que
el polímero provocaba la desestabilización de la membrana lipídica en los glóbulos rojos a
niveles de pH endosómico. Además, cuando se conjugaron micelas poliméricas cargadas de
ARNip con HD39, se observó un anticuerpo anti-CD22, aumento de la captación celular y
silenciamiento génico en células de linfoma folicular DoHH2 que expresan CD22 en
comparación con las células a las que se administraron micelas no conjugadas y micelas
conjugadas con un anticuerpo de control no dirigido (13-14).

Tratamiento de Melanoma
Nanopartículas a base de lípidos
Las nanopartículas lipídicas que poseen la capacidad de entregar ARNm es un tratamiento
potente en la inmunoterapia para el cáncer. La inducción de una fuerte respuesta de células T
citotóxicas es un prerrequisito importante para una inmunoterapia exitosa contra muchas
enfermedades virales y tumores. Se ha demostrado que las vacunas de nucleótidos, incluidas
las vacunas de ARNm con su síntesis de antígeno intracelular, son potentes activadores de
una respuesta inmune citotóxica (15). La entrega intracelular de vacunas de ARNm al citosol
de las células inmunes presentadoras de antígeno aún no es satisfactoria. Existe el caso de una
Nanopartícula Lipídica que se la llamo B-11, la cual funciona bien para administrar vacunas
de ARNm. En experimentos realizados en ratones reporteros Ai14D y la formulación B-11
LNP, mostraron transfección en diferentes poblaciones de células inmunitarias, incluidas
células dendríticas, macrófagos, neutrófilos y células B. La síntesis y degradación del
antígeno citosólico por parte del proteasoma permite la presentación del antígeno en MHC-I
y, en consecuencia, activación de una potente respuesta de células T CD 8 (15,17) . No solo
inducimos la proliferación de células T CD 8, sino que las células asesinas también fueron
funcionales, como se muestra al extender la supervivencia general en un modelo de
melanoma de ratón transgénico (15).
Aparte de esto llamo la atención de este nuevo método el efecto en el modelo de tumor
agresivo B16F10, donde el ARNm que codifica los autoantígenos asociados al tumor, TRP2
y gp100, fue capaz de superar la auto-tolerancia y significarfiextender significativamente la
supervivencia global de los ratones. El hecho de que la adición de LPS a la formulación de
LNP aumente aún más la supervivencia es una indicación de que tales adiciones pueden
aumentar la potencia de las vacunas de ARNm administradas por las LNP. La prueba de
concepto presentada aquí justifica una mayor investigación de los LNP como vectores de
vacunas de ARNm potencialmente útiles (15,17).

Figura 2. (A) Imagen representativa de la biodistribución de la expresión de luciferasa usando la formulación

B-11 24 h después de la inyección subcutánea. Los ganglios linfáticos inguinales y axilares emiten luz 24 h
después de la inyección. Es importante destacar que no se detecta expresión de FFL en el hígado, riñón, bazo,
colon o pulmón. Se analiza un conjunto de muestras de órganos de ratón 15 minutos después de la inyección de
D-lucifeína. (B) ARNm codificante de FFL, formulado en diferentes formulaciones de LNP, ARNm no
formulado (FFL) y ARNm irrelevante formulado, se inyectaron subcutáneamente en la parte inferior de la
espalda de ratones. La expresión de FFL se visualizó 24 h después de la inyección mediante imágenes ópticas.
(C) Expresión cuantitativa de FFL durante 12 días. La formulación de ARNm en LNP aumenta la expresión de
FFL hasta 3 órdenes de magnitud en comparación con el ARNm no formulado. La expresión de FFL
permanece elevada durante 10 días. Curiosamente, la formulación que produce los niveles más altos de células
T CD8 en el día 7 no exhibe un pico de expresión de FFL más alto, pero exhibe una disminución más lenta con
el tiempo. Los niveles correspondientes de linfocitos T CD8 específicos de antígeno en el día 7 después de la
inyección utilizando ARNm que codifica ovoalbúmina (OVA, 10 μg por ratón, n = 5 por grupo) son 1,1 ± 1,3%
para la Formulación A-1, 3,1 ± 1,6% para la Formulación A -6 y 4,2 ± 1,5% para la Formulación B-11. (D)
Cuantificación del porcentaje de células transfectadas del tipo indicado 2 días después de la inyección de LNP
que contienen ARNm que codifica Crerecombinase en ratones informadores Ai14D, según lo determinado por
análisis FACS (n = 3 para control yn = 4 para Cre LNP ). * P <0,05, ** P <0,01; prueba t de Student para
datos no apareados. El ARNm de control irrelevante utilizado en la figura corresponde al ARNm que codifica
OVA.
Nanopartícula de doble objetivo TAM similar a M2

El elemento clave de esta estrategia es una nanopartícula de lípidos funcionalizada con

péptido de fusión biocompatible con una entidad de doble objetivo para especifico Unión
TAM similar a M2, un tamaño inferior a 30 nm para eficacia en penetración en tumor sólido
y ARNip cargado estable para transporte sistémico. La nanopartícula de doble focalización
TAM similar a M2 (M2NP) que contiene un receptor eliminador B de tipo 1 y M2pep (un
péptido de unión a macrófagos M2). Cargado con ARN de interferencia pequeño (ARNip)
del receptor del factor 1 estimulante de colonias en el M2NP, este nanocomplejo ha mostrado
una alta afinidad por los TAM que por otros macrófagos y bloquea específicamente las
señales de supervivencia de M2. Después de la administración de M2NP, se ha eliminado el
52% de los macrófagos M2, acompañado de una disminución del tamaño de los tumores y un
aumento de las tasas de supervivencia. Además, se han observado niveles aumentados de
citocinas inmunoestimuladoras (IFN-γ e IL-12) y citocinas inmunosupresoras reducidas
(TGF-β e IL-10). Los resultados han sugerido el valor potencial de la inmunoterapia contra el
cáncer dirigida a moléculas. Además, las nanopartículas pueden administrar fármacos de
molécula pequeña para inhibir la función de TAM (16-18).

Figura 1. Diseño del M2NP para especificaciones TAM tipo M2fic Inmunoterapia dirigida a moléculas. (A)
Enfoque híbrido del péptido de fusión αM2pep. (B) Estructura y componentes de M2NP. (C) Doble focalización
sinérgica basada en M2NP de TAM similares a M2 en vivo
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