DIPLOMADO DE

ESPECIALIZACIÓN
MICROBIOLOGÍA APLICADO A LA
INDUSTRIA FARMACÉUTICA,
COSMÉTICA Y ALIMENTARIA
Blga. Verónica López Caycho
vlopezcaycho98@gmail.com
Lic. Blga. Verónica López Caycho
- Bióloga egresada de la Universidad Ricardo Palma.
- Más de 20 años de experiencia en el Control de Calidad Microbiológico y Biológico
de Productos Farmacéuticos, Cosméticos, Sanitarios, Dispositivos Médicos, Alimentos
y otros rubros, del Centro Nacional de Control de Calidad (INS – MINSA-PERÚ.
1995-2016).
- Lleva 18 años capacitando en BPL, Ensayos Microbiológicos y otros temas, a nivel
nacional e internacional entre ellas las agencias reguladoras de: El Salvador, Ecuador,
Guatemala.
- Experiencia en Organización y Ejecución de Auditorías según ISO/IEC 17025 y
Buenas Prácticas de Laboratorios de la Organización Mundial de la Salud (BPL - OMS)
en organizaciones del sector público y privado.
- Participó en la Acreditación del CNCC (INS) bajo la Norma ISO 17025 y
Precalificación con la OMS.
- Dominio en Sistemas de Calidad, Buenas Prácticas de Manufactura (BPM) y Buenas
Prácticas de Laboratorio (BPL).
- Cuenta con Especialización en Programa de Gestión Pública.
- Ha formado parte del grupo de entrenadores en Buenas Prácticas de Laboratorio de la
OMS a los “Laboratorios Regionales de Salud Pública del INS”, en el interior del país.
- Ha realizado Transferencia Tecnológica en los países de El Salvador y Ecuador, en
el Entrenamiento: “Implementación de Ensayos Microbiológicos según USP/ISO
17025/BPL-OMS”.
- Representó al Perú en “Microbiological Testing”, organizado por la OMS, en
AMMAN, JORDAN (JORDANIA).
- Fue parte de los colaboradores de TEVA PERU y ROSTER.
- Formó parte de Consultores de la OPS.
- Actualmente se desempeña como Asesora, Consultora, Auditora y Capacitadora de
forma Independiente, brindando todo tipo de capacitaciones en diferentes rubros,
aplicadas al Control de Calidad Microbiológico, Buenas Prácticas de Laboratorio
(BPL), Manejo e Interpretación de Farmacopeas, Gestión Pública, etc.
 MODULO II
CURSO: Control de Calidad
Microbiológico para Medicamentos y
Dispositivos Médicos según la USP
Blga. Verónica López Caycho
vlopezcaycho98@gmail.com
AGENDA MÓDULO II
SEMANA 1(25/11/2022): Control de Calidad en Ensayo de
Esterilidad.
SEMANA 2 (2/11/2022): Control de Calidad en Ensayo de
Endotoxinas Bacterianas (LAL) y Ensayo de Pirógenos.
SEMANA 3 (9/11/2022): Control de Calidad en Ensayo de
Recuento Microbiano de Productos No Estériles: Recuento e
Identificación de Microorganismos Específicos.
SEMANA 4 (16/11/2022): Control de Calidad en Ensayo de
Valoración Microbiológica.
➢ AGENDA
SEMANA 1: Control de Calidad en Ensayo de
Esterilidad.

-Objetivo
-Definiciones
-Tipos de muestras
-Algunos requisitos de las BPL en Microbiología según OMS.
-Ensayo. Métodos. Medios. Cepas.
-Promoción de crecimiento. Producto a ensayar e Interpretación.
-Aptitud del método. Interpretación.
ENTIDADES REGULADORAS -CAN
PERÚ COLOMBIA

• Autoridad Nacional
responsable de
garantizar la eficacia, • Encargado de la
seguridad y calidad de ejecución de
los productos políticas en materia
farmacéuticos, de vigilancia
dispositivos médicos y sanitaria y control
productos sanitarios, de calidad de
contribuyendo con el productos
acceso y uso racional
de los mismos en
beneficio de la salud de
la población

ECUADOR
BOLIVIA MEXICO

• Responsable de
regular, supervisar,
revisar, verificar,
controlar, vigilar y
fiscalizar el El control normativo
cumplimiento de la y supervisión de
reglamentación legal todos los productos
y técnica de los
establecimientos, farmaceuticos Responsable de que
productos y servicios que se encuentran la operación y
de interés sanitario. en establecimientos funcionamiento del
estatales de salud, establecimiento se
descentralizados o apegue
• . a la
privados. Regulación Sanitaria
vigente y de la
pureza y seguridad
de los productos.
ENSAYO DE ESTERILIDAD
ENSAYO DE ESTERILIDAD
Objetivo

Determinar si un producto farmacéutico

o dispositivo médico es o no estéril.

Determinar la presencia o ausencia de

microorganismos viables en un producto
farmacéutico o dispositivo medico.
ENSAYO DE ESTERILIDAD
Definiciones
La esterilización se define como
el proceso mediante el cual se
destruyen todos los
microorganismos viables
presentes en un objeto o
superficie, incluidas las esporas
bacterianas. El concepto de
esterilidad expresa una condición
absoluta: un determinado objeto o
superficie está estéril o no está
estéril.
 ENSAYO DE ESTERILIDAD
Definiciones

Esterilidad: ausencia de
microorganismos viables.

Estéril significa libre de

gérmenes, es decir “0” UFC..
 ENSAYO DE ESTERILIDAD
¿En que se fundamenta el ensayo?

 Crecimiento microbiano en
medio líquido, evidenciado por
turbidez, cuando se recuperan
los microorganismos viables
existentes en un producto
analizado que previamente ha
sido neutralizado en su actividad
preservante o antibiótica
mediante filtración, dilución o
acción química.
 ENSAYO DE ESTERILIDAD
Tipo de Muestras
PRODUCTOS
DISPOSITIVOS MÉDICOS
FARMACÉUTICOS

Jeringas
Soluciones parenterales Catéteres
Suturas
Productos farmacéuticos de
uso ocular Equipos de venoclisis
Productos farmacéuticos de Dispositivos intrauterinos
uso ótico Otros
ENSAYO DE ESTERILIDAD
Productos Farmaceúticos
ENSAYO DE ESTERILIDAD
Dispositivos Médicos
Algunos requisitos de las BPL en
Microbiología según la
OMS,aplicados al ensayo de
Esterilidad
 ENSAYO DE ESTERILIDAD
Personal
BPL.OMS.MB
➢ Los ensayos microbiológicos
deben ser realizados y
supervisados por una persona
experimentada, calificada en
microbiología o su equivalente.
ENSAYO DE ESTERILIDAD
Personal
BPL.OMS.MB
➢ El personal debe tener
entrenamiento básico en
microbiología y experiencia
práctica relevante antes de ser
autorizado a realizar el trabajo
que implican los ensayos
microbiológicos.
ENSAYO DE ESTERILIDAD
Personal
Vertido de medios de cultivo en placas

Recuento de colonias

Técnicas asépticas

Preparación de medios de cultivo

Dilución en serie

Técnicas básicas de identificación

 ENSAYO DE ESTERILIDAD
TALLER 1 (5 minutos):

1. ¿Cuál es el número del personal en su

laboratorio?
2. ¿Considera Ud. Que es suficiente el
personal para la cantidad de carga de
trabajo a desarrollar en su laboratorio?
ENSAYO DE ESTERILIDAD
Equipos
BPL.OMS.MB
 Cada equipo, instrumento u otro
dispositivo utilizado para el análisis,
verificación y calibración debe
identificarse individualmente.
 ENSAYO DE ESTERILIDAD
Equipos
BPL.OMS.MB
 Como parte de su sistema de calidad, el laboratorio debe
tener un programa documentado para la calificación,
calibración, verificación del desempeño y mantenimiento de
sus equipos y un sistema para el monitoreo del uso de los
mismos.
 ENSAYO DE ESTERILIDAD
Equipos

 Balanza

 Autoclave
ENSAYO DE ESTERILIDAD
Equipos

 Horno

 Cabina de Bioseguridad
 ENSAYO DE ESTERILIDAD
Equipos

Instrumento de medición de
temperatura. BPL-OMS.MB
➢ El laboratorio debe contar con
termómetros, termocuplas u otros
dispositivos de medición y control de
temperatura calibrados en baños de
agua, incubadoras, autoclaves,
debiendo contar con certificados de
trazabilidad a un patrón de referencia.
ENSAYO DE ESTERILIDAD
Equipos
Instrumento de medición de
temperatura. BPL-OMS.MB
➢ Se verifica y registra la estabilidad de la
temperatura y distribución uniforme de
la temperatura, después de una
reparación de autoclaves, incubadoras,
baño de agua y hornos.
 ENSAYO DE ESTERILIDAD
Instalaciones
 Área Calificada

 Control y registro de presión positiva

 Vestidor
 ENSAYO DE ESTERILIDAD
Instalaciones para el ensayo de esterilidad. BPL. OMS
Condiciones asépticas
Instalaciones, servicios y equipos
• Calificados
Zona protegida con flujo de aire unidireccional de Grado A o una
cabina de bioseguridad, entorno grado B.
El aire suministrado a las zonas de Grado A y B debe filtrarse a través
de filtros HEPA terminales.
Recalificarse 1 vez al año por un contratista competente o
proveedor del servicio.
• Límite de partículas viables y no viables
• Verificación de la integridad de los filtros HEPA y velocidad de flujo
en las áreas.
• Documentar el mapeo de los puntos de muestreo para el
monitoreo rutinario, tiempo de exposición y frecuencia
(procedimientos)
 ENSAYO DE ESTERILIDAD
Instalaciones
➢ La orientación dada con respecto al número
máximo de partículas permitido corresponde,
aproximadamente, a la Norma Federal de los
Estados Unidos209E (1992)como sigue:

▪ Clase 100(grados A y B)
▪ Clase 10.000 (grado C)
▪ Clase 100.000 (grado D)
¿Con qué ambientes
debemos contar?
Sala de Estufas
VESTUARIO
ESCLUSA
PRE - CÁMARA
CAMARA DE ESTERILIDAD
PARÁMETROS MICROBIOLÓGICOS
MONITOREADOS
➢ El aire

➢ Las superficies

➢ El personal
 ENSAYO DE ESTERILIDAD
TALLER 2 (5 minutos):

1. ¿Cuál de estos tres requisitos

de la OMS considera Ud. Es el
más importante para el Ensayo
de Esterilidad?
 ¿ QUÉ CONTROLES
PRELIMINARES DEBEMOS
REALIZAR PARA ASEGURAR
NUESTROS RESULTADOS ?
CONTROL DE GUANTES Y VESTIMENTA POR
MÉTODO DE HISOPADO
CONTROL DE GUANTES Y VESTIMENTA POR
MÉTODO DE HISOPADO
CONTROL DE GUANTES Y VESTIMENTA POR
MÉTODO DE HISOPADO
CONTROL DE GUANTES Y VESTIMENTA POR
MÉTODO DE HISOPADO
CONTROL DE GUANTES Y VESTIMENTA POR
MÉTODO DE HISOPADO
Especificaciones recomendadas
por USP para indumentaria del
personal operativo
Clase de Área Guantes Vestimenta(UFC/
(UFC/placa de placa de
contacto) contacto)
100 3 5
10 000 10 20
 ENSAYO DE ESTERILIDAD
Métodos
➢ Filtración por membrana
▪ Sistema cerrado

▪ Sistema abierto

➢ Inoculación directa
Medios de cultivo/Diluyentes

Peptona (Agua Peptonada)

Líquido A, D, K

Caldo Tripticasa Soya (TSB)

Caldo Tioglicolato Fluido (TGF)

 Cepas para Promoción y
Aptitud
➢ Bacterias Aerobias
❖ Staphylococcus aureus ATCC 6538
❖ Bacillus subtilis ATCC 6633
❖ Pseudomonas aeruqinosa ATCC 9027
➢ Bacteria anaerobia
❖ Clostridium sporogenes ATCC 19404
➢ Hongos
❖ Candida albicans ATCC 10231
❖ Aspergillus brasiliensis (Aspergillus Níger) ATCC 16404
 Evaluar cada lote de
medio listo para usar, y
cada partida de medio
preparado ya sea a partir
de medio deshidratado o
mezclando los
ingredientes.

Las técnicas de
mantenimiento de cultivos Los medios son
de lote de siembra se usan adecuados si se
para que los Promoción de produce un
microorganismos viables crecimiento
empleados para la Crecimiento claramente
inoculación correspondan a visible de los
no más de cinco pasajes microorganismos.
desde el lote de siembra
maestro original

Se debe evaluar que

estén óptimos es decir
que se compruebe que
puedan crecer
microorganismos si la
muestra las tuviera.
 PROMOCIÓN DE
CRECIMIENTO
TGF
Las cepas indicadas de microorganismos. Inocular
porciones de Medio Líquido de Tioglicolato con un número
pequeño (no más de 100 ufc) de los microorganismos
siguientes, usando una porción de medio distinta para cada
una de las especies:
 Clostridium sporogenes
 Pseudomonas aeruginosa
 Staphylococcus aureus
 PROMOCIÓN DE CRECIMIENTO
TSB
Medio de Digerido de Caseína y Soja con un número pequeño
(no más de 100 ufc) de los microorganismos siguientes, usando
una porción de medio distinta para cada una de las especies:

 Aspergillus brasiliensis
 Bacillus subtilis
 Candida albicans

Incubar durante no más de 3 días en el caso de

bacterias y durante no más de 5 días en el caso de
hongos.
 PROMOCIÓN DE CRECIMIENTO

 Los medios son

adecuados si se produce
un crecimiento
claramente visible de los
microorganismos.
 PRUEBA DE
ESTERILIDAD DEL
PRODUCTO A
EXAMINAR
 ENSAYO DE ESTERILIDAD
Filtración por membrana
 La técnica de filtración por membrana se usa cuando la
naturaleza del producto lo permite, es decir, para
preparaciones acuosas filtrables, para preparaciones
alcohólicas o aceitosas y para preparaciones miscibles
con, o solubles en, disolventes acuosos o aceitosos,
siempre que dichos disolventes no posean un efecto
antimicrobiano en las condiciones de la prueba.
Instalar el Sistema de Filtración
(Sistema Cerrado)
▪ Bomba peristáltica
▪ Bomba de vacio
▪ Soporte de acero
inoxidable
▪ Sistema de
mangueras
▪ Caperuzas o tapas
▪ Tubos de filtración
▪ Aguja de succión
 ENSAYO DE ESTERILIDAD
Filtración por membrana-Método abierto
ENSAYO DE ESTERILIDAD
Filtración por membrana
Usar filtros de membrana con un tamaño nominal de
poro no mayor de 0,45 µm, cuya eficacia para
retener microorganismos haya sido establecida.

Se usan filtros de nitrato de celulosa para

soluciones acuosas, oleosas y con bajo
contenido alcohólico.

Se usan filtros de acetato de celulosa, por

ejemplo, para soluciones con alto contenido
alcohólico. Es posible que para ciertos
productos (p. ej., antibióticos) se necesiten
filtros especialmente adaptados.
 ENSAYO DE ESTERILIDAD
Filtración por membrana
La técnica descrita más adelante supone que se usarán
membranas de aproximadamente 50 mm de diámetro.

Si se usan filtros de un diámetro diferente, los volúmenes de las diluciones y

los lavados deben ajustarse según corresponda.
El aparato de filtración y la membrana se esteriliza

El aparato de filtración y la membrana se esterilizan usando técnicas

adecuadas.

El aparato se diseña de tal modo que la solución a examinar se pueda introducir y

filtrar en condiciones asépticas: permite retirar asépticamente la membrana para
transferirla al medio de cultivo, o es adecuado para llevar a cabo la incubación
dentro del aparato mismo después de agregarle el medio.
ENSAYO DE ESTERILIDAD
Filtración por membrana
1. Transferir una pequeña 6. Transferir la membrana
cantidad de un diluyente completa al medio de 7. Alternativamente,
estéril adecuado, como cultivo o cortarla transferir el medio a la
por ejemplo el Líquido A, asépticamente en dos membrana
a la membrana en el partes iguales y transferir
aparato y filtrar. cada mitad a sendos
medios adecuados.

8. Incubar los medios

2. Transferir a la 5. El ciclo de lavado no durante no menos de 14
membrana o membranas debe exceder de cinco días.
el contenido del envase o lavados con 100 mL por
envases a analizar. filtro.

4. Si el producto posee
propiedades
3. Filtrar inmediatamente. antimicrobianas, lavar la
membrana no menos de
tres veces.
ENSAYO DE ESTERILIDAD
Filtración por membrana
➢ TIPO DE MUESTRAS
❖ SOLUCIONES ACUOSAS
❖ SÓLIDOS SOLUBLES
❖ ACEITES Y SOLUCIONES OLEOSAS
❖ UNGÜENTOS Y CREMAS
❖ JERINGAS PRELLENADAS
ENSAYO DE ESTERILIDAD
Filtración por membrana
ENSAYO DE ESTERILIDAD
Filtración por membrana
ENSAYO DE ESTERILIDAD
Filtración por membrana
ENSAYO DE ESTERILIDAD
Filtración por membrana
ENSAYO DE ESTERILIDAD
Filtración por membrana
 ENSAYO DE ESTERILIDAD
Filtración por membrana
 VIDEO
ENSAYO DE ESTERILIDAD
Inoculación Directa
1. Transferir directamente
en el medio de cultivo una
cantidad de muestra a
examinar, según
corresponda. (TABLA.USP)
4. Incubar por 14 días los tubos
con Caldo Caseína digerido de
soya a 20-25°C y los tubos con
el Medio Fluído Tioglicolato a
30-35°C.
2. Si el producto a examinar posee
actividad antimicrobiana, realizar
la prueba después de neutralizar
esta actividad con una sustancia
neutralizante adecuada o
mediante su dilución en una
cantidad suficiente de medio de
cultivo.
3. Cuando sea necesario usar un
volumen grande del producto,
probablemente sea preferible
usar un medio de cultivo
concentrado preparado de tal
modo que se tenga en cuenta la
dilución subsiguiente.
ENSAYO DE ESTERILIDAD
Inoculación Directa
 ENSAYO DE ESTERILIDAD
Inoculación Directa
 TIPO DE MUESTRAS
❖ LÍQUIDOS OLEOSOS
❖ UNGÜENTOS Y CREMAS
❖ CATGUT Y OTROS MATERIALES DE SUTURA
QUIRÚRGICA
❖ ALGODÓN PURIFICADO, GASA, APÓSITOS
QUIRÚRGICOS Y ARTÍCULOS
RELACIONADOS(EN SU ROTULO. ESTÉRIL)
❖ DISPOSITIVOS ESTÉRILES
➢ AUSENCIA DE TURBIDEZ POR CRECIMIENTO
MICROBIANO: Si no hay evidencia de crecimiento
microbiano se establece que el producto ensayado
cumple con los requerimientos de esterilidad.
ESTÉRIL

➢ PRESENCIA DE TURBIDEZ POR CRECIMIENTO

MICROBIANO: el producto no cumple con los
requerimientos del ensayo. NO ESTÉRIL
❑ Cuando al término de la incubación existen dudas
razonables de que la turbidez sea producida por
crecimiento microbiano se debe trasferir 1mL de cada
tubo de filtración a tubos (3) con los mismos medios.
Incubar por no menos de 4 días en las mismas
condiciones iniciales. Aplicar los criterios anteriores.
ENSAYO DE ESTERILIDAD
Interpretación de resultados
 La prueba puede considerarse inválida solo si se cumplen
una o más de las siguientes condiciones:
a. Los datos de monitoreo microbiológico de las
instalaciones para pruebas de esterilidad demuestran una
falla.
b. Una revisión del procedimiento analítico usado durante la
prueba en cuestión revela un error.
c. Se halla crecimiento microbiano en los controles
negativos.
d. Después de determinar la identidad de los
microorganismos aislados de la prueba, el crecimiento de
esta especie (o especies) puede atribuirse de manera
inequívoca a errores con respecto al material o a la técnica
usados al realizar el procedimiento de la prueba de
esterilidad.
 APTITUD DE LA PRUEBA -
Validación
 Se debe establecer la aptitud del método es
decir la capacidad de la prueba para detectar
los microorganismos previamente inoculados
(en cantidad conocida) en presencia del
producto a examinar.
 Permite comprobar que el método sirve para el
fin previsto en la formulación a evaluar.
 Para estas pruebas de aptitud se deben utilizar
suspensiones estandarizadas de cepas (ATCC:
American Type Culture
 APTITUD DEL MÉTODO DE
ENSAYO
Llevamos a cabo una prueba según se describe en Prueba de
Esterilidad del Producto a Examinar usando exactamente los
mismos métodos.
Aptitud para Filtración por
Membrana
 Filtración por Membrana: Después de
transferir a la membrana el contenido
del envase o envases a analizar, agregar
un inóculo de un número pequeño de
microorganismos viables (no más de
100 ufc) en la porción final del
diluyente estéril usado para enjuagar el
filtro.
Aptitud para Filtración por
Membrana
 Aptitud para Inoculación
Directa
 Después de transferir al medio de
cultivo el contenido del envase o
envases a analizar, agregar al
medio un inóculo de un número
pequeño de microorganismos
viables (no más de 100 ufc).
 Aptitud para Inoculación
Directa
 Colocar imagen relacionado
 APTITUD DEL MÉTODO DE
ENSAYO
 En ambos casos, usar los mismos
microorganismos que los mencionados
anteriormente en Prueba de Promoción del
Crecimiento de Organismos Aerobios,
Anaerobios y Hongos.
 Realizar una prueba de promoción del
crecimiento como control positivo.
 Incubar todos los recipientes que contienen
medio durante no más de 5 días.
APTITUD DEL MÉTODO DE
ENSAYO
INTERPRETACIÓN

Si después de la incubación
se obtiene un crecimiento Si no se obtiene un
claramente visible de crecimiento claramente
microorganismos, visible en presencia del
comparable visualmente con producto a evaluar,
el del recipiente de control comparable visualmente con
sin producto, el producto Modificar las condiciones
el de los recipientes de con el fin de eliminar la
no posee actividad control sin producto, el
antimicrobiana en las actividad antimicrobiana y
producto posee actividad repetir la Prueba de Aptitud
condiciones de la prueba o antimicrobiana que no se
tal actividad se ha del Método
ha eliminado
eliminado satisfactoriamente en las
satisfactoriamente. La condiciones de la prueba.
prueba de esterilidad puede
entonces llevarse a cabo sin
otras modificaciones.
 APTITUD DEL MÉTODO DE
ENSAYO
 Esta prueba de aptitud del método se lleva a
cabo:

Cuando la prueba Siempre que haya un

de esterilidad cambio en las
condiciones
tiene que experimentales de la
realizarse en un prueba. La prueba de
producto nuevo. aptitud del método
podrá llevarse a cabo
simultáneamente con
la Prueba de
Esterilidad del
Producto a Examinar.
 Validación del ensayo de esterilidad : TSB
Candida albicans ATCC 10231 1mL 1mL 1mL

1mL

1mL

Lavar con Obtener 9mL 9mL 9mL 10 -3 9mL

Criovial 3mL de suspensión 10 -1 10 -2 10 -4
BHI AS
Incubar Incubar solución A = 0,2 a 1mL 1mL
salina 0,3 Tubos de filtración
estéril 560nm AS con
Incubar TSB

Bacillus subtillus ATCC 6633 1mL

1mL 1mL 1mL

1mL

9mL ss 9mL 9mL 9mL 9mL 9mL

Criovial Lavar con Descartar el 10 -1 10 -2 10 -3 10 -4
BHI TSA Centrifugar Obtener 10 -5
3mL de sobrenadante 1mL 1mL
Incubar Incubar solución 1500 rpm suspensión
y reconstituir el
por 60` A = 0,2 a 0,3
salina pellets con Tubos de filtración
560nm TSA
estéril 5mL ss con
Incubar
TSB

Aspergillus niger ATCC 16404 1mL 1mL 1mL

1mL

1mL

Lavar con
3mL de
BHI Centrifugar Descartar el 9mL ss 9mL 9mL 9mL 9mL
AS solución
Criovial Incubar 1500 rpm sobrenadante 10 -1 10 -2 10 -3 10 -4
Incubar salina Obtener 1mL 1mL
por 60` y reconstituir el
estéril suspensión
pellets con A = 0,2 a 0,3
5mL ss Tubos de filtración
560nm AS
con
Incubar
TSB
Nota.-
Las soluciones salinas con Tween 80 al 0,05%
 Validación del ensayo de esterilidad : MEDIO FLUIDO TIOGLICOLATO
Staphylococcus aureus ATCC 6538 1mL 1mL 1mL 1mL 1mL 1mL

1mL suspensión
microbiana con
100uL <100UFC/mL

Tubos de filtración o envases

con Medio fluido tioglicolato
Lavar con Obtener 9mL 9mL 9mL 9mL 9mL 9mL Incubar
Criovial 3mL de suspensión 10 -1 10 -2 10 -3 10 -4 10 -5 10 -6 30-35°C x 72h
BHI TSA
Temperatura solución Sol. Salina 0,9%
Incubar Incubar 1mL 1mL
ambiente salina 0,9% con 0,05% TSA
30-35°C 30-35°C Para las diluciones usar:
24h 24h estéril tween 80 Incubar
Sol. Salina 0,9% con 0,05% tween 80 30-35°C
A = 0,2 a 0,3
560nm Control 24h
negativo
Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027 1mL 1mL 1mL 1mL 1mL 1mL
1mL suspensión
microbiana con
100uL <100UFC/mL

Tubos de filtración o envases

9mL 9mL 9mL 9mL 9mL 9mL con Medio fluido tioglicolato
Criovial Lavar con Obtener Incubar
Temperatura BHI TSA suspensión 10 -1 10 -2 10 -3 10 -4 10 -5 10 -6
Incubar Incubar 3mL de 30-35°C x 72h
ambiente solución Sol. Salina 0,9% 1mL 1mL
30-35°C 30-35°C con 0,05% Para las diluciones usar: TSA
24h 24h salina 0,9%
estéril tween 80 Sol. Salina 0,9% con 0,05% tween 80 Incubar
A = 0,2 a 0,3 Control 30-35°C
560nm negativo 24h

Clostridium sporogenes ATCC 19404 1mL

1mL 1mL
1mL

1mL suspensión
1mL microbiana con
100uL <100UFC/mL

Tubos de filtración o envases

MFT con Medio fluido tioglicolato
Criovial MFT Calentar Centrifugar Descartar el Obtener 9mL 9mL 9mL 9mL
Incubar Incubar
Temperatura Incubar 80°Cx30` 1500 rpm sobrenadante y suspensión 10 -1 10 -2 10 -3 10 -4
30-35°C 1mL 1mL 30-35°C x 48h
ambiente 30-35°C por 60` reconstituir el Sol. Salina
24h
48h pellets con 5mL 0,9%
So. Salina 0,9% con 0,05% Agar clostridium
con 0,05% tween 80 Para las diluciones usar:
doble capa
tween 80 A = 0,2 a 0,3 Sol. Salina 0,9% con 0,05% Control Incubar en anaerobiosis
560nm tween 80 negativo
30-35°C x 48h
GRACIAS