BIOQUIMICA

EL CICLO DEL ÁCIDO CITRICO GENERA MOLÉCULAS RICAS EN ENERGÍA

La acetil CoA que se forma a partir de piruvato o como producto de otras

vías puede ser oxidada en el ciclo del ácido cítrico.
Se deben considerar dos características:

1. Flujo de C.
2. Producción de moléculas ricas en energía.

El ciclo actúa en dos fases:

1. Adicción de una porción (acetil - CoA) a un compuesto de 4C

(oxalacetato) para dar un anión orgánico de 6C, el citrato seguido de la
pérdida de 2C en forma de CO2.
2. Regeneración del oxalacetato.

FASE 1: INTRODUCCIÓN Y PÉRDIDA DE 2 ÁTOMOS DE C

Paso 1: Introducción de 2 átomos de C en forma de Acetil CoA.

Oxalacetato + Acetil CoA Citrato Sintetasa Citrato + CoA-SH AG = -32

K/mol

H2O H+
En la primera etapa de la reacción de la citrato sintasa, un protón es extraído
del grupo metilo de la Acetil CoA por un residuo de Histidina de la enzima.
Esta reacción genera el compuesto enormemente inestable, el Citroil – CoA
que espontáneamente se hidroliza mientras está unida a la enzima para dar
los productos.

Reacciones exergónicas: Los análisis cristalográficos de la enzima

proporcionan una prueba excelente del modelo de ajuste inducido de la
catálisis enzimática.

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Paso 2: Isomerización del Citrato

H2O H2O

Citrato Cis-Aconinato D-Isocitrato AG = + 6,3 Kcal/mol

H2O H2O
La aconitasa, el nombre común de la aconitato hidratasa, cataliza la
conversión cercana al equilibrio de citrato a isocitrato.

La acción de la aconitasa convierte al citrato en un alcohol 2a oxidables. El

nombre de la enzima deriva del intermediario de la reacción cis aconitato.
La reacción se efectúa por eliminación de agua para formar un doble
enlace C-C seguida de una adicción esteroespecífica de agua para formar
isocitrato.

La enzima contiene Fe-S normalmente se asocia a una oxidorreductasa.

La aconitasa es el lugar de acción del efecto tóxico del fluoroacetato un

producto vegetal que se utiliza como pesticida.
CoASH

Fluoroacetato Fluroacetil – CoA Citrato sintasa → Fluorocitrato

CoASH
Oxalacetato

El análogo al citrato, el fluorocitrato es un inhibidor potente de la aconitasa

animal y el metabolismo aeróbico vía del ciclo del ácido cítrico se bloquea
en su presencia.

La reacción de la aconitasa es esteroespecífica. De los 4 diasteroisómeros

posibles del isocitrato solo se produce uno. La aconitasa es una de las
primeras enzimas para la que se demostró y determino la
estereoespecificidad.

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Paso 3: Generación de CO2 por una deshidrogenasa ligada a NAD+.
Isocitrato
Deshidrogenasa
Isocitrato + NAD α –cetoglutarato + NADH + CO2 AG = -20,9
K/mol (NADP) (NADPH)

La isocitrato deshidrogenasa cataliza la descarboxilación oxidativa de

isocitrato para formar α-cetoglutarato (4 reacciones oxido reductoras)

1. Isocitrato es oxidado por la transferencia de un ion hidruro al NAD+

reduciendo la coenzima a NADH y formando oxalosuccinato (β-ceto-
ácido inestable).

2. El oxalosuccinato experimenta una descarboxilación β no enzimática α–

cetoglutarato antes de que sea liberado de la enzima.

El isocitrato es convertido al cetoácido α-cetoglutarato con liberación de

CO2 y una mol de NAD+ es reducido a NADH. Esta reacción es irreversible
metabólicamente y en E. coli se puede regular por fosforilación.

NAD NADH+H CO2

Isocitrato Oxalosuccinato a-cetoglutarato

Paso 4: Generación de un segundo CO2 por un complejo multienzimático.

La cuarta reacción del ciclo es una reacción de múltiples pasos, totalmente
comparable a la reacción de la piruvato deshidrogenasa.
Un substrato α-cetoácido experimenta una descarboxilación oxidativa, con
formación de un Acil CoA.

α-cetoglutarato + NAD+ + CoA → Succinil-CoA + CO2 + NADH AG = -33,5

K/mol

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Esta reacción la cataliza el complejo α-cetoglutarato deshidrogenasa, una
agrupación enzimática semejante al complejo piruvato deshidrogenasa
con tres actividades enzimáticas análogo 5 Coenzimas – TPP, NAD+, FAD,
Ácido lipoico y CoA.

Una diferencia importante entre estos dos complejos multienzimáticos es

que las actividades reguladoras asociadas con el complejo piruvato
deshidrogenasa no se dan en el complejo α –cetoglutarato
deshidrogenasa.

FASE 2: REGENERACIÓN DEL OXALACETATO

Paso 5: Una fosforilación a nivel del substrato

La Succinil-CoA es un compuesto de alta energía y su energía potencial se

utiliza para impulsar la formación de un enlace fosfato de alta energía. Esta
reacción es catalizada por la Succinil – CoA sintetasa, es comparable a las
dos reacciones de fosforilación a nivel del substrato en la glucolisis excepto
porque en las células animales el nucleótido producto de alta energía no es
el ATP sino el GTP.

Succinil CoA + Pi + GDP Succinato + GTP + CoASH AG = -2,9 Kcal/mol

Gran parte del GTP formado impulsa la síntesis final de ATP mediante la
acción de la nucleósido difosfoquinasa.

GTP + ADP GDP + ATP AG = 0,0 Kcal/mol

Aquí se forman las plantas y las bacterias (Succinil + ADP)

Paso 6: Deshidrogenación dependiente de Flavina.

La primera de las tres reacciones que intervienen catalizadas por la

succinato deshidrogenasa es la deshidrogenación dependiente del FAD de
2 carbonos saturados a un doble enlace.

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Succinato + FAD Fumarato + FADH2 AG = 0 Kcal/mol

La coenzima es el FAD transfiere sus electrones a un centro Fe – S en la

molécula enzimática. El FAD está unido de forma covalente a la proteína
enzimática designada como E- FAD a través de un residuo de histidina
especifico. La enzima está unida a la membrana mitocondrial interna.

Acción de la succinato deshidrogenasa, es también estéreo selectiva, y solo

se forma el isómero trans fumarato.

Paso 7: Hidratación de un doble enlace C-C.

La hidratación trans esteroespecífica del doble enlace C-C cataliza la

fumarato hidratasa = fumarasa.

Fumarato+H2O Malato AG = -3,8 Kcal/mol.

Paso 8: Una deshidrogenación que regenera el oxalacetato.

Malato+NAD Oxalacetato + NADH + H AG = +29,7 Kcal/mol

Endergónica se decanta hacia la derecha.

ESTEQUIOMETRIA Y ENERGÉTICA DEL CICLO DEL ÁCIDO CÍTRICO

1. Se eliminan 2 C → CO2
2. Se produjeron 4 reacciones de oxidación NAD+ (3 casos) FAD (1 caso).
3. Generó fosfato de alta energía en una reacción.
4. Regeneró el oxalacetato.

Acetil-CoA + 3 H2O + 3NAD + FAD + GPP + Pi → 2CO2 + 3NADH + FADH2 +

CoASH + GTP

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El ciclo del ácido cítrico toma parte en la gluconeogénesis, transaminación
y desaminación

Los intermediarios del ciclo son potencialmente glucogénicos, puesto que

dan lugar al oxalacetato y, por tanto, a la producción neta de glucosa (en
el hígado y el riñón, los órganos que llevan a cabo la gluconeogénesis). La
enzima clave que cataliza la transferencia neta fuera del ciclo en la
gluconeogénesis es la fosfoenolpiruvato carboxilasa, que descarboxila el
oxalacetato a fosfoenolpiruvato, con el GTP actuando como donador de
fosfato.

La transferencia neta hacia el ciclo ocurre como resultado de varias

reacciones diferentes. Entre las más importantes de estas reacciones
anapleróticas está la formación de oxalacetato mediante la carboxilación
de piruvato, catalizada por la piruvato carboxilasa. Esta reacción es
importante para mantener una concentración adecuada de oxalacetato
para la reacción de condensación con la acetil-CoA. Si se acumula la
acetil-CoA, ésta actúa como activador alostérico de la piruvato carboxilasa
y como inhibidor de la piruvato deshidrogenasa, de modo que se asegura
un suministro de oxalacetato. El lactato, un sustrato importante para la
gluconeogénesis, entra al ciclo por medio de la oxidación a piruvato y luego
la carboxilación a oxalacetato.

En las reacciones de la aminotransferasa (transaminasa) se forma piruvato a

partir de alanina, oxalacetato a partir de aspartato y α cetoglutarato a partir
de glutamato. Debido a que estas reacciones son reversibles, el ciclo
también sirve como fuente de estructuras de carbono para la síntesis de
estos aminoácidos. Otros aminoácidos contribuyen a la gluconeogénesis
porque sus estructuras de carbono dan lugar a los intermediarios del ciclo
del ácido cítrico. La alanina, cisteína, glicina, hidroxiprolina, serina, treonina
y triptófano producen piruvato; la arginina, histidina, glutamina y prolina
producen αcetoglutarato; la isoleucina, metionina y valina dan succinil-
CoA, y la tirosina y fenilalanina dan fumarato.

En los rumiantes, cuyo principal combustible metabólico son los ácidos

grasos de cadena corta que se forman por la fermentación bacteriana, la

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conversión de propionato, el principal producto glucogénico de la
fermentación en el rumen, en succinil-CoA es de gran importancia y se lleva
a cabo mediante la vía de la metilmalonil-CoA.

El ciclo del ácido cítrico participa en la síntesis de ácidos grasos

La acetil-CoA, formada a partir del piruvato por la acción de la piruvato

deshidrogenasa, es el elemento básico para la síntesis de los ácidos grasos
de cadena larga en los no rumiantes. (En los rumiantes, la acetil-CoA se
obtiene directamente del acetato.) La piruvato deshidrogenasa es una
enzima mitocondrial, y la síntesis de ácidos grasos es una vía citosólica, pero
la membrana mitocondrial es impermeable a la acetil-CoA. La acetil-CoA
se obtiene en el citosol a partir de citrato sintetizado en la mitocondria, que
se transporta al citosol y se fragmenta en una reacción catalizada por la
ATP-citrato liasa.

La regulación del ciclo del ácido cítrico depende sobre todo de un

suministro de cofactores oxidados
en la mayor parte de los tejidos, en donde la función principal del ciclo del
ácido cítrico se ejerce en el metabolismo productor de energía, el control
respiratorio por medio de la cadena respiratoria y la fosforilación oxidativa
regula la actividad del ciclo del ácido cítrico. Por consiguiente, la actividad
depende en forma inmediata del abastecimiento de NAD+, que, a su vez,
debido al estrecho acoplamiento entre la oxidación y la fosforilación,
depende de la disponibilidad de ADP y, por tanto, de la tasa de utilización
de ATP en el trabajo químico y físico. Además, algunas de las enzimas del
ciclo se regulan individualmente. Los sitios más probables para la regulación
son las reacciones catalizadas por la piruvato deshidrogenasa, citrato
sintasa, isocitrato deshidrogenasa y α cetoglutarato deshidrogenasa. El Ca2+
activa a las deshidrogenasas; la concentración de este catión aumenta
durante la contracción muscular y la secreción, cuando hay una mayor
demanda de energía. En un tejido como el cerebro, que depende en gran
medida de los carbohidratos para suministrar acetil-CoA, el control del
ácido cítrico podría estar en la piruvato deshidrogenasa. Varias enzimas son
sensibles al estado energético de la célula, que se reflejan las relaciones de
[ATP]/[ADP] y [NADH]/[NAD+]. Por consiguiente, el ATP y la acil-CoA de

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ácidos grasos de cadena larga inhiben en forma alostérica a la citrato
sintasa. La activación alostérica de la isocitrato deshidrogenasa
mitocondrial dependiente de NAD+ por el ADP se contrarresta con ATP y
NADH. El complejo de la α cetoglutarato deshidrogenasa se regula en la
misma forma que la piruvato deshidrogenasa. El oxalacetato inhibe a la
succinato deshidrogenasa, y la disponibilidad del oxalacetato, que está
bajo control de la malato deshidrogenasa, depender de la relación
[NADH]/[NAD+]. Puesto que la Km para el oxalacetato de la citrato sintasa es
del mismo orden de magnitud que su concentración mitocondrial, es
probable que la concentración de oxalacetato controle la tasa de
formación del citrato. Todavía queda por resolver cuáles de estos
mecanismos son importantes in vivo.

Cuadro. Generación de ATP por el ciclo del ácido cítrico

Reacción catalizada Método de producción de Número de

por P moléculas de ATP
formadas

Isocitrato Oxidación del NADH en la

3
deshidrogenasa cadena respiratoria

α-Cetoglutarato Oxidación del NADH en la

3
deshidrogenasa cadena respiratoria

Succinat tiocinasa Oxidación a nivel de

1
sustrato

Succinato Oxidación del FADH2 en

2
deshidrogenasa la cadena respiratoria

Malato Oxidación del NADH en la

3
deshidrogenasa cadena respiratoria