DEPARTAMENTO DE SANIDAD

I.E.S Miguel Catalán Curso

MICROBIOLOGÍA E HIGIENE ALIMENTARIA 2022-2023

TÉCNICO SUPERIOR EN DIETÉTICA Página 1 de 4

Alumno JOSELYN RODRIGUEZ VALAREZO

PRÁCTICA 6
CONTROL DE SUPERFICIES
(FECHA: 15 NOVIEMBRE 2022)

1. OBJETIVOS
Comprobar y verificar mediante diferentes métodos (cultivo) si aparecen o no MO mesófilos aerobios (PCA) y
enterobacterias (VRBG).

2. MATERIALES Y EQUIPOS
● Probeta
● varilla agitadora
● embudo
● matraz erlenmeyer
● frasco
● microondas
● espátula
● báscula
● placa de Petri
● autoclave
● papel encerado
● vidrio de reloj
● mechero bunsen
● estufa de incubación
● cuenta colonias o rotulador permanente,
● tubo de ensayo, papel de aluminio tapón / algodón graso,
● placa Rodac
● hisopo,
● luminómetro y laminocultivos.

3. REACTIVOS
1. Medio de cultivo PCA y RVBG,
2. agua desionizada y peptonada
3. reactivo del luminómetro.

4. CÁLCULOS PREVIOS
1. Medio de cultivo PCA

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El cálculo realizado es el necesario para obtener suficiente medio de cultivo PCA para las placas de petri
necesarias (prácticas 4-6)
● Práctica 1: 1 placa/persona (20 ml)
● Práctica 2: 1 placa/persona (20 ml)
● Práctica 3: 1 placa de Petri + 1 placa Rodac (35 ml)
Al haber realizado el PCA para toda la mesa hemos preparado una disolución de 400ml. El fabricante
indica diluir 17,5 g del PCA en polvo sobre un litro de agua por lo que los calculos serian: 17,5 * 0,4 = 7 g

2. Medio de cultivo VRBG

El cálculo realizado es el necesario para obtener suficiente RVBG para la placa de Petri y la Rodac.
Al haber realizado el RVBG para toda la mesa hemos preparado una disolución de 120ml. El fabricante
indica diluir 38.5 g de RVBG en polvo sobre un litro de agua por lo que los calculos serian: 38.5 * 0,12 =
4.62 g

5. METODOLOGÍA
● Preparación del medio de cultivo PCA
Se realizarán los cálculos necesarios, se pesaran los 7 g, calentamos una parte de los 400ml para poder
diluir mejor el medio, mezclamos toda el agua con el medio y llevamos a ebullición. Daremos un ciclo de
autoclave (121ºC - 15 min), dejaremos enfriar (45-ºC) vertemos en la placa de petri (rotulada) y dejamos
que se gelifique.

● Preparación del medio de cultivo RVBG

Se realizarán los cálculos necesarios, se pesaran los 4,62 g, calentamos una parte de los 120ml para poder
diluir mejor el medio, mezclamos toda el agua con el medio y llevamos a ebullición. Este medio no
necesita ser autoclavado aunque debe usarse en el día por lo que lo vertemos en la placa de Rodac y en la
de petri para realizar la siembra en masa.

1. Placa de Rodac
El medio de cultivo se vierte en las placas Rodac de forma que sobresalga del borde para facilitar el
contacto con la superficie. Llenaremos una placa con PCA y otra con RVBG (grupo). Una vez gelificado,
voltearemos las placas y las colocaremos en las superficies a estudiar presionando ligeramente durante
unos segundos (Superficie del inodoro). Incubación: Se tapan las placas, invertidas se colocan en las
estufas de incubación correspondientes: PCA: 30ºC 72h y VRBG 37º 24h

2. Hisopo
Se prepara un tubo de ensayo esteril con 10ml de agua peptonada. Humedecemos el hisopo en el tubo y
restregamos en la superficie a estudiar (pomo de la puerta del baño), posteriormente colocamos el hisopo

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en el tubo durante 15 min. En función de la carga microbiana sembraremos 0.1 o 1 ml (en nuestro caso 1
ml en masa). Añadimos 1 ml de la dilución en cada placa (PCA y VRBG). Incubación: Se tapan las placas,
invertidas se colocan en las estufas de incubación correspondientes: PCA: 30ºC 72h y VRBG 37º 24h

3. Luminómetro
1. Se deja atemperar el hisopo a la tª ambiente (21-25ºC).
2. Se humedece el hisopo en agua peptonada esteril para recolectar más MO.
3. Se frota el hisopo con la superficie a estudiar con planilla o sin. (Sobre el movil de Ivan).
4. Se coloca otra vez el hisopo en el tubo. Se rompe la válvula para que caiga el reactivo
(Luciferasa/Luciferina).
5. Se agita el tubo 5-10s, para impregnar el hisopo.
6. Se coloca el tubo con el hisopo en el SystemSURE Plus, se cierra la tapa y presionamos “OK”, tras
presionar comienza una cuenta atrás de 15s, al finalizar dará los resultados.
7. Se interpretan los resultados: <10 URL Limpia, 11-29 URL Limpieza insuficiente y >30 URL sucia.
*URL: Unidad relativa de luz.

4. Laminocultivo
Se sacará el laminocultivo del tubo en el que se encuentra y se apoya aplicando presión en la superficie a
estudiar (bajo la segunda ventana del laboratorio) por ambos lados (PCA y RVBG) durante unos 10s, lo
volveremos a meter en el tubo y rotulamos la etiqueta. Incubación: Colocaremos el tubo de forma vertical
en la estufa de incubación entre 30-37ºC - 18-48h

6. RESULTADOS
1. Rodac. En la placa rodac VRBG no han aparecido MO (Inodoro) y en la de PCA no se aprecian MO de
forma exacta (balanza). 0 UFC en ambos casos (aparentemente).

2. Hisopo. En la placa de VRBG no han aparecido MO y en la de PCA solamente 6 UFC (Pomo de la

puerta del baño).

3. Luminómetro. Tras realizar todo el proceso hemos obtenido un resultado de 18 URL lo que nos indica
que la superficie (pantalla del móvil de Ivan) está sucia.

4. Laminocultivo. En la parte del medio VRBG no ha aparecido MO y en la de PCA es similar a la placa de

Rodac en la que aparentemente no hay MO. 0 UFC en ambos casos (aparentemente).

7. GESTIÓN DE RESIDUOS
El restos de materiales de vidrio usados se lavará con agua y jabón, aclarando con agua desionizada, dejando secar
al aire o en estufa de desecación.

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El hisopo se podrá autoclavar y reutilizar, el agua peptonada la diluimos y la gestionaremos como residuo
urbano.
El posible residuo de medio de cultivo se autoclavara y se gestionará como residuo urbano.

8. OBSERVACIONES
1. El medio de cultivo PCA se prepara de forma similar al agar sólido usado en otras prácticas.
2. El medio VRBG (agar rojo neutro-cristal violeta-bilis glucosa) se prepara en el día y no se
autoclave.
3. RODAC: acrónimo en inglés de replicación de MO por contacto directo en agar. Diseñadas
específicamente para el control de superficies.
4. El método del hisopo es más antiguo y permite analizar superficies irregulares o muy
contaminadas ya que permite hacer diluciones seriadas.
5. Si una superficie tiene menos de 10 UFC/cm2 se considera limpia, entre 10-100 mejorable y por
encima de 100 se considera sucio.
6. Los laminocultivos son medios ya preparados que tienen un procedimiento de aplicación muy
sencillo, la contra que tienen es su precio.
7. Al haber llenado demasiado las placas de petri, ha faltado PCA por lo que en próximas ocasiones
los cálculos previos se realizarán suponiendo 25ml/placa.
8. Los hisopos de los laminocultivos deben conservarse entre 2-8ºC. Pueden aguantar a tª ambiente
(>25ºC) 4 semanas. Deben protegerse de la luz solar. Tienen un periodo de conservación de 15
meses.

9. IMÁGENES