Práctica 9.

Identificación de Enterobacterias

Objetivos de aprendizaje
1. Aplicar pruebas bioquímicas tradicionales para la identificación de Géneros y especies de
Enterobacteriaceae.
2. Caracterizar e identificar una cepa problema mediante técnicas tradicionales de cultivo en
medios selectivos diferenciales y pruebas bioquímicas.

Introducción

REALIZAR LA INTRODUCCIÓN CON LA TEMÁTICA SOBRE ENTEROBACTERIAS

AL MENOS DEBE TENER INFORMACIÓN DE 5 REFERENCIAS Y 5 PAGINAS
MÍNIMO (CITAR LA BIBLIOGRAFÍA ENTRE PARRÁFOS)

Materiales

Cultivos
Cepa asignada

Medios de cultivo
Cajas Petri con Agar Eosina Azul de Metileno (EMB)
Cajas Petri con Agar Mac Conkey (MC)
Cajas Petri con Agar Salmonella-Shigella (SS)
Tubos con 1 mL de caldo MR-VP
Tubos con 3 mL de agar citrato de Simmons inclinado
Tubos con 3 mL de agar fenilalanina inclinado (FAD)
Tubos con 3 mL de agar movilidad indol ornitina (MIO)
Tubos con 3 mL de agar sulfuro indol movilidad (SIM)
Tubos con 3 mL de caldo malonato
Tubos con 3 mL de caldo urea
Tubos con 3.5 mL de agar hierro triple azúcar (TSI)
Tubos con 3.5 mL de agar lisina hierro (LIA)

Reactivos
α – Naftol Cloruro Férrico
KOH al 40%
Peróxido de hidrógeno
Reactivo de Kovac
Reactivo de oxidasa
Rojo de metilo
Tiras reactivas para prueba de oxidasa

Equipo
Incubadora a 35 ± 2ºC
Vortex
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Otros materiales
Asa de inoculación redonda
Asa de inoculación recta
Gradilla
Mechero Bunsen
Palillos de madera

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Actividades previas al ingreso al laboratorio

1. Completar la siguiente tabla, incluir en la columna correspondiente cual es el fundamento de la prueba, es decir cuáles son las bases bioquímicas
en que se fundamenta la prueba y que permite evidenciar el metabolismo de los microorganismos. En resultado incluir cuando se considera una
prueba positiva (+) y negativa (-) describiendo los cambios que se observan después del desarrollo de los microorganismos, con o sin la adición de
reactivos, según sea el caso.

Forma de inoculación
Medio de Prueba Reactivos/ Resultado (+ y - )
Fundamento de la prueba (Temperatura/tiempo
cultivo bioquímica cantidad
incubación)

Positivo:
Rojo de Metilo
(producción de
Negativo:
ácidos mixtos)

Caldo MR-VP
Positivo:
Voges Proskauer
(producción de
acetilmetilcarbinol Negativo:
[acetoína])

Agar MIO Positivo:

Movilidad
Negativo:

Descarboxilación Positivo:
de la ornitina

Negativo:

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 Positivo:

Producción de
indol Negativo:

Positivo:
Desaminación de
Agar FAD
la fenilalanina
Negativo:

Utilización de Positivo:
Citrato como
Agar Citrato fuente de carbono
Negativo:

Utilización de la Positivo:
Urea como fuente
Caldo Urea de Nitrógeno
Negativo:

Agar SIM Positivo:

Movilidad
Negativo:

Producción de Positivo:
ácido sulfhídrico

Negativo:

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 Positivo:

Producción de
indol Negativo:

Positivo:
Utilización de
Caldo malonato malonato como
Negativo:
fuente de carbono

Agar TSI  Positivo:

Fermentación de
glucosa Negativo:

Positivo:
Fermentación de
lactosa y/o
Negativo:
sacarosa

Positivo:

Producción de
ácido sulfhídrico Negativo:

Producción de gas Positivo:

de glucosa

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 Negativo:

Positivo:
Decarboxilación de
la lisina
Negativo:

Positivo:

Producción de
Agar LIA ácido sulfhídrico Negativo:

Positivo:

Desaminación de
la lisina Negativo:

NA=No aplica

Buscar en internet una foto de este medio SIN INOCULAR y colocarlos en cada círculo

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Agar Mac Conkey Agar EMB Agar Salmonella-Shigella

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 Procedimiento

1. Proceder a la inoculación de la cepa problema mediante siembra por estría para aislar en los
agares Mac Conker, EMB y Salmonella-Shigella, incubar a 35 ± 2ºC por 24 h.
2. Revisar el crecimiento en las placas de agar Mac Conker, EMB y Salmonella-Shigella,
seleccionar colonias y describir su morfología, realizar una tinción al Gram, pruebas de
oxidas y catalasa, registrar resultados en la Tabla X
3. Inocular pruebas bioquímicas e incubar a 35 ± 2ºC, de 24 a 48 h según prueba.
4. Registrar resultados de pruebas bioquímicas e identificar el Género y especie.

Cepa problema
Tinción al Gram

Oxidasa y Catalasa

Agar Mac Conkey Agar EMB Agar Salmonella-Shigella

Estría Picadura y estría Asada (caldos) Picadura

Urea SIM
Citrato de LIA
Simmons

FAD Malonato MIO

TSIA

RM

VP

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 RESULTADOS

ESTOS RESULTADOS SE LOS ENVIARÉ A UN MIEMBRO DE SU EQUIPO

PARA QUE SUSTITUYAN ESTO POR LO QUE LES ENVIARÉ
1. Complete las siguientes tablas, Incluya un dibujo o fotografía de los resultados según
corresponda.

2. Complete la siguiente tabla con los resultados de pruebas bioquímicas de la cepa o colonia
(s), anotar en cada prueba si fue positiva (+) o negativa (-)
TSI LIA MIO SIM
Rojo de metilo

Malonato
Proskauer

Observaciones
Citrato de
Simmons
Catalasa

Oxidasa

Voges-

Lactosa y/o

FAD
Cepa o colonia

Urea
sacarosa

Ornitina
glucosa

Movilidad

Movilidad
(si las hay)
H2S

H2S

H2S
Indol

Indol
LDC
LDA
Gas

LDC= Lisina decarboxilasa

LDA= Lisina desaminasa

3. Con la información antes reportada consulte esquemas de identificación bacteriana e

identifique el Género y especie de la cepa asignada.

Nombre del Género y especie identificado: ______________________

4. Realizar una breve descripción del género y especie del microorganismo

identificado (al menos una cuartilla).

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