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Practica No.

Pruebas Bioquímicas

Cuestionario Previo

1. ¿Qué son las enzimas?


Son sustancias de naturaleza proteica

2. Define los siguientes términos:


✔ Enzima: Catalizadores de reacciones químicas que actúan sobre unas moléculas
denominadas sustratos, las cuales se convierten en diferentes moléculas, los productos.

✔ Sustrato: Es una especie química que se considera, de forma explícita, objeto de la acción de
otros reactivos, como las enzimas.

✔ Sitio activo: La reacción específica que una enzima controla depende de un área de su
estructura terciaria.

✔ Exoenzima: Son enzimas que son excretadas por las células microbianas al medio que las
rodea.

✔ Endoenzima: Son enzimas que se encuentran en el interior de la célula microbiana

3. ¿Cuáles son y cómo afectan los factores físicos y químicos en la activación


enzimática?
✔ El pH: Influye sobre las cargas eléctricas y puede alterar la estructura del centro
activo y, por lo tanto, también influirá sobre la actividad enzimática.

✔ La temperatura: Al aumentar la temperatura se desnaturaliza las moléculas proteicas por lo


que los sitios activos se ven modificados.

✔ Concentración del sustrato: La enzima se satura a cierta concentración.

4. Explique el fundamento de las siguientes pruebas bioquímicas:


Prueba Medio de Propósito Inoculación e Tratamiento Resultados
cultivo incubación post- Positivo Negativo
incubacion

Caldo lactosa CLPBC Fermentación Sembrar por Ninguno Ácido: Base:


de lactosa asada Amarillo Azul o
Indicador: Incubar: 24-48 guinda
Purpura de hrs/37ºC
bromocresol

Hidrólisis de Agar Producción de Sembrar por 2 a 3 gotas de Área blanca Color negro
Almidón almidón la exoenzima: estría Iodo que alrededor alrededor
α-amilasa recta cubran todo el del cultivo del cultivo
Revelador: Incubar: 24-48 medio de
lugol hrs/37ºC cultivo

Degradación Caldo Producción de Sembrar por Ninguno Base: Ácido:


de urea Urea la enzima: asada Rosa amarillo
Indicador: Ureasa Incubar: 24-48 intenso/
Rojo de fenol hrs/37ºC rojo

Rojo de metilo Caldo Rojo de Sembrar por A las 48 hrs. RM: Rojo RM:
Voges RM-VP Metilo: asada se divide el Presencia Amarillo el
Proskauer Determinar la Incubar: 37ºC cultivo en dos de acido ácido fue
habilidad de RM: 7días (pH 4) transforma
Indicador: las bacterias VP: 48 hrs. RM: Dejar en do a
Rojo de metilo para producir la incubadora VP: Rosa sustancias
y mantener por 7 días, intenso/ no
sustancias luego añadir 5 rojo acídicas.
ácidas gotas de rojo
(formación de de metilo VP:
ácidos Amarillo/
mixtos) VP: Se añaden marrón
10 gotas de α- claro
Voges- naftol y 5
Proskauer: gotas de KOH
Determinar la 40%. Esperar
capacidad de 30 min
transformar
sustancias
acídicas a no
acídicas
(formación de
acetoina)
Tubo
Oxidación Medio Exponer las Sembrar dos Después de c/parafina: Tubo
fermentación Hugh & vías óxidativa tubos por inocular verde c/parafina:
Leifson y/o picadura agregar Tubo verde
Indicador: fermentativa Incubar: 24-48 parafina a uno s/nada:
azul de a partir de hrs/37ºC de los tubos Amarillo Tubo
bromotimol carbohidratos OXIDACIÓN s/nada:
y teniendo Tubo verde
ácido pirúvico c/parafina:
como amarillo
producto Tubo
s/nada:
amarillo
FERMENTACIÓ
N

Fermentación Kligler Determinar si Sembrar por Ninguno


de Glucosa y el picadura y
lactosa microorganis estría ondulada
mo es capaz Incubar: 24-48
Indicador: de fermentar hrs/37ºC
rojo de fenol la glucosa y
lactosa,
producción de
gas y de H2S.

La coagulasa
Prueba de Medio es un enzima Sembrar por Ninguno Formación Medio
coagulasa CCC con capaz de asada de un liquido sin
plasma desnaturalizar Incubar: 24-48 coagulo o presencia
Indicador: la bibrina del hrs/37ºC medio de
Ninguno plasma. semisólido coágulos
Se busca el
factor de
aglutinación de
los moos
cuando estos
se mezclan con
el plasma.

Fermentación CMRF Evidenciar la Sembrar por Ninguno Ácido: Base:


de manitol c/tubo presencia de asada Amarillo Rosa
Durham la enzima Incubar: 24-48 intenso
Indicador: manitolasa hrs/37ºC
rojo de fenol

Catalasa Agar Determinar la Sembrar por 2 ó 3 gotas de Efervescenc Se queda


nutritivo presencia de estría recta H2O2 sobre el ia igual
Indicador: la enzima Incubar: 24-48 crecimiento
H2O2 catalasa hrs/37ºC

Oxidasa Agar Determinar si Sembrar por Tomar una Azul/purpur Se queda


nutritivo la presencia estría recta asada sobre a (el cambio igual
Indicador: de la enzima Incubar: 24-48 un papel filtro es notable
Reactivo de oxidasa hrs/37ºC y agregar una en menos
oxidasa gota de de 15
reactivo segundos)
oxidasa

Caseínasa Agar leche Determinar si Sembrar por Ninguno Halo


descrema el estría recta alrededor Se queda
Indicador: da microorganis Incubar: 24-48 de la igual
Ninguno mo es capaz hrs/37ºC siembra
de degradar
la caseína

Utilización del Citrato de Determinar si Sembrar por Ninguno Ácido: Base:


citrato Simmons el asada Color Color azul/
microorganis Incubar: 18-24 amarillo verde
Indicador: mo utiliza el hrs/37ºC
azul de citrato como
bromotimol única fuente
de carbono

Descarboxilaci Agar de Diferenciar Sembrar por Ninguno


ón de lisina Hierro y los moos. que picadura y
lisina producen estría ondulada
Indicador: (LIA) descarboxilaci Incubar: 18-24
púrpura de ón de la lisina hrs/37ºC
bromocresol
Descarboxilaci MIO Determinar si Sembrar por Agregar 4 Base: Ácido:
ón de ornitina el moo. tiene picadura gotas de Morado Amarillo
Indicador: la enzima Incubar: 48 reactivo de intenso
Purpura de ornitina hrs/37ºC Ehrlich o
bromocresol descarboxilas Kovacs
a

Desaminación Agar Determinar la Sembrar por Agregar 4 Color verde Color


de la fenilalanin presencia de estría ondulada gotas de FeCl3 intenso marrón
fenilalanina a la enzima sobre pico de 10%
fenilalanina flauta
Indicador: desaminasa Incubar: 18-24
FeCl3 hrs/37ºC

Sacarosa CSPB Determinar la Sembrar por Ninguno Ácido: Base:


presencia de asada Incubar: Amarillo Morado
Indicador: la enzima 18-24 hrs/37ºC intenso
Ninguno invertasa

DNAsa Agar Determinar la Sembrar por 4 gotas de Halo Sin halo


DNAsa capacidad de estría recta HCL alrededor
Indicador: un moo. de Incubar: 24- de la
HCl producir la 248hrs/37ºC siembra
enzima
desoxirribo-
nucleasa
(DNAsa)

Proteínas, SIM 4 gotas de 1.Rojo en 1. Amarillo


aminoácidos y reactivo de presencia (el micro-
enzimas Kovac o Erlich de indol ( el organismo
triptófano no puede
Indicador: fue degradar el
degradado) triptófano)

2. 2. El medio
Precipitado se queda
negro igual
presencia
de H2S 3. El micro-
organismo
3. solo crece
Difuminació en la línea
n del de
crecimiento iniculación
del micro- (no es
organismo móvil)
hacia los
lados
(movilidad)

5. Busca una tabla de indicadores ácido-base

Indicador Color ácido Ph viraje Color básico

Amarillo de alizarina gg Amarillo claro 10,0 - 12,1 Rojo castaño

Azul de bromofenol Amarillo 3,0 - 4,6 Violeta

Azul de bromotimol Amarillo 6,0 - 7,6 Azul

Fenolftaleína Incoloro 8,2 - 9,8 Violeta / rosa

M-cresolpúrpura Amarillo 7,4 - 9,0 Púrpura

Naranja de metilo Rojo 3,1 - 4,4 Amarillo


naranja

Púrpura de bromocresol Amarillo 5,2 - 6,8 Púrpura

Rojo congo Azul violeta 3,0 - 5,2 Rojo naranja

Rojo de bromofenol Naranja 5,2 - 6,8 Púrpura


amarillo

Rojo de cresol Amarillo 7,0 - 8,8 Púrpura

Rojo de fenol Amarillo 6,4 - 8,2 Rojo

Rojo de metilo Rojo 4,4 - 6,2 Amarillo


naranja

Rojo neutro Azul rojizo 6,4 - 8,0 Naranja


amarillo

Timolftaleína Incoloro 8,6 - 10,0 Azul

Tornasol Rojo 5,0 - 8,0 Azul

Violeta de metilo Amarillo 0,1 - 1,6 Azul / violeta

4-dimetilaminobenzol Rojo 2,9 - 4,0 Amarillo


naranja

(F) esculina Índigo débil 1,0 - 1,5 Azul intenso


(F) beta-naftilamina Incoloro 2,8 - 4,4 Violeta

(F) alfa-naftilamina Incoloro 3,4 - 4,8 Azul

(F) fluoresceína Azulado 3,8 - 4,3 Azul intenso

(F) eosina Incoloro 3,9 - 4,5 Amarillo


naranja

(F) eritrosina Incoloro 3,7 - 4,6 Amarillo


verdoso

(F) acridina Verde 5,3 - 6,4 Violeta

(F) umbeliferona Incoloro 6,2 - 8,3 Azul intenso

(F) cumarina Incoloro 9,2 - 10,5 Verde amarillo

(F) beta-metil umbeliferona Índigo débil 6,9 - 7,1 Azul intenso

6. Busca tablas de identificación de microorganismos en base a pruebas bioquímicas

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