La cámara de Neubauer es un dispositivo de precisión hecho de vidrio óptico

especial para contar células u otras partículas en suspensiones bajo el

microscopio como leucocitos, eritrocitos, trombocitos, además de bacterias,
espermatozoides y esporas de hongo.
Dividido en tres secciones con un rayado fino formando una cuadrícula de 3 mm x
3 mm. Cada sección está a exactamente 0.1 mm abajo. Al observar al microscopio
la sección central podremos identificar un cuadrado de tres por tres, que en
conjunto mide 9 mm2. En esta cuadrícula podemos localizar cuatro cuadrantes
que están en los extremos, divididos a su vez en un conjunto de 4 x 4. En la parte
central se puede apreciar un cuadro central de 1x1 mm dividido en 25 cuadrantes
de 0.2x0.2 mm. El cuadro central vemos que cada cuadro de esos cinco limitados
por una triple línea, están constituidos a su vez por un conjunto de 4 x 4.
El cuadrante a utilizar dependerá de la cantidad y tipo de célula a contar:
cuadrantes de los extremos para glóbulos blancos y cuadrante central para
glóbulos rojos, plaquetas y espermatozoides.
Las pipetas de Thoma son pipetas constituidas por una porción recta y puntiaguda
seguida por una cámara o ampolleta de mezclado y una boquilla donde se aprecia
una marca numérica que nos indica el número de volúmenes totales. Para calcular
el factor de dilución basta con utilizar el número de volúmenes de la sección B
(100 o 10) y dividirla entre el volumen utilizado de muestra. Debido al tamaño
pequeño de la pipeta de Thoma, se hace necesario el uso de algunos accesorios
como una manguera y una boquilla, ambos nos ayudan a succionar y controlar la
entrada y salida de aire con la boca.
Llenado de la Pipeta de Thoma
Tomar la pipeta de Thoma con la boquilla e introducirla en la muestra. Sujetando
con los dientes y labios la boquilla, succionamos lentamente hasta la marca 0.5 de
la pipeta. Sacamos la pipeta de la muestra y limpiamos la parte externa de la
pipeta. Introducimos la punta de la pipeta en el diluyente adecuado y aspiramos
hasta la marca superior. Finalmente mezclamos con movimientos circulares y en
posición horizontal por 10 minutos.
Llenado de la Cámara de Neubauer
Los soportes exteriores se humedecen con agua destilada, se coloca el
cubreobjeto en el borde de la cámara sobre los soportes y se desliza hacia el otro
extremo. La creación de anillos de Newton entre los soportes exteriores y el
cubreobjeto indica que colocado correctamente. Desechar las primeras cuatro
gotas de la pipeta, la colocamos en el borde del cubreobjetos y la cámara.
Dejamos que fluya la muestra gota a gota distribuyéndose uniformemente sin
derramarse a los lados. Retiramos la pipeta, colocándola de manera horizontal
donde no se ruede y se rompa, no lavarla hasta haber terminado el recuento.
Recuento celular
Para el recuento debemos localizar los cuadros correspondientes según las
células, nos posicionamos en el primer cuadro superior izquierdo del cuadrante,
iniciamos el conteo de izquierda a derecha y de arriba abajo (como s o serpiente).
Las células a contar serán las que se encuentran en el interior del conjunto de
cuadros rodeadas por la línea gruesa o tres líneas, además de las que se
encuentren sobre las líneas gruesas en el límite superior e izquierdo, se descartan
las de los límites inferior y derecho.
Una vez contabilizado aplicar la siguiente fórmula para calcular la concentración
de células por milímetro cúbico (mm3):

Donde:
#c = Número de células contadas en los cuadrantes.
FD = Factor de dilución
Cc = Número de cuadrantes contados.
A2 = Área del cuadrante
P = Profundidad