Técnica Histológica

1.- Toma de muestras

Técnica 2.- Fijación

Histológica 3.- Inclusión

4.- Corte al microtomo

5.- Tinción

1.- Toma de muestras

Procedencia:
Animal vivo: biopsias
Piezas de matadero
Necropsias

Examen macroscópico

Estructura del órgano

Existencia de alteraciones (lesiones)

2.- Fijación Autolisis

Fin: Evitar
- Autolisis
- Putrefacción

Precauciones: Rapidez
Tamaño muestra
Volumen muestra/fijador
Envase

Tipos de fijadores

1
 Autolisis Putrefacción

Autolisis Normal

Relación volumen
muestra/fijador

1/20

2.- Fijación
Fin:
Precauciones:
Tipos de fijadores:
- PUROS: formol al 10% tamponado (sales)
(formalina: formaldehído 45%)
formación de nuevas uniones entre
proteínas y ácidos nucleicos
alcoholes
desnaturalización de proteínas

- MEZCLAS fijadoras:
líquido de Bouin
Pigmento formol (hematina)

2
 Descalcificación: ácido nítrico
3.- Inclusión

Objetivo: Impregnar el tejido con una

sustancia que le confiera la dureza
adecuada para poder cortarlo en finas
láminas.

PARAFINA

3.- Inclusión
Objetivo: Impregnar el tejido con una sustancia que le
confiera la dureza adecuada para poder cortarlo en finas láminas.

PARAFINA

Etapas:
Tallado
Inclusión en parafina
Preparación de bloques

Procesador de tejidos
Inclusión en parafina

Agua Alcohol Alcohol Alcohol

50º 60º 80º
INCLUSIÓN DESHIDRATACIÓN
EN PARAFINA
ACLARAMIENTO Alcohol
96º

Xilol Alcohol Alcohol

Parafina
100º / Xilol
60º 100º

3
 4.- Corte al microtomo
MICROTOMO

Secciones 3-5 μ

CRIOSTATO
(cortes por congelación)

Secciones 6 μ
Portaobjetos
(albúmina, poli-L-lisina)

Baño de agua a 37ºC

4
 5.- Tinción
Objetivo:
Proporcionar color a los tejidos, normalmente
incoloros.

COLORANTES: Acuosos

5.- Tinción
DESPARAFINAR (Xilol) 20 min
COLORANTES:

HIDRATAR (Alcohol 100º) 10 min -Básicos: HEMATOXILINA (Núcleo Azul)

-Ácidos: EOSINA (Citoplasma Rosa)

(Alcohol 96º) 5 min

TINCIÓN DE HEMATOXILINA-EOSINA
(Alcohol 60º) 5 min

(Agua) 5 min

5
 5.- Tinción

COLORANTES:

-Básicos: HEMATOXILINA (Núcleo Azul)

-Ácidos: EOSINA (Citoplasma Rosa)

-NEUTROS: AZUL DE METILENO

-METACROMÁTICO: AZUL DE TOLUIDINA

5.- Tinción Mastocitos

COLORANTES:

-Básicos: HEMATOXILINA (Núcleo Azul)

-Ácidos: EOSINA (Citoplasma Rosa)

-NEUTROS: AZUL DE METILENO

-METACROMÁTICO: AZUL DE TOLUIDINA

5.- Tinción Van Gieson

Métodos de tinción:
CONVENCIONALES:
H-E
TRICRÓMICOS: Van Gieson, Masson,
Gallego.
TÉCNICAS DE PLATA
GIEMSA: Extensiones de sangre, citologías
PAPANICOLAU: Citologías

HISTOQUÍMICOS:
Sudán III Lípidos
Carmín de Best, PAS Glucógeno
Azul de Prusia Hierro
Von Kossa Calcio
Orceína Fibras elásticas
INMUNOHISTOQUÍMICOS

6
Gomori (Plata): fibras reticulina Giemsa

5.- Tinción Sudán III: Lípidos

Métodos de tinción:

CONVENCIONALES:

HISTOQUÍMICOS: detección de sustancias específicas

mediante reacciones químicas

Sudán III Lípidos

Carmín de Best, PAS Glucógeno
Azul de Prusia Hierro
Von Kossa Calcio
Orceína Fibras elásticas

INMUNOHISTOQUÍMICOS

PAS. Glucógeno Azul de Prusia: Hierro

7
 Orceína: fibras elásticas
Von Kossa: Calcio

5.- Tinción Métodos inmunohistoquímicos

Métodos de tinción:

CONVENCIONALES: CROMÓGENO

HISTOQUÍMICOS:
Sudán III Lípidos
Carmín de Best, PAS Glucógeno Ac secundario (frente a la
especie del primario)
Azul de Prusia Hierro
Von Kossa Calcio
Orceína Fibras elásticas Ac primario ESPECÍFICO
SUSTANCIA A DETECTAR
INMUNOHISTOQUÍMICOS TEJIDO
Detección de antígenos (biomoléculas) en células/tejidos
mediante anticuerpos marcados “in situ”.

Proteína glial fibrilar ácida (GFAP): Citoqueratina: cc epiteliales. Fluorescencia

molécula específica de astrocitos

8
 LAVADO: Agua

DESHIDRATAR: Alcohol 96º

DESHIDRATAR: Alcohol 100º

ACLARAR: Xilol

Cubreobjetos
MEDIO DE MONTAJE
DPX
(Bálsamo de Canadá)

MONTAJE

Microscopía electrónica Interpretación de cortes histológicos

-Tallado en fragmentos muy pequeños.

-Fijación con glutaraldehído.
-Refijación con tetróxido de osmio.
-Deshidratación con acetato de uranilo.
-Inclusión en resinas.
-Corte con ultramicrotomo.
-Contraste con citrato de plomo.

Interpretación de cortes histológicos Interpretación de cortes histológicos