INSTITUTO POLITÉNICO NACIONAL

Escuela Nacional de Medicina y Homeopatía

INFECTOLOGÍA
Nicole Vela Ortega
8PM9

1. Composición de la pared de bacterias y hongos

2. Tinción Ziehl Neelsen
3. Tinción de gram

1.
PARED DE BACTERIAS
Las células bacterianas carecen de un núcleo unido a la membrana.
Su material genético está desnudo dentro del citoplasma. Los
ribosomas son su único tipo de orgánulo. El término “nucleoide” se
refiere a la región del citoplasma donde se localiza el ADN
cromosómico, generalmente un cromosoma circular singular. Las
bacterias suelen ser unicelulares, excepto cuando existen en
colonias. Estas células ancestrales se reproducen por medio de fisión
binaria, duplicando su material genético y luego esencialmente
dividiéndose para formar dos células hijas idénticas al progenitor. Una
pared ubicada fuera de la membrana celular proporciona el soporte celular y protección
contra tensiones mecánicas o daños por ruptura osmótica y lisis.

El componente principal de la pared celular bacteriana es peptidoglicano o mureína.

Esta estructura rígida de peptidoglicano, específica solo de procariotas, le da forma a la
célula y rodea la membrana citoplásmica.

El peptidoglicano es un enorme polímero de disacáridos (glicanos) reticulados por cadenas

cortas de monómeros de aminoácidos idénticos (péptidos). El esqueleto de la molécula de
peptidoglicano está compuesto por dos derivados de la glucosa: N-acetilglucosamina
(NAG) y ácido N-acetilmurámico (NAM) con un pentapéptido que sale del NAM y varía
ligeramente entre las bacterias. Las cadenas NAG y NAM se sintetizan en el citosol de la
bacteria. Están conectados por puentes interpeptídicos. Son transportados a través de la
membrana citoplasmática por una molécula portadora llamada bactoprenol. Desde el
peptidoglicano hacia el interior todas las células bacterianas son muy similares. Al ir más
allá, el mundo bacteriano se divide en dos clases principales: Gram positivo (Gram +) y
Gram negativo (Gram -).
La pared celular proporciona ligandos importantes para la adherencia y sitios receptores
para virus o antibióticos.
PARED DE HONGOS
La pared celular de los hongos es una
estructura con gran plasticidad que protege a la
célula de diferentes tipos de estrés ambiental,
entre los que destacan los cambios osmóticos.
Además, la pared celular permite la interacción
con el medio externo ya que algunas de sus
proteínas son adhesinas y receptores.
Algunos de sus componentes tienen una alta
capacidad inmunogénica. La pared celular es
una estructura característica de los hongos
y está compuesta por glucanos, quitina y
glicoproteínas.

La pared fúngica está compuesta básicamente

de polisacáridos y proteínas. Entre los polisacáridos destacan la quitina, el glucano y el
manano o el galactomanano. Las proteínas generalmente están asociadas a polisacáridos
formando glicoproteínas.

Los componentes de la pared celular son sintetizados en la membrana plasmática por

enzimas

La parte interna de la pared celular

presenta una armazón de glucanos y
quitosanos, polisacáridos
estructurales que forman como una
cesta alrededor de la célula del
hongo.

La parte superficial de la pared

celular fúngica varía mucho más entre
las especies debido a las
glicoproteínas. La quitina es un
polímero lineal del azúcar
N-acetil-glucosamina.

2.
TINCIÓN DE ZIEHL- NEELSEN
La prueba de tinción de Ziehl-Neelsen (BAAR) es una técnica de laboratorio que consiste
en teñir a los bacilos ácido-resistentes como el mycobacterium tuberculosis, de forma
que se puedan detectar al observar a través del microscopio.

Los bacilos ácido alcohol resistentes se denominan así porque están rodeados de una
envoltura aérea que es resistente a la tinción. Para esto se utiliza la técnica de
Ziehl-Neelsen, útil para detectar bacilos ácido-resistentes como Mycobacterium tuberculosis
Las paredes celulares de ciertas bacterias contienen ácidos grasos (ácidos micólicos) de
cadena larga (50 a 90 átomos de carbono) que les confieren la propiedad de resistir la
decoloración con alcohol-ácido, después de la tinción con colorantes básicos. Por esto se
denominan ácido-alcohol resistentes. Las micobacterias como Mycobacterium tuberculosis y
M. marinum se caracterizan por sus propiedades de ácido-alcohol resistencia.

Microorganismos ácido-alcohol resistentes:

● Mycobacterium: fuertemente ácido-alcohol resistentes
● Nocardia y Actinomices: débilmente ácido-alcohol resistentes
● Parásitos coccídeos (Cryptosporidium) de muestras fecales

La tinción de Ziehl-Neelsen permite diferenciar a las bacterias en dos grupos:

aquellos que son capaces de resistir la decoloración con alcohol-ácido y aquellos
que no lo son. Es la técnica comúnmente usada en el diagnóstico rutinario de tuberculosis
(bacilos de color rojo fucsia).

La coloración clásica de Ziehl-Nielsen requiere calentamiento para que el colorante

atraviese la pared bacteriana que contiene ceras. Al suspender el calentamiento y
enfriar con agua, provoca una nueva solidificación de los ácidos grasos de modo que
el colorante ya no puede salir de las bacterias.
Por otro lado, el calentamiento aumenta la energía cinética de las moléculas del colorante lo
cual también facilita su entrada a las bacterias. Las bacterias que resisten la decoloración
son de color rojo y las que no, se ven de color azul ya que se utiliza azul de metileno como
tinción de contraste.

Técnica
Los reactivos necesarios para su realización son los siguientes: ácido periódico 58% carbol
fucsina de Ziehl culina (fucsina fenicada).
Preparar mezclando en orden:
➔ 0,5 g fucsina básica
➔ 50 cc agua destilada
➔ 5 cc etanol absoluto
➔ 28,5 g cristales de fenol derretidos
➔ Hematoxilina
➔ Alcohol ácido 1%:
➔ Alcohol de 35°
➔ Ácido clorhídrico

1. Tomar cantidad homogénea de la muestra y extenderla de un extremo a otro en el

portaobjetos
2. Cubrir el extendido con FUCSINA FILTRADA
3. Calentar hasta emisión de vapores 3 veces durante 5 min
4. Lavar con agua
5. Cubrir con solución decolorante (alcohol el ácido) durante 3 min
6. Lavar con agua
7. Cubrir con azul de metileno durante 1 minuto
8. Lavar con agua y secar al aire
9. Observación microscópica y lectura de extendidos
Mycobacterium leprae

3.
TINCIÓN DE GRAM
Es una prueba que detecta bacterias en el lugar donde se sospecha una infección,
como la garganta, los pulmones, los genitales o las lesiones en la piel. Las tinciones
de Gram también se pueden usar para detectar bacterias en ciertos fluidos corporales,
como la sangre o la orina.

Hay dos categorías principales de infecciones bacterianas, grampositivas y

gramnegativas. Las categorías se diagnostican según cómo reacciona la bacteria a la
tinción de Gram. La tinción de Gram es de color púrpura. Cuando la tinción se combina
con la bacteria en una muestra, las bacterias puede seguir de color púrpura o volverse
rosadas o rojas.
Si se mantienen púrpuras, son grampositivas.
Si se vuelven rosadas o rojas, son gram negativas.
Las dos categorías causan tipos diferentes de infecciones:

Las infecciones grampositivas incluyen: Staphylococcus aureus resistente a la meticilina

(SARM), las infecciones por estreptococos y el shock tóxico.
Las infecciones gram negativas incluyen: Salmonella, neumonía, infecciones del tracto
urinario y gonorrea.
Las bacterias gram positivas se clasifican
por el color que adquieren después de
aplicarles un proceso químico denominado
tinción de Gram. Las bacterias gram
positivas se tiñen de azul cuando se les
aplica dicha tinción. (Otras bacterias se
tiñen de rojo, son las gram negativas).

BACTERIAS GRAM POSITIVAS BACTERIAS GRAM NEGATIVAS

Capa gruesa de peptidoglicano y no Capa delgada de peptidoglicano y tienen

tienen una membrana lipídica externa una membrana lipídica externa

Apariencia púrpura distintiva cuando se Color rojizo pálido cuando se observan

observan al microscopio óptico después
de la tinción de Gram (esto se debe a la
retención de la tinción violeta cristal
púrpura en la capa gruesa de
peptidoglicano de la pared celular)
con un microscopio óptico después de la
tinción de Gram (esto se debe a que la
estructura de su pared celular no puede
retener la tinción de cristal violeta, por lo
que se colorea solo con la contratinción
de safranina)

Técnica:
1. Se fija muestra en portaobjetos mediante calentamiento o tratamiento con alcohol
2. Se expone a la muestra a violeta de cristal
3. Se añade yodo para formar el complejo con el colorante principal
4. Durante la decoloración con alcohol o acetona:
a. Queda retenido en las bacterias gram positivas
b. Se pierde en las gram negativas
 5. Los microorganismos Gram (-) retienen el colorante SAFRANINA (color rojo)

El grado en el que un microorganismo conserva el colorante depende de:

a) Del microorganismo
b) De las condiciones del cultivo
c) Habilidades tintoriales