Microscopios

Posted by Aldo Brunetti 03/04/2014

Última actualización06/12/2018

Los microscopios son instrumentos de óptica que nos permiten ver objetos pequeños o
detalles estructurales imposibles de distinguir a simple vista porque están por debajo del
límite de resolución del ojo humano.

Índice
Microscopio simple
Microscopio compuesto u óptico
Microscopio electrónico
Microscopio electrónico de barrido
El límite de resolución del ojo humano es alrededor de 100 a 200 µm y esto significa que el
ojo humano puede distinguir objetos cuyo tamaño no sea inferior a 100 o 200 µm. En la
mayoría de los casos la observación microscópica se realiza sobre células muertas que han
sido procesadas para poder eliminar el agua que contienen, pudiendo así preservar su
estructura lo mejor posible. En este modo se  obtiene una estructura lo suficientemente
delgada para que la luz o los electrones la atraviesen. Un ejemplo muy importante es la
diferencia de tamaño entre las células eucariotas y procariotas. En el primer caso este
tamaño oscila entre 10 y 30 µm de diámetro, mientras en el segundo caso los componentes
celulares son aun menores.

A día de hoy podemos distinguir diferentes tipos de microscopios:

 Microscopio Simple
 Microscopio Compuesto u óptico
 Microscopio Electrónico
 Microscopio electrónico de barrido

Microscopio simple
Llamado también lupa es un instrumento de amplificación de imágenes que consiste en la
utilización de una o más lentes convergentes en un solo sistema óptico. Dependiendo de la
curvatura de la superficie de la lente las lupas pueden ampliar las imágenes de los objetos
desde 5, 8, 10, 12, 20 y hasta 50 veces el tamaño del objeto. Las lupas se utilizan en la
observación o disección de piezas anatómicas pequeñas.

Microscopio compuesto u óptico

Es un instrumento que tiene más de una lente de objetivo.  Empleado para examinar objetos
transparentes, o laminas muy finas. Además se utiliza para poder ampliar o aumentar las
imágenes de objetos no visibles a simple vista. La descripción exhaustiva de este tipo de
microscopio se realizará en un artículo aparte.

Microscopio electrónico
El desarrollo de este microscopio es uno de los principales logros de la física aplicada en el
siglo XX y ha revolucionado nuestro conocimiento de la estructura biológica. Se basó en el
descubrimiento de que un campo electromagnético actúa sobre un haz de electrones de
manera análoga a la acción de una lente de cristal sobre un haz fotones. El mecanismo de
funcionamiento se ampliará del mismo modo que el microscopio anterior en un artículo
completo.

Microscopio electrónico de barrido

Este tipo de microscopio hace uso de un principio totalmente diferente para la formación de
la imagen respecto al funcionamiento del microscopio óptico y electrónico.

La amplificación de la imagen viene determinada por las señales eléctricas al irradiar la

superficie de la muestra con un haz muy estrecho de electrones. Esta irradiación hace que la
muestra desprenda electrones de baja energía que pueden ser recogidos sobre una placa
cargada positivamente (ánodo) generando de este modo una señal eléctrica que es
proporcional al número de electrones que inciden en el ánodo y la señal eléctrica viene
utilizada para formar una imagen. Mediante el uso de un generador de barrido se hace que
el haz de electrones atraviese la muestra siguiendo un rastreo de barrido. La profundidad
del foco varía desde varios milímetros y su gama de amplificación efectiva desde unos 20
X a más de 20 000 X. Esto nos da una imagen tridimensional y con muchos detalles de
organismos muy pequeños.

Tags: microscopios

Microscopio
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 Este artículo o sección tiene referencias, pero necesita más para complementar su
verificabilidad.
Este aviso fue puesto el 19 de abril de 2017.

Para otros usos de este término, véase Microscopio (desambiguación).

Cristales de nieve observados con un microscopio electrónico de barrido y coloreados

artificialmente.

El microscopio (del griego μικρός micrós, ‘pequeño’, y σκοπέω scopéo, ‘mirar’)1 es una
herramienta que permite observar objetos, que son demasiado pequeños para ser
observados a simple vista. El tipo más común y el primero que fue inventado es el
microscopio óptico. Se trata de un instrumento que contiene dos lentes que permiten
obtener una imagen aumentada del objeto y que funciona por refracción. La ciencia que
investiga los objetos pequeños utilizando este instrumento se llama microscopía.

Hay muchos tipos de microscopios, y pueden agruparse de diferentes maneras. Una de ellas
es describir el método que utiliza un instrumento para interactuar con una muestra y
producir imágenes, ya sea enviando un haz de luz o electrones a través de una muestra en
su trayectoria óptica, detectando las emisiones de fotones de una muestra, o escaneando a
través y a corta distancia de la superficie de una muestra utilizando una sonda. El
microscopio más común (y el primero que se inventó) es el microscopio óptico, que utiliza
lentes para refractar la luz visible que pasa a través de una muestra finamente seccionada
para producir una imagen observable. Otros tipos importantes de microscopios son el
microscopio de fluorescencia, el microscopio electrónico (tanto el microscopio electrónico
de transmisión como el de barrido) y varios tipos de microscopios de sonda de barrido.2
Microscopio compuesto fabricado hacia 1751 por Magny. Proviene del laboratorio del duque de
Chaulnes y pertenece al Museo de Artes y Oficios, París.

Índice
 1 Historia
o 1.1 El surgimiento de los microscopios ópticos modernos
o 1.2 Microscopios de fluorescencia
o 1.3 Microscopios de superresolución
o 1.4 Microscopios de rayos X
 2 Tipos de microscopios
 3 Véase también
 4 Referencias
 5 Referencias externas
 6 Enlaces externos

Historia
Aunque los objetos que se asemejan a las lentes se remontan a hace 4.000 años y hay
relatos griegos sobre las propiedades ópticas de las esferas llenas de agua (siglo V a.C.),
seguidos de muchos siglos de escritos sobre óptica, el primer uso conocido de los
microscopios simples (lupas) se remonta al uso generalizado de las lentes en las gafas en el
siglo XIII.345 Los primeros ejemplos conocidos de microscopios compuestos, que combinan
una lente objetiva cerca del espécimen con un lente ocular para ver una imagen real,
aparecieron en Europa alrededor de 1620.6 El inventor es desconocido, aunque se han
hecho muchas afirmaciones a lo largo de los años. Varias giran en torno a los centros de
fabricación de gafas en los Países Bajos, incluyendo afirmaciones de que fue inventado en
1590 por Zacharias Janssen (afirmación hecha por su hijo) o por el padre de Zacharias,
Hans Martens, o por ambos,78 afirma que fue inventado por su vecino y rival fabricante de
gafas, Hans Lippershey (que solicitó la primera patente de telescopio en 1608),9 y afirma
que fue inventado por el expatriado Cornelis Drebbel, de quien se sabe que tenía una
versión en Londres en 1619.1011 Galileo Galilei (también citado a veces como inventor del
microscopio compuesto) parece haber descubierto después de 1610 que podía enfocar de
cerca su telescopio para ver objetos pequeños y, tras ver un microscopio compuesto
construido por Drebbel expuesto en Roma en 1624, construyó su propia versión mejorada.12
1314
Giovanni Faber acuñó el nombre de microscopio para el microscopio compuesto que
Galileo presentó a la Accademia dei Lincei en 162515 (Galileo lo había llamado occhiolino,
'ojo pequeño').

El microscopio fue inventado por Zacharias Janssen en 1590.

El surgimiento de los microscopios ópticos modernos

Microscopio compuesto binocular Carl Zeiss, 1914

El primer relato detallado de la anatomía microscópica de los tejidos orgánicos basado en el
uso de un microscopio no apareció hasta 1644, en la obra de Giambattista Odierna
L'occhio della mosca, o El ojo de la mosca.16

El microscopio siguió siendo en gran medida una novedad hasta las décadas de 1660 y
1670, cuando los naturalistas de Italia, los Países Bajos e Inglaterra empezaron a utilizarlo
para estudiar la biología. El científico italiano Marcello Malpighi, llamado el padre de la
histología por algunos historiadores de la biología, comenzó su análisis de las estructuras
biológicas con los pulmones. La publicación en 1665 de la Micrographia de Robert Hooke
tuvo una gran repercusión, sobre todo por sus impresionantes ilustraciones. Una
contribución importante fue la de Antonie van Leeuwenhoek, que consiguió un aumento de
hasta 300 veces utilizando un sencillo microscopio de una sola lente. Colocó una lente
esférica de vidrio muy pequeña entre los orificios de dos placas metálicas remachadas entre
sí, y con una aguja ajustable mediante tornillos para montar el espécimen.17 A continuación,
Van Leeuwenhoek redescubrió los glóbulos rojos (después de Jan Swammerdam) y los
espermatozoides, y contribuyó a popularizar el uso de los microscopios para ver la
ultraestructura biológica. El 9 de octubre de 1676, Van Leeuwenhoek comunicó el
descubrimiento de los microorganismos.18

En 1665 aparece en la obra de William Harvey sobre la circulación sanguínea al mirar al

microscopio los capilares sanguíneos, y Robert Hooke publicó su obra Micrographia.

En 1665 Robert Hooke observó con un lente un delgado corte de corcho y notó que el
material era poroso; contenía cavidades poco profundas a modo de celditas a las que llamó
células. Se trataba de la primera observación de células muertas. Unos años más tarde,
Marcello Malpighi, anatomista y biólogo italiano, observó células vivas. Fue el primero en
estudiar tejidos vivos al microscopio.

A mediados del siglo XVII el neerlandés Anton van Leeuwenhoek, utilizando microscopios

simples de fabricación propia, describió por primera vez protozoos, bacterias,
espermatozoides y glóbulos rojos. El microscopista Leeuwenhoek, sin ninguna preparación
científica, puede considerarse el fundador de la bacteriología. Tallaba él mismo sus lupas,
sobre pequeñas esferas de cristal, cuyos diámetros no alcanzaban el milímetro (su campo de
visión era muy limitado, de décimas de milímetro). Con estas pequeñas distancias focales
alcanzaba los 275 aumentos. Observó los glóbulos de la sangre, las bacterias y los
protozoos; examinó por primera vez los glóbulos rojos y descubrió que el semen contiene
espermatozoides. Durante su vida no reveló sus métodos secretos, y a su muerte, en 1723,
26 de sus aparatos fueron cedidos a la Royal Society de Londres.

Durante el siglo XVIII continuó el progreso y se lograron objetivos acromáticos por la

asociación de Chris Neros y Flint Crown, obtenidos en 1740 por H. M. Hall y mejorados
por John Dollond. De esta época son los estudios efectuados por Isaac Newton y Leonhard
Euler. En el siglo XIX, al descubrirse que la dispersión y la refracción se podían modificar
con combinaciones adecuadas de dos o más medios ópticos, se lanzan al mercado objetivos
acromáticos excelentes.
Durante el siglo XVIII el microscopio tuvo diversos adelantos mecánicos que aumentaron
su estabilidad y su facilidad de uso, aunque no se desarrollaron por el momento mejoras
ópticas. Las mejoras más importantes de la óptica surgieron en 1877, cuando Ernst Abbe
publicó su teoría del microscopio y, por encargo de Carl Zeiss, mejoró la microscopía de
inmersión sustituyendo el agua por aceite de cedro, lo que permite obtener aumentos de
2000. A principios de los años 1930 se había alcanzado el límite teórico para los
microscopios ópticos, no consiguiendo estos aumentos superiores a 500X o 1000X. Sin
embargo, existía un deseo científico de observar los detalles de las estructuras celulares
(núcleo, mitocondria, etc.).

El microscopio electrónico de transmisión (TEM) fue el primer tipo de microscopio

electrónico desarrollado. Utiliza un haz de electrones en lugar de luz para enfocar la
muestra, consiguiendo aumentos de 100.000X. Fue desarrollado por Max Knoll y Ernst
Ruska en Alemania en 1931. Posteriormente, en 1942 se desarrolla el microscopio
electrónico de barrido.

Microscopios de fluorescencia

Véase también: microscopio de fluorescencia, inmunofluorescencia y microscopio confocal

Microscopio de fluorescencia con la torreta del cubo de filtros sobre las lentes del objetivo,
acoplada a una cámara.

Los desarrollos más recientes del microscopio de luz se centran en gran medida en el auge
de la microscopía de fluorescencia en biología.19 Durante las últimas décadas del siglo XX,
especialmente en la era postgenómica, se desarrollaron muchas técnicas para la tinción
fluorescente de las estructuras celulares. Los principales grupos de técnicas implican la
tinción química dirigida de estructuras celulares concretas, por ejemplo, el compuesto
químico DAPI para marcar el ADN, el uso de anticuerpos conjugados con reporteros
fluorescentes, véase la inmunofluorescencia, y las proteínas fluorescentes, como la proteína
verde fluorescente.20 Estas técnicas utilizan estos diferentes fluoróforos para el análisis de la
estructura celular a nivel molecular tanto en muestras vivas como fijas.

Microscopios de superresolución

Gran parte de la investigación actual (a principios del siglo XXI) sobre técnicas de
microscopía óptica se centra en el desarrollo del análisis de superresolución de muestras
marcadas con fluorescencia. La iluminación estructurada puede mejorar la resolución en
torno a dos o cuatro veces y técnicas como la microscopía de agotamiento de la emisión
estimulada (STED) se están acercando a la resolución de los microscopios electrónicos.21
Esto ocurre porque el límite de difracción se produce a partir de la luz o la excitación, lo
que hace que la resolución deba duplicarse para llegar a la superresolución. Stefan Hell fue
galardonado con el Premio Nobel de Química 2014 por el desarrollo de la técnica STED,
junto con Eric Betzig y William Moerner que adaptaron la microscopía de fluorescencia
para la visualización de moléculas individuales.22

Microscopios de rayos X

Artículo principal: Microscopio de rayos X

Los microscopios de rayos X son instrumentos que utilizan la radiación electromagnética,

normalmente en la banda de los rayos X blandos, para obtener imágenes de los objetos. Los
avances tecnológicos en la óptica de las lentes de rayos X a principios de la década de 1970
convirtieron este instrumento en una opción viable para la obtención de imágenes.23 Suelen
utilizarse en tomografía (véase tomografía microcomputada) para producir imágenes
tridimensionales de objetos, incluidos los materiales biológicos que no han sido fijados
químicamente. Actualmente se está investigando para mejorar la óptica de los rayos X
duros, que tienen mayor poder de penetración.24

Tipos de microscopios
 Microscopio simple (monocular)
 Microscopio óptico (binocular)
 Microscopio estereoscópico (trilocular)
 Microscopio de luz ultravioleta
 Microscopio electrónico
 Microscopio de campo oscuro
 Microscopio de contraste de fases
 Microscopio confocal
 Microscopio de iones en campo
 Microscopio de sonda de barrido
 Microscopio de efecto túnel
 Microscopio de fuerza atómica
 Microscopio virtual
 Estereomicroscopio
 Microscopio compuesto
  Microscopio Radiador

El Microscopio: Equipo fundamental en el Laboratorio de Biología

María Isabel Pérez Aguilar[a]

Resumen

El microscopio nos permite observar especímenes invisibles al ojo humano, en el

laboratorio de Biología se utiliza el microscopio compuesto u óptico, a través de este
trabajo conocerás sus componentes y aprenderás a utilizarlo.

Palabras clave: Microscopio, Tipos de microscopios, Partes y uso del microscopio óptico.

Abstract

The microscope allows us to observe invisible specimens to the human eye, the compound
or optical microscope is used in the biology laboratory, through this work you will know its
components and you will learn the way to use it.

Keywords: Microscope, Types of microscopes, Parts and use of the optical microscope.

Microscopio

Es un vocablo que proviene del griego micro, que significa pequeño, y scopein, mirar. Este
aparato permite observar lo que es invisible a simple vista. Existen diversos tipos de
microscopios, desde la lupa, formada por una sola lente, hasta el microscopio electrónico.

El microscopio simple o también llamado lupa, consta de una de sólo una lente biconvexa o
plano- convexa, que proporciona una amplitud moderada del objeto.

Los microscopios de luz, compuestos u ópticos, usan lentes, para enfocar y amplificar los
rayos de luz que pasan a través de un espécimen o rebotan en él. La capacidad de de
definición de estos microscopios es de aproximadamente de 1 micra (una millonésima parte
de metro).

Este microscopio es el que utilizamos dentro del laboratorio de Biología, en el que más
adelante identificaremos sus partes y aprenderás como usarlo.

El microscopio estereoscópico o de disección, es un microscopio compuesto doble, en estos

aparatos las imágenes conservan los relieves que pueden observarse simultáneamente con
los dos ojos. El aumento  que se obtiene es relativamente bajo, sin embargo, pueden
realizarse micro disecciones sobre la platina a la par que la persona se encuentra
observando por los oculares.

Los microscopios electrónicos utilizan haces de electrones en vez de luz. Los electrones se
enfocan con campos magnéticos, no con lentes. Cuando un haz de electrones incide en el
vacio sobre un objeto, las partículas incidentes pueden ser absorbidas, transmitidas y
modificarse de distintas formas. Algunos tipos de microscopios electrónicos pueden
distinguir estructuras de unos cuantos nanómetros (milmillonésimas de metro).

Existen 2 tipos de microscopios electrónicos:

 Microscopios electrónicos de transmisión: que hacen pasar electrones a través de un

espécimen delgado y revelan los detalles de la estructura celular interior de manera
bidimensional, por ejemplo, los organelos celulares.

 Los microscopios  electrónicos de barrido: rebotan electrones de especímenes  que se han

recubierto con metales y proporcionan imágenes tridimensionales, sirven para ver detalles
superficiales de estructuras.

 
 

Componentes del Microscopio de luz, compuesto u óptico:

El  microscopio de luz, compuesto u óptico está integrado por 3 sistemas, los cuales son:

 1.- Sistema Mecánico

 2.- Sistema Óptico
 3.- Sistema de Iluminación

 Sistema Mecánico:

El sistema mecánico es el esqueleto o armazón del microscopio, el cual proporciona soporte

y estabilidad al equipo. Está integrado por:
El tubo de microscopio: El cual es de forma cilíndrica,  en su parte superior sostiene a la
lente o lentes oculares y en la parte inferior se encuentra el sistema de lentes objetivos.
Revólver: Es la parte circular en la que se encuentran atornilladas las diferentes lentes
objetivos, al girar el revolver cambian las lentes objetivos sin que se desenfoque la
preparación.
Platina: Pieza metálica cuadrada o circular, con un orificio central sobre el que se colocan
las preparaciones a observar y por el que atraviesa el rayo luminoso. Puede ser fija o estar
provista de tornillos de desplazamiento que nos permiten centrar la preparación o buscar
diferentes campos de observación.
Base o Pie: Es la base sobre la que descansa el aparato y le da estabilidad.
Brazo o columna: Esla parte que sostiene el tubo y su mecanismo de desplazamiento
vertical formado por los tornillos macrométrico y micrométrico.

 Sistema Óptico:

El sistema Óptico está formado por 2 sistemas de lentes: Oculares y Objetivos.

Los lentes oculares van montados en la parte superior del tubo del microscopio. Su nombre
se debe a la cercanía de la pieza con el ojo del observador y sus poderes de aumento van
desde 4x hasta 20x.

Los lentes objetivos se encuentran en el revólver y quedan cerca del objeto a observar. Hay
2 tipos de objetivos: Objetivos secos y de Inmersión

Los objetivos secos se utilizan sin colocar alguna sustancia entre ellos y la preparación,
únicamente el aire. Proporcionan poco aumento que va desde 10x , 20x,40x hasta incluso
60x; dicho aumento se encuentra grabado en el exterior de cada objetivo, en este caso
encontramos 10x o también llamado seco débil y 40x o seco fuerte.

Los objetivos de inmersión se utilizan colocando una sustancia entre ellos y la preparación,
por lo general, se emplea el aceite de cedro. Proporcionan un mayor aumento y definición,
de 100x; los podemos identificar ya que son los más largos y traen grabada en el exterior la
palabra oil (aceite).

 Sistema de Iluminación

El sistema de Iluminación está formado por la fuente de iluminación, Espejo, Condensador,

y Diafragma.
La fuente de iluminación consta generalmente de una lámpara incandescente de tungsteno.
El espejo es necesario si la fuente de iluminación no está dentro del microscopio tiene una
cara plana y una es cóncava.
El condensador de luz está formado por un sistema de lentes cuya función es captar los
rayos luminosos y dirigirlos hacia la preparación que se va a enfocar.
El Diafragma es una abertura que controla la cantidad de luz que debe pasar por el
condensador, que se regula por una palanca lateral.
En el siguiente video podrás observar las partes del microscopio y la manera de utilizarlo:

Video disponible en version Kindle de Amazon

Bibliografía

A. Krüss Optronic Germany. (2013). Recuperado el 7 de Agosto de 2013, de

http://www.kruess.com/laboratorio/productos/microscopios-para-laboratorios/
microscopios-para-biologia/

Audesirk, T. (2003). Biología I: Unidad en la diversidad. Naucalpan de Júarez: Prentice

Hall.

Gama Fuertes, M. d. (2007). Biología I: Un enfoque constructivista. Naucalpan de Juárez:

Pearson.

Pérez, R. (2 de Septiembre de 2010). Laboratorio de Histología. Recuperado el 7 de Agosto

de 2013, de http://laboratoriodehistologia-nelly.blogspot.mx/2010/09/microscopia-
electronica.html

Tomaselli, J. (2013). 123RF. Recuperado el 7 de Agosto de 2013, de

http://es.123rf.com/photo_12286056_microscopio-estereoscopico-de-cerca-en-el-escritorio-
de-madera.html

Vázquez Conde, R. (2006). Biología I. D.F.: Publicaciones Cultural.

Qué microscopio elegir

El microscopio es un dispositivo que permite visualizar objetos que son muy pequeños para
ser observados a simple vista. Se utiliza ampliamente en el sector sanitario, por ejemplo en
laboratorios en los que se realizan biopsias y otros análisis de muestras biológicas con fines
de diagnóstico. La mayor parte de los microscopios están constituidos por un sistema de
lentes capaz de ampliar la imagen del objeto observado.

También hay microscopios de diagnóstico y/o de operación que permiten al médico o

cirujano visualizar mejor una zona del cuerpo y trabajar con mayor precisión. Estos
modelos, empleados en la microscopía quirúrgica, no se tratarán en esta guía.

Ver microscopios

 ¿Qué tipos de microscopios existen?

 Microscopio electrónico compacto

Hay tres tipos principales de microscopios: ópticos, electrónicos y de sonda local.

o Microscopios ópticos: están dotados de una fuente de luz que ilumina la

muestra y de un sistema de lentes ópticas capaz de formar la imagen de tal
muestra. Los microscopios ópticos permiten utilizar diversas técnicas de
observación gracias a la configuración de diversos parámetros, como el tipo
de iluminación, la polarización, el filtrado espectral y el filtrado espacial.
Los microscopios digitales son un tipo de microscopio óptico que, en lugar
de tener un ocular, poseen una cámara que envía la imagen a una pantalla.
La microscopía óptica permite aumentar la muestra en 1.000x.
o Microscopios electrónicos: la muestra es atravesada por un haz de
electrones. La capacidad de aumento de los modelos electrónicos es muy
superior a la del microscopio óptico y puede llegar a los dos millones. Los
microscopios electrónicos se dividen a su vez en dos tipos principales: los
microscopios electrónicos de transmisión (TEM) y los microscopios
electrónicos de barrido (SEM).
o Microscopios de sonda de barrido:se utiliza una sonda que recorre la
superficie de la muestra para determinar la topografía. Algunos
microscopios ofrecen una resolución espacial que alcanza la escala atómica.
Es el caso, por ejemplo, de los microscopios de fuerza atómica (AFM) y los
microscopios de campo cercano (SNOM).
 ¿Cuáles son las principales aplicaciones de los
microscopios?
Los microscopios son ampliamente utilizados en diversos sectores de la salud:

o Médicina: los microscopios se utilizan para exámenes de laboratorio,

especialmente para estudiar muestras y detectar la presencia de patógenos
como microbios, bacterias u otros microorganismos mortales. En la
histopatología, por ejemplo, los microscopios sirven para observar muestras
de tejido, también con fines de diagnóstico.
 o Biología: los microscopios pueden utilizarse para estudiar la composición
celular y  el modo de desarrollo de los microorganismos.
o Medicina legal y forense: los microscopios se utilizan para analizar las
pruebas encontradas en la escena de un crimen con el fin de presentar
pruebas en el tribunal. Pueden analizarse elementos como el polvo, el vidrio,
trozos de tela, fluidos corporales, pelo, tinta y microorganismos.
o Industria farmacéutica: los microscopios se utilizan en la industria
farmacéutica para garantizar la seguridad y la calidad de los productos. Los
científicos analizan los productos en el microscopio para detectar cualquier
defecto o contaminante que pueda estar presente.
o Formación: existen modelos que están destinados para su uso en
laboratorios escolares o universitarios.
o Investigación 
 ¿Cuáles son las principales técnicas de observación
microscópica?
Existen diversas técnicas de observación microscópica. La elección depende del
tipo de microscopio y de la aplicación prevista. Las principales técnicas de
observación son las siguientes:

Ejemplo de una imagen por microscopía confocal de barrido láser.

Microscopía óptica:

o Microscopía de campo claro (convencional): técnica clásica que recoge la

luz blanca transmitida por la muestra. No requiere una larga preparación de
la muestra, pero tiene un bajo contraste y no es adecuada para muestras
gruesas.
o Microscopía de campo oscuro: la luz emitida por la fuente no se transmite
directamente al objetivo del microscopio. El objetivo del microscopio solo
recoge la luz dispersada por la muestra. Esta técnica permite mejorar el
contraste y observar las muestras sin necesidad de utilizar colorante, pero no
es adecuada para muestras con un grosor significativo.
o Microscopia de fluorescencia: la luz es emitida por las muestras, que
pueden ser fluorescentes por naturaleza o hechas para serlo. Se trata de una
técnica muy precisa que permite identificar varias estructuras
 simultáneamente gracias a la fluorescencia de los colores. También es eficaz
para observar la dinámica bioquímica de las muestras.
o Microscopio confocal de barrido láser: la fuente de luz es un láser. Esta
técnica se combina muy a menudo con la microscopía de fluorescencia.
Ofrece una mejor resolución y es adecuada para objetos gruesos o extensos.
También es eficaz para la observación fija o dinámica (por ejemplo, células
vivas). Los microscopios de este tipo, sin embargo, son muy caros. El uso de
un láser también comporta riesgos.

Microscopía electrónica:

Imagen de coágulos de sangre obtenida por microscopía MEB

o Microscopía de barrido (MEB o SEM, por sus siglas en inglés): se emite

un fino haz de electrones sobre la muestra. La interacción lleva a la
formación de electrones secundarios, que son detectados y convertidos en
señales, los cuales a su vez permiten reconstruir la imagen en relieve con
gran profundidad de campo. Sin embargo, la preparación de las muestras es
compleja. Las muestras deben previamente deshidratarse y someterse a un
tratamiento para hacerlas conductivas (fijación de tejidos, limpieza).
o Microscopía de transmisión (MET o TEM, por sus siglas en inglés): de
manera similar, un fino haz de electrones se emite sobre la muestra. Sin
embargo, en este caso los electrones que atraviesan la muestra son los que el
microscopio detecta. Los microscopios MET ofrecen una resolución mejor
que los microscopios MEB. Las muestras tienen que prepararse de acuerdo
con un protocolo específico, deben conservar su estructura y ser conductoras
para permitir que el haz de electrones las atraviese.

Microscopía de sonda de barrido

o Microscopía de fuerza atómica (MFA o AFM, por sus siglas en inglés):

utiliza la fuerza de repulsión entre las nubes de electrones de la superficie de
la muestra y la nube de electrones de la sonda del microscopio. Esta técnica
permite que la sonda pueda moverse en todas las direcciones y explorar la
superficie de la muestra. El análisis de la trayectoria de la sonda y la
medición de las fuerzas de interacción entre la sonda y la muestra permite
 definir la topografía de la superficie. Esta técnica puede aplicarse tanto con
muestras conductoras como con muestras no conductoras.
o Microscopía de campo cercano (SNOM, por sus siglas en inglés): es una
técnica de microscopía con una altísima resolución, capaz de superar el
límite de Abbe al detectar las ondas evanescentes. El detector de luz se
coloca muy cerca de la superficie de la muestra, de manera que se puede
observar la onda evanescente y no la onda dispersa. Esto permite visualizar
detalles más pequeños que la longitud de onda de la luz.
 ¿Cuáles son los criterios más importantes a la hora
de elegir un microscopio?
Dado el gran número de aplicaciones que tienen los microscopios, los criterios de
elección varían mucho en función del uso previsto. En general, la elección de un
microscopio se debe hacer teniendo en cuenta cinco características principales:
aumento, técnica de observación, configuración, número de oculares y tipo de
iluminación.

o Aumento total: es el resultado del aumento del objetivo y de los oculares.

o Técnica de observación microscópica
o Configuración del microscopio: la mayoría de los microscopios
corresponden a los llamados microscopios verticales, en los que la luz
atraviesa la muestra desde abajo y, en consecuencia, la observación se hace
desde arriba. Existen también los microscopios invertidos, cuya fuente de
luz se coloca por encima de la muestra, mientras que los objetivos se
encuentran por debajo.
o Número de oculares: en función del número de oculares, los microscopios
pueden ser monoculares, binoculares o trinoculares.
o Tipo de iluminación: en la mayor parte de los casos la iluminación es LED
o halógena.
 ¿Qué accesorios hay disponibles para los
microscopios?
El tipo de microscopía y el ámbito de aplicación del dispositivo pueden requerir el
uso de diversos accesorios, como cámaras, pantallas y zoom.

Algunos de los accesorios disponibles en el mercado son:

o Cámara: la cámara está montada en el objetivo y permite fotografiar las

muestras analizadas.
o Pantalla: facilita la visualización en tiempo real de la muestra observada en
el microscopio.
o Sistema de observación múltiple: permite dividir el haz y mostrarlo en dos
objetivos diferentes para que varios usuarios puedan observar la muestra
simultáneamente.
o Digitalizador: permiten escanear la muestra observada y procesar
informáticamente las imágenes obtenidas.
o Zoom: permite una ampliación continua de la muestra.
o Sistema de motorización: permite mover el revolver del microscopio.