b.

práctica #2: microscopia

i. Introducción:

El microscopio es una de las herramientas más útiles que tiene un personal Bioquímico.

El uso adecuado de un microscopio es una de las destrezas más importantes que debe aprender
un estudiante que se inicia en el estudio de la citología. Los microscopios se desarrollaron a finales
del siglo XVII y hoy en día, continúan siendo importantes para la identificación de células y
microorganismos.

Esta publicación les proveerá con información básica e instrucciones en cómo preparar, usar y
cuidar de microscopios, técnicas esenciales para estudiantes de citología e histología aplicada.

Figura 1. Partes de un Microscopio Compuesto.

historia y descubrimiento del microscopio.

De forma cronológica podremos ver los hechos mas importantes en cuanto a la historia del
microscopio que empieza con la invención del microscopio compuesto, es decir, con la idea
de combinar más de una lente para observar objetos de forma aumentada. Acorde con esta
definición, la historia del microscopio empezaría a finales del siglo XVI, posiblemente con el diseño
de Zacharias Janssen. Sin embargo, es importante tener en cuenta que antes de la invención del
microscopio ya era común la utilización de lentes de aumento, también conocidas como
lupas. Las lupas son también un tipo de microscopio llamado microscopio simple. No
obstante, cuando se habla del invento del microscopio se hace generalmente referencia a la
idea del microscopio compuesto.

Año 1590: se cree que en Holanda, los fabricantes Zacharias Janssen y su padre Hans Lippershey
inventan el microscopio. A él se le atribuye ser el descubridor del microscopio.
• Año 1609: Galileo Galilei inventa un microscopio compuesto de una lente cóncava y una lente
convexa.

• Año 1612: Galileo presenta su invento al rey de Polonia.

• Año 1619: Cornelius Drebbel, que había trabajado como alquimista jefe en la corte de Praga de
Rodolfo II, y ahora trabajaba para la British Royal Navy, presenta en Londres un microscopio
formado por dos lentes convexas.

• Año 1624: Galileo presenta su invento en la Academia de los Linces de Roma, la academia de las
ciencias del gobierno italiano, ante su fundador, el príncipe Federico Cesi.

• Año 1625: publicación de la primera investigación hecha con la ayuda de un microscopio, el

Apiarum, de Francesco Stelluti, que contiene dibujos de abejas observadas a través del
microscopio y muestra la estructura alveolar del ojo.

• Año 1626: la palabra microscopio es acuñada por Giovanni Faber de Bamberg, miembro de la
Academia de los Linces, por analogía con telescopio.

• Años 1634-1680: a raíz de sus observaciones a través del microscopio, Athanasius Kircher,
postula la acción de organismos invisibles en el desencadenamiento de las enfermedades y de la
putrefacción.

• Año 1655: observación de estructuras de tamaño ínfimo a través del microscopio, por
Giovanni Alfonso Borelli. Se trata de las «células», descubiertas por Robert Hooke diez años más
tarde.

• Año 1660: descubrimiento de los vasos capilares por Marcello Malpighi, gracias a lo cual puede
mostrar cómo las arterias y las venas se juntan, y completar la teoría de la circulación de la sangre
de William Harvey

• Año 1665: publicación de la Micrographia, de Robert Hooke, que entrega una descripción precisa
del microscopio compuesto, introduce el principio de iluminación del campo de sombra, y
anuncia el descubrimiento de estructuras alveolares en secciones de corcho, que denomina
“células”.

• Años 1669-1675: invención de las técnicas de anatomía fina por Jan Swammerdam, que le
permiten observar a través del microscopio la anatomía y la metamorfosis de los insectos.

• Años 1672-1682: estudio a través del microscopio de numerosas plantas, y en especial, de sus
órganos reproductores, por Nehemiah Grew.

• Años 1672-1723: periodo de actividad de Antonie van Leeuwenhoek, quien inventa el

microscopio simple de propia fabricación, que sólo utiliza una lente para observar el objeto.

Descubre y estudia los protozoos en 1674, introduce los primeros métodos de cultivo de
microorganismos para sus observaciones a través del microscopio. Explica, en 1677, la
función de los espermatozoides; descubre las bacterias en 1683. Finalmente, observa la
circulación de los glóbulos sanguíneos en los capilares y demuestra experimentalmente la
exactitud de la teoría de Harvey.

• Año 1933: Ernst Ruska y Max Knoll inventan el microscopio electrónico, que utiliza
electrones en lugar de luz visible (fotones) para obtener imágenes de objetos pequeñísimos.

Es capaz de lograr hasta 000 aumentos, cuando en uno formado por lentes no se va más allá
de los mil aumentos.

• Año 1982: primer microscopio de efecto túnel inventado por los alemanes Gerd Binning y
Heinrich Rohrer.

• Año 1985: primer microscopio de fuerza atómica inventado por Gerd Binnig y H. Rohrer,
Christoph Gerber y Calvin

• Año 1987: primer microscopio de positrones inventado por James C. Van House y Arthur Rich.

El microscopio revoluciona la biología, de la misma forma que el telescopio trastocó la astronomía.

El científico inglés Robert Hooke es consciente de ello cuando escribe, en 1665; ”Un nuevo mundo
visible acaba de ser descubierto”.

Marco teórico

Un microscopio óptico compuesto, o simplemente microscopio compuesto, es un microscopio

que cumple su misión —producir una imagen ampliada de una muestra de algo— por medio de
dos sistemas ópticos (hecho cada uno de una o más lentes) que actúan sucesivamente. Se
distingue de un microscopio simple (por ejemplo una lupa de mano o una lupa de relojero) que
amplía el objeto mediante un solo sistema de lentes (generalmente una sola lente).

Los microscopios compuestos sirven para ampliar mucho (típicamente un microscopio moderno
está preparado para elegir ampliaciones de entre 40 y 1000 veces) un objeto transparente, el cual
es iluminado desde el otro lado, al trasluz. Se emplean para examinar cosas que no se distinguen a
simple vista, como las células de una muestra de sangre o un tejido. Hay una clase especial de
microscopios compuestos, los que se llaman lupas binoculares, que se usan para ampliar
modestamente (de 4 a 40 veces en general) y para manipular objetos pequeños y opacos
iluminados desde el lado del observador, tales como insectos, flores, joyas o el molde inicial de
una moneda.

Los dos sistemas ópticos por los que llamamos compuesto a un microscopio son el objetivo, que
proyecta una primera imagen, y el ocular, que amplía la imagen anterior. La mayoría de los
microscopios compuestos están dotados de varios objetivos colocados en un dispositivo rotatorio,
el revólver, que permite alternar entre ellos; y la mayoría de los microscopios de trabajo y
profesionales están dotados además de dos oculares, que amplían la misma imagen, para que la
observación prolongada sea más saludable; pero los microscopios no se llaman compuestos por
tener más de un objetivo o más de un ocular, sino porque la imagen que ve el observador se ha
formado en dos fases, no en una sola, como en un microscopio simple.
Un microscopio compuesto típico tiene elementos ópticos, que son los fundamentales, y
mecánicos. Los elementos ópticos sirven para formar la imagen y para iluminar la muestra. Los
elementos mecánicos controlan la distancia del objetivo a la muestra (enfoque) y el
desplazamiento de la muestra ante el objetivo, para la elección del área a examinar. También hay
elementos mecánicos implicados en ajustar la iluminación de la muestra. Existen cuatro tipos de
lentes, pero solo tres de ellas producen una imagen; La lente condensadora que se encarga de
reúne los rayos e ilumina el lente objetivo enfoca estos rayos para crear una imagen real y
magnificada, el lente ocular utiliza esta imagen para crear una imagen virtual y aumentada y por
último el cristalino que crea una imagen real e invertida.

Sistema óptico

Es el encargado de producir la imagen ampliada de la muestra mediante los dos sistemas de lentes
que se sitúan en sus extremos. Estos sistemas son el ocular y el objetivo. El objetivo proyecta una
primera imagen de la muestra que el ocular luego amplía; esta producción de la imagen en dos
fases es la que justifica la expresión microscopio compuesto, distinguiéndolo del microscopio
simple (o lupa).

Objetivo

La mayoría de los microscopios modernos vienen dotados de varios objetivos, que pueden usarse
alternativamente, montados en una pieza giratoria, denominada revólver portaobjetivos. Este está
construido de manera que el objetivo que se está usando tiene su eje óptico alineado con el del
ocular y también con el del condensador. En los microscopios modernos, tanto los de trabajo o
investigación como los empleados en la educación, los objetivos se insertan en el revólver por
medio de una rosca estándar, lo que permite sustituirlos. El número de objetivos varía con el tipo
de microscopio y el uso a que se destina. Los aumentos de los objetivos secos más frecuentemente
utilizados son: 4X, 10X, 20X, 40X y 60X.

Cada objetivo es un objeto cilíndrico que contiene una serie de lentes coaxiales —tienen sus ejes
alineados— con un diseño apropiado para producir una cierta ampliación evitando a la vez los dos
problemas mayores de todos los sistemas semejantes, también los objetivos fotográficos, por un
lado la aberración esférica y por otro la aberración cromática. Un objetivo se califica como
acromático si corrige la segunda, evitando cercos de color, y planacromático si corrige
adecuadamente las dos. En la mayoría de los casos la corrección de aberraciones se logra por el
trabajo combinado de objetivo y ocular.

Los objetivos se distinguen principalmente por la ampliación que está previsto obtener con ellos y
por su poder de separación, es decir, su resolución. El poder separador depende de un parámetro
llamado abertura numérica. Los objetivos destinados a ampliaciones más pequeñas (típicamente
4X) tienen A.N. de 0,10; los de mayor ampliación (100X) tienen A.N. de 1,25.

Cuanto mayor es la ampliación de un objetivo más debe acercarse este a la muestra. Incluso en
objetivos de mediana ampliación, como 40X, la distancia es inferior a un milímetro. En un
microscopio la operación de enfocar consiste en ajustar esta distancia.
Los objetivos de 100 aumentos (100X), y más raramente otros de menor ampliación, suelen ser
objetivos de inmersión (y llamamos a los que no lo son objetivos secos). Para el uso de éstos hay
que crear entre la muestra y la lente frontal del objetivo, la más cercana a ella, un medio con un
índice de refracción continuo (el índice de refracción de un medio transparente mide el grado de
desviación que provoca en los rayos luminosos). Para ello se pone sobre la muestra una gota de
aceite (clásicamente «aceite de cedro») y se acerca el objetivo a la muestra hasta que su lente
frontal queda sumergida en la gota. En la mayoría de los casos entre el objeto observado (por
ejemplo una bacteria) y la lente frontal estarán, en este orden, el medio de montaje (una gelatina
o una resina), el vidrio cubreobjetos y, por último, el aceite de inmersión.

Las características de un objetivo suelen estar grabadas en un lateral. Las que no faltan son el
poder de ampliación (por ejemplo 40X), la abertura numérica (por ejemplo, 0,65), y la distancia a
la que proyecta la imagen (por ejemplo 160, porque se da en milímetros). La longitud del tubo
óptico y los oculares deben estar ajustados a la misma distancia de proyección.

La lente frontal del objetivo es siempre muy pequeña, menor cuanto mayor su poder de
ampliación, y su diámetro es inferior a un milímetro en los objetivos más potentes. Su cuidado,
evitando mancharla y limpiándola con medios adaptados, es una parte crítica del mantenimiento
de los microscopios, especialmente de los escolares.

Ocular

En el extremo superior del tubo óptico, el de observación, donde se aproxima el ojo o se monta
una cámara, se sitúa el ocular. Un ocular tiene forma cilíndrica y contiene generalmente, como el
objetivo, varias lentes coaxiales. A diferencia del objetivo, no se atornilla, sino que se encaja en el
tubo óptico como un émbolo, sostenido por su peso, y contenido por un reborde de mayor
diámetro en su extremo superior.

Cada ocular lleva grabadas sus características. Nunca falta una de ellas: su poder de ampliación. Se
expresa como en el caso de los objetivos con un número seguido de aspas. Los oculares más
usados son los de 10X, pero frecuentemente se encuentran los 5X y los 15X. Valores mayores,
como 20X, producen ampliaciones más grandes, pero que suelen ser excesivas para la capacidad
que tienen los objetivos para resolver el detalle de la muestra, y tienen por ello un uso limitado.

La ampliación total de una observación se obtiene multiplicando la del objetivo por la del ocular.
Por ejemplo, con un objetivo de 100X y un ocular 15X, obtenemos una ampliación de 1 500
aumentos (1 500X), que es por cierto la máxima ampliación útil de un microscopio compuesto
clásico, dadas las limitaciones de resolución de los objetivos.

La mayoría de los microscopios escolares y muchos de aficionado son monoculares, pero los de
rutina (por ejemplo, los usados para examinar muestras médicas) y los de investigación, son
binoculares. En estos los rayos luminosos producidos por el objetivo se desdoblan por medio de
prismas para dar servicio a dos oculares, de manera que se observa con los dos ojos a la vez. A
diferencia de lo que ocurre con unos prismáticos o gemelos de visión lejana (o con el tipo de
microscopio compuesto que llamamos lupa binocular) los dos ojos ven exactamente la misma
imagen, sin ningún efecto de relieve. Lo que se busca es una observación más descansada, como
es exigible por quien pasa horas cada día trabajando con el microscopio.

Algunos microscopios son triloculares, con espacio para tres oculares. En este caso dos se destinan
a la observación directa y el tercero al registro fotográfico o videográfico de la imagen producida
por el objetivo. En este caso se usan generalmente tres oculares, dos iguales, para los dos ojos, y
otro, generalmente de poca ampliación, optimizado para proyectar la imagen sobre el sensor o la
película fotográfica.

Sistema de iluminación

Este sistema tiene como finalidad dirigir la luz natural o artificial de tal manera que ilumine la
preparación u objeto que se va a observar en el microscopio de la manera adecuada. Comprende
los siguientes elementos:

 Fuente de iluminación: se trata clásicamente de una lámpara incandescente de tungsteno

sobrevoltada; en versiones más modernas con leds. Por delante de ella se sitúa un
condensador (una lente convergente) e, idealmente, un diafragma de campo, que permite
controlar el diámetro de la parte de la preparación que queda iluminada, para evitar que
exceda el campo de observación produciendo luces parásitas.

 Espejo: necesario si la fuente de iluminación no está construida dentro del microscopio y

ya alineada con el sistema óptico, como suele ocurrir en los microscopios modernos. Suele
tener dos caras: una cóncava y otra plana. Goza de movimientos en todas las direcciones.
La cara cóncava se emplea de preferencia con iluminación artificial, y la plana, para natural
(luz solar). Los modelos más modernos no poseen espejos sino una lámpara que cumple la
misma función que el espejo.

 Condensador: está formado por un sistema de lentes, cuya finalidad es concentrar los
rayos luminosos sobre el plano de la preparación, formando un cono de luz con el mismo
ángulo que el del campo del objetivo. El condensador se sitúa debajo de la platina y su
lente superior es generalmente planoconvexa, quedando la cara superior plana en
contacto con la preparación cuando se usan objetivos de gran abertura (los de mayor
ampliación); existen condensadores de inmersión, que piden que se llene con aceite el
espacio entre esa lente superior y la preparación. La abertura numérica máxima del
condensador debe ser al menos igual que la del objetivo empleado, o no se logrará
aprovechar todo su poder separador. El condensador puede deslizarse verticalmente
sobre un sistema de cremallera mediante un tornillo, bajándose para su uso con objetivos
de poca potencia.

 Diafragma: el condensador está provisto de un diafragma-iris, que regula su abertura para

ajustarla a la del objetivo. Puede emplearse, de manera irregular, para aumentar el
contraste, lo que se hace cerrándolo más de lo que conviene si se quiere aprovechar la
resolución del sistema óptico.
  Linterna: esta sustituye al espejo en diferentes tipos de microscopios, tiene la función de
iluminar la muestra mejor que usando el espejo ya que más cantidad de luz pasa a través
de la muestra.

Trayectoria del rayo de luz a través del microscopio

El haz luminoso procedente de la lámpara pasa directamente a través del diafragma al

condensador. Gracias al sistema de lentes que posee el condensador, la luz es concentrada sobre
la preparación a observar. El haz de luz penetra en el objetivo y sigue por el tubo hasta llegar al
ocular, donde es captado por el ojo del observador.

Propiedades del microscopio

 Poder separador. También llamado a veces poder de resolución, es una cualidad del
microscopio, y se define como la distancia mínima entre dos puntos próximos que pueden
verse separados. El ojo normal no puede ver separados dos puntos cuando su distancia es
menor a una décima de milímetro. En el microscopio viene limitado por la longitud de
onda de la radiación empleada; en el microscopio óptico, el poder separador máximo
conseguido es de 0,2 décimas de micrómetro (la mitad de la longitud de onda de la luz
azul), y en el microscopio electrónico, el poder separador llega hasta 10 Å.

 Poder de definición. Se refiere a la nitidez de las imágenes obtenidas, sobre todo respecto
a sus contornos. Esta propiedad depende de la calidad y de la corrección de las
aberraciones de las lentes utilizadas.

 Ampliación del microscopio. En términos generales se define como la relación entre el

diámetro aparente de la imagen y el diámetro o longitud del objeto. Esto quiere decir que
si el microscopio aumenta 100 diámetros un objeto, la imagen que estamos viendo es 100
veces mayor linealmente que el tamaño real del objeto (la superficie de la imagen será
1002, es decir 10.000 veces mayor). Para calcular el aumento que está proporcionando un
microscopio, basta multiplicar los aumentos respectivos debidos al objetivo y el ocular
empleados. Por ejemplo, si estamos utilizando un objetivo de 45X y un ocular de 10X, la
ampliación con que estamos viendo la muestra será: 45X x 10X = 450X, lo cual quiere decir
que la imagen del objeto está ampliada 450 veces, también expresado como 450
diámetros.

Parte mecánica del microscopio compuesto

Esquema de un microscopio óptico.

La parte mecánica del microscopio comprende el pie o la base, el tubo, el revólver, el asa, la
platina, el carro y los tornillos micrométrico y macrométrico. Estos elementos sostienen la parte
óptica y de iluminación; además, permiten los desplazamientos necesarios para el enfoque del
objeto.

 El pie y soporte: contiene la base sobre la que se apoya el microscopio y tiene por lo
general forma de Y o bien es rectangular.
  La columna o brazo: llamada también asa, es una pieza en forma de C, unida a la base por
su parte inferior mediante una bisagra, permitiendo la inclinación del tubo para mejorar la
captación de luz cuando se utilizan los espejos. Sostiene el tubo en su porción superior y
por el extremo inferior se adapta al pie.

 El cañón : tiene forma cilíndrica. El cañón se encuentra en la parte superior de la columna,

enfoca el objeto mediante un sistema de cremalleras, las cuales permiten que el tubo se
mueva mediante los tornillos.

 El tornillo macrométrico o macroscópico: girando este tornillo, asciende o desciende el

tubo del microscopio, deslizándose en sentido vertical gracias a un mecanismo de
cremallera. Estos movimientos largos permiten el enfoque rápido de la preparación.

 El tornillo micrométrico o microscópico: mediante el ajuste fino con movimiento casi

imperceptible que produce al deslizar el tubo o la platina, se logra el enfoque exacto y
nítido de la preparación. Lleva acoplado un tambor graduado en divisiones de 0,001 mm,
que se utiliza para precisar sus movimientos y puede medir el espesor de los objetos.

 La platina: es una pieza metálica plana en la que se coloca el objeto que se va a observar.
Presenta un orificio, en el eje óptico del tubo, que permite el paso de los rayos luminosos
a la preparación. La platina puede ser fija, en cuyo caso permanece inmóvil; en otros casos
puede ser giratoria; es decir, mediante tornillos laterales puede centrarse o producir
movimientos circulares.

 Las pinzas: son dos piezas metálicas que sirven para sujetar el objeto. Se encuentran en la
platina.

 Ajuste óptico: este gira la lente para aumentar o disminuir la visión a través del
microscopio

 El revólver: es una pieza giratoria provista de orificios en los que se enroscan los objetivos.
Al girar el revólver, los objetivos pasan por el eje del tubo y se colocan en posición de
trabajo, lo que se nota por el ruido de un piñón que lo fija.

Se denomina campo del microscopio al círculo visible que se observa a través del microscopio.
También podemos definirlo como la porción del plano visible observado a través del microscopio.

Si el aumento es mayor, el campo disminuye, lo cual quiere decir que el campo es inversamente
proporcional al aumento del microscopio. Para medir el diámetro del campo del microscopio con
cualquiera de los objetivos se utiliza el micrómetro, al que se hará referencia en el siguiente punto.

Tipos de microscopios

Existen diversas clases de microscopios, según la naturaleza de los sistemas de luz, y otros
accesorios utilizados para obtener las imágenes.

El microscopio compuesto u óptico utiliza lentes para ampliar las imágenes de los objetos
observados. El aumento obtenido con estos microscopios es reducido, debido a la longitud de
onda de la luz visible que impone limitaciones. El microscopio óptico puede ser monocular, y
consta de un solo tubo. La observación en estos casos se hace con un solo ojo. Es binocular cuando
posee dos tubos. La observación se hace con los dos ojos. Esto presenta ventajas tales como mejor
percepción de la imagen, más cómoda la observación y se perciben con mayor nitidez los detalles.

Microscopio invertido el sistema óptico de este tipo de microscopio está en posición al revés
comparado con un microscopio óptico convencional. La fuente de luz y el condensador están
dispuestos sobre la plataforma apuntando hacia abajo; y los objetivos y la torrecilla están debajo
de la plataforma apuntando hacia arriba. Las únicas partes que están en una disposición normal
son el tubo binocular o trinocular, así mismo la muestra que es colocada sobre la plataforma o
platina mecánica. Presenta la ventaja de poder observar cultivos enteros o grandes muestras bajo
estados más naturales y con menores condiciones de estrés.

Microscopio estereoscópico: es un tipo de microscopio hace posible la visión tridimensional de los

objetos. Consta de dos tubos oculares y dos objetivos pares para cada aumento. Este microscopio
ofrece ventajas para observaciones que requieren pequeños aumentos. El óptimo de visión
estereoscópica se encuentra entre 2 y 40X o aumento total del microscopio.

Microscopio de campo oscuro. Este microscopio está provisto de un condensador paraboloide,

que hace que los rayos luminosos no penetren directamente en el objetivo, sino que iluminan
oblicuamente la preparación. Los objetos aparecen como puntos luminosos sobre un fondo
oscuro.

Microscopio de contraste de fases. Se basa en las modificaciones de la trayectoria de los rayos de

luz, los cuales producen contrastes notables en la preparación.

Microscopio de fluorescencia. La fluorescencia es la propiedad que tienen algunas sustancias de

emitir luz propia cuando inciden sobre ellas radiaciones energéticas. El tratamiento del material
biológico con flurocromos facilita la observación al microscopio.

Microscopio quirúrgico

El empleo de microscopios quirúrgicos ha permitido que los cirujanos lleven a cabo intervenciones
que parecían imposibles, como la reimplantación de un miembro y la cirugía de los ojos y oídos.
Estos microscopios son en especial útiles cuando es necesario realinear para unir o reparar fibras
nerviosas y vasos sanguíneos individuales. Se usa para operaciones de dificultad.

Medición a través del microscopio

Muchas veces interesa al observador conocer el tamaño real de los objetos o microorganismos
que está observando a través del microscopio. Para estas mediciones pueden utilizarse varios
métodos.

Método de los micrómetros. Se utiliza para esto un micrómetro de platina o de objetivo, que
consiste en un portaobjetos en cuyo centro se halla una escala graduada (de 2 mm de longitud),
con separaciones, entre cada división, de una centésima de milímetro.
Además se utiliza un micrómetro ocular que lleva una escala graduada en décimas de milímetros.
Se coloca el micrómetro objetivo sobre la platina y se enfoca el microscopio hasta que las líneas de
la escala graduada aparezcan nítidas. Luego se hace superponer la escala del ocular y se toma
como referencia las primeras divisiones en que una línea del micrómetro objetivo y una línea del
micrómetro ocular coincidan o se superpongan exactamente.

Luego, por simple regla de tres, se calcula el valor en mieras de cada división ocular. Veamos un
ejemplo. Si 9 divisiones del micrómetro objetivo (0,09 mm) equivalen a 30 divisiones del
micrómetro ocular, cada división del ocular equivaldrá a: 0,09 mm/30 = 0,003 mm = 3 µm

Quiere decir que para el objetivo calibrado y el ocular utilizado, cada división del micrómetro
ocular equivale a 3 µm. Una vez obtenido este dato para cada objetivo en la forma que hemos
expuesto, teniendo el microscopio ocular podrían hacerse todas las mediciones que se deseen.
Para medir, por ejemplo, un Paramecium de una preparación, procedemos así: haremos coincidir
los extremos del microorganismo con las divisiones del micrómetro ocular. Si la longitud del
organismo es de 75 divisiones del micrómetro ocular, y cada división equivale a 3 µm, la longitud
del Paramecium será 75x3= 225 µm. También se pueden efectuar mediciones en el microscopio
con cámara clara y utilizando una regla. En realidad, estas medidas no son tan exactas como
cuando se utilizan micrómetros por errores que se introducen superponiendo imágenes.

Mantenimiento del microscopio

El microscopio debe estar protegido del polvo, humedad y otros agentes que pudieran dañarlo.
Mientras no esté en uso debe guardarse en un estuche o gabinete, o bien cubrirlo con una bolsa
plástica o campana de vidrio.

Las partes mecánicas deben limpiarse con un paño suave; en algunos casos, este se puede
humedecer con xilol para disolver ciertas manchas de grasa, aceite de cedro, parafina, etc. Que
hayan caído sobre las citadas partes.

La limpieza de las partes ópticas requiere precauciones especiales. Para ello debe emplearse papel
de óptico que expiden las casas distribuidoras de material de laboratorio ó fotografía o utilizar un
paño de algodón. Para el polvillo se puede utilizar una perilla con pincel de pelo de camello. Nunca
deben tocarse las lentes del ocular, objetivo y condensador con los dedos; las huellas digitales
perjudican la visibilidad, y cuando se secan resulta trabajoso eliminarlas.

Para una buena limpieza de las lentes puede humedecerse el papel de óptica, envolviendo un
palillo con algo de punta con una solución de éter/alcohol (70-30 %) y luego pasarlo por la
superficie cuantas veces sea necesario. La limpieza de la óptica ha de realizarse en espiral, desde el
centro hacia el exterior. El aceite de cedro que queda sobre la lente frontal del objetivo de
inmersión debe quitarse inmediatamente después de finalizada la observación. Para ello se puede
pasar el papel de óptica impregnado con una gota de xilol. En caso de estar seco debe ponerse la
zona a remojo con la solución señalada.

Para guardarlo se acostumbra colocar el objetivo de menor aumento sobre la platina y bajado
hasta el tope; el condensador debe estar en su posición más baja, para evitar que tropiece con
alguno de los objetivos. Guárdese en lugares secos, para evitar que la humedad favorezca la
formación de hongos. Ciertos ácidos y otras sustancias químicas que producen emanaciones
fuertes, deben mantenerse alejados del microscopio.

Conclusiones

Dos lentes convexas bastan para construir un microscopio. Cada lente hace converger los rayos
luminosos que la atraviesan. Una de ellas, llamada objetivo, se sitúa cerca del objeto que se quiere
estudiar. El objetivo forma una imagen real aumentada e invertida. Se dice que la imagen es real
porque los rayos luminosos pasan realmente por el lugar de la imagen. La imagen es observada
por la segunda lente, llamada ocular, que actúa sencillamente como una lupa. El ocular está
situado de modo que no forma una segunda imagen real, sino que hace divergir los rayos
luminosos, que al entrar en el ojo del observador parecen proceder de una gran imagen invertida
situada más allá del objetivo. Como los rayos luminosos no pasan realmente por ese lugar, se dice
que la imagen es virtual...

ii. Resultados de aprendizaje:

Describe las partes del microscopio compuesto para un uso correcto y mantenimiento adecuado.

iii. Objetivo de la práctica:

 Familiarizar al estudiante con los componentes de los microscopios.

 Enseñar el cuidado y mantenimiento apropiado de los microscopios.

 Aprender los pasos de un adecuado manejo del enfoque y observación de especímenes

con los microscopios.

iv. Material e insumos:

 Microscopio Compuesto.

 Portaobjetos y Cubreobjetos.

 Aceite de Inmersión.

v. Procedimiento.

Distinguir y observar los componentes presentes en el microscopio compuesto según la tabla

Tabla 1. Principales componentes de los microscopios, descripción general y usos

Componente Descripción

Parte de metal o plástico sobre la cual descansa el resto de las partes del
Base
microscopio.

Columna en forma de “C” que se proyecta de la base y que sostiene a la

Brazo
platina y a los componentes ópticos.

Plataforma plana unida a la parte inferior del brazo sobre la cual se

Platina
colocan los portaobjetos o muestras a observar.

Manija debajo de la abertura de la platina que consiste de un grupo de

Cierre del Diafragma o
piezas de metal a manera de obturador que regula la cantidad de luz que
Condensador
atraviesa al portaobjetos colocado en la platina.

No está presente en todos los microscopios – colecta los rayos de luz del
Condensador iluminador y los enfoca – incrementa la resolución, aumenta el contraste
de la muestra.

Botón de ajuste del

Sube y baja el condensador.
condensador knob

Parte cilíndrica/vertical unida en la parte superior del brazo que sostiene

Cabezal
el sistema óptico.

Plato giratorio que sostiene los objetivos (lentes), unido a la parte inferior
Revólver
del cabezal, puede dársele la vuelta para cambiar los lentes (objetivos).

Botón grande que mueve el cabezal hacia arriba y abajo para observar la
Ajuste del macrométrico
muestra en el enfoque macrométrico.

Botón pequeño que mueve el cabezal a distancias más cortas, de manera

Ajuste del micrométrico más lenta y es usado para observar a la muestra con un enfoque más
nítido.
Tabla 1. Principales componentes de los microscopios, descripción general y usos

Componente Descripción

Iluminador, Fuente
Controla la cantidad de luz que se transfiere a la muestra.
lumínica

Tubo de metal corto, removible que contiene lentes ubicados en la parte

Oculares
superior del tubo, generalmente de 10X -15X de aumento.

Ajuste de Dioptría Ajuste usado para compensar la diferencia de observación de los ojos.

Tubos de metal pequeños, atornillados dentro del revólver que

Objetivos (lentes) incrementan el aumento de la muestra (a menudo se refieren sólo como
objetivos).

Espejo Usado para reflejar la luz a través de la muestra.

Eje giratorio del espejo Usado para ajustar el espejo para que refleje la luz a través de la muestra.

También se les refiere como lentes suplementarios, pueden ser

Lentes auxiliares encontrados en microscopios de disección en la base de la cubierta de los
objetivos o cabezal.

COMO MOVER Y TRANSPORTAR LOS MICROSCOPIOS APROPIADAMENTE.

Los microscopios a menudo se almacenan en anaqueles cuando no se encuentran en uso. Para
retirar los microscopios de los anaqueles, coloque una mano alrededor del brazo y la otra mano
debajo de la base del microscopio. Siempre transporte en el laboratorio, de un sitio a otro, el
microscopio en posición vertical y frontal.

Transportar al microscopio en otra forma podrá ocasionar que se caigan o desprendan alguna de
sus partes. Tenga cuidado de que el cordón eléctrico no se encuentre enredado con el de otro
microscopio. Coloque el microscopio sobre una superficie limpia sobre el escritorio o mesa de
laboratorio.

Las fuentes de luz se requieren para la mayoría de los microscopios. El cordón eléctrico de la
fuente lumínica debe ser insertado en una salida eléctrica adecuada. En algunos modelos de
microscopios de disección la fuente de luz es una unidad separada. Esta fuente de luz puede ser
insertada en un espacio que presenta el brazo para poder iluminar la muestra desde arriba, en
dirección hacia la platina. Alternativamente, la fuente de luz puede ser colocada cerca de la platina
a nivel de la muestra o debajo de la platina.

DETERMINACIÓN DEL AUMENTO.

El aumento es una medida de la capacidad del microscopio de agrandar una imagen. La resolución
es una medida de la capacidad del microscopio para separar los diferentes puntos de una imagen.
Determinar el aumento es vital cuando se comparan los tamaños de los diferentes objetos a
observarse con la ayuda de un microscopio. Anote el aumento de los lentes oculares y objetivos de
su microscopio. El aumento está impreso o grabado a un lado de los objetivos y oculares o en la
parte superior en el caso de los oculares. Este aumento se simboliza con un número seguido de
una “X” (ejemplo, 15X) Los microscopios de disección pueden presentar lentes adicionales
(referidos también como lentes auxiliares o suplementarios), en la base de la cubierta de los
objetivos, para incrementar el tamaño de la observación. Anote si su microscopio de disección
presenta estos lentes auxiliares. Además pueden tener también un botón que aumenta la imagen
al moverse. Note que este botón presenta una numeración indicando el aumento que se esta
utilizando.

Algunos microscopios compuestos a menudo presentan objetivos que sólo pueden ser utilizados
con aceite de inmersión. Estos objetivos se identifican por tener grabada la palabra oil (aceite, en
inglés) en un lado, cerca del número que indica el aumento del objetivo. Estos objetivos no
pueden ser utilizados sin el aceite de inmersión. Los otros objetivos no deben ser usados con
aceite de inmersión ya que se pueden dañar si son inmersos en este aceite. El uso de lentes de
inmersión es esencial cuando se observan estructuras menores de 10 µm de tamaño. Por ejemplo,
este aumento se requiere cuando se requiere determinar la forma de una célula bacteriana. El
aceite de inmersión no incrementa el aumento de los lentes, pero mejora la resolución y la nitidez
de la imagen producida por dicho objetivo. Cuando la luz pasa a través de un material a otro, por
ejemplo del vidrio al aire, la luz se refracta o distorsiona. La luz de diferentes longitudes de onda se
inclina a diferentes ángulos. Estas refracciones dan como resultado una distorsión la cual se
manifiesta más a medida que el aumento del lente es mayor. Al colocar una gota de aceite de
inmersión, el cual tiene el mismo índice de refracción que el vidrio, entre el objetivo de 100X y el
portaobjetos (placa) se reduce significativamente la dispersión de la luz que ocurriría sino se utiliza
el aceite de inmersión. Por ello, se incrementa la resolución de la imagen.

Para determinar el aumento de cualquier imagen se necesita multiplicar el aumento del ocular por
el aumento del objetivo. Si existen lentes auxiliares en un microscopio de disección, el aumento
debe ser multiplicado por el del ocular y el del objetivo. Es importante anotar los diferentes
aumentos utilizados para poder comparar el tamaño relativo de las imágenes que se observen. En
muchos casos se requerirá de usar uno o varios aumentos para observar todos los detalles de la
muestra.

AJUSTE DE LAS PIEZAS OCULARES.

Se requieren de varios ajustes antes de observar a los especimenes. En microscopios bioculares
(con dos oculares) la distancia entre ellos se debe ajustar acorde a su distancia interpupilar y con
ambos ojos observar una sola imagen. Existen diferentes formas de ajustar la distancia,
dependiendo del microscopio que se este utilizando. En algunos microscopios existe un botón
entre los oculares que ajusta la distancia entre éstos. (Figura 5A). Otros microscopios se ajustan
moviendo los oculares (Figura 5B). Dicho ajuste es específico para cada persona, por ello se
requieren de ajuste mínimos cuando una persona ha utilizado previamente el microscopio. Haga
este ajuste previo a iniciar la observación. Los diferentes ajustes son necesarios para una mejor
observación y que no se presenten incomodidades y fatiga de sus ojos al efectuar las
observaciones pertinentes. Este procedimiento de ajuste se realiza una vez se vaya a iniciar la
observación de la placa correspondiente.

COLOCACIÓN Y ENFOQUE DE ESPECÍMENES EN UN PORTAOBJETOS.

Lo primero que se debe considerar es la colocación de la placa y el enfoque. Para proceder se
obtiene una letra "e" que se proveerá al inicio. Después de enfocar la letra "e", se iniciará la
ilustración respecto al movimiento y orientación del material a observar en la placa.

1. Corte alrededor de 0.5 centímetros alrededor de la letra "e".

2. Coloque una gota de agua sobre el portaobjetos y marque uno de los dos lados largos del
mismo.

3. Coloque la letra "e" sobre el portaobjetos de modo que la parte superior de la letra esté
en dirección a la marca en el portaobjetos.

4. Con un cubreobjetos sostenido con los dedos por los bordes, coloque uno de los bordes
cercano a la letra "e" y suavemente deje caer el otro extremo del cubreobjetos sobre la
letra "e", de modo que le agua de la gota se disemine debajo del cubreobjetos. Seque
cualquier exceso de agua con papel toalla. La letra "e" debe de esta manera permanecer
en posición para ser observada con su microscopio.

5. Asegúrese de que su microscopio compuesto este en posición de poder realizar una

observación adecuada a través de los oculares, según sea necesario. Además debe estar
conectada la fuente lumínica o si la luz está incorporada en el microscopio, el mismo este
conectado y encendido. Tenga cuidado de que el cordón eléctrico esté en una posición
que no interrumpa el paso ni la observación de otros.

6. Levante el cabezal utilizando el tornillo macrométrico para iniciar la observación (Figura 6).
En algunos casos la platina es la que se mueve y no el cabezal.

7. Rote el revólver para iniciar la observación con el objetivo de menor aumento, usualmente
4x o 10x, según sea el caso.

8. Usando la manija de abertura del diafragma, abra el mismo a aproximadamente la mitad

de su capacidad de abertura. (Figura 8).

9. Coloque la placa sobre la platina con la marca en la placa a su lado opuesto. Coloque la
letra "e" directamente por encima del centro del condensador que se encuentra ubicado
 debajo de la platina y que puede ser observado a través de la abertura que presenta la
platina.

10. Utilizando el botón respectivo, levante el condensador, hasta que la punta del mismo se
encuentre a una distancia de la placa de aproximadamente el grosor de una lámina de
papel toalla. (Figura 9).

11. Rote el tornillo micrométrico a una posición aproximada de su punto medio. (Figura 10).

12. Rote el tornillo macrométrico hasta que la placa casi toque el objetivo. Asegúrese de
observar desde lado del microscopio mientras alcanza la distancia de observación. No se
recomienda forzar el objetivo dentro de la placa ya que la rompería o más importante aún
se dañaría el objetivo.

13. Utilizando su ojo y ocular derecho, suavemente mueve el tornillo macrométrico hasta que
este enfocada la letra “e”. Ajuste su visión hasta observar el mejor enfoque posible.

14. Luego use el tornillo micrométrico hasta obtener la imagen más nítida posible. (Figura 10).
Si más de un apersona está utilizando el microscopio, cada una de ellas necesitará de
efectuar este ajuste en su visión.

15. Sin mover el enfoque efectuado con el ojo derecho, observe la letra “e” con el ojo y ocular
izquierdo. Use el ajuste de dioptría moviendo en sentido contrario a las manecillas del
reloj, del ojo izquierdo hasta que se observe fuera de foco la letra “e”. Posterior a ello,
mueve el ajuste de dioptría en sentido de las manecillas del reloj hasta que se obtenga un
enfoque nítido. Este ajuste reducirá el agotamiento del ojo.

16. Ahora se procederá a efectuar las observaciones de su espécimen

17. Para incrementar el aumento se procede como sigue: Asegúrese de que su muestra está
enfocada correctamente con el objetivo de más bajo poder utilizado en un momento
dado.

18. Mientras observa el objetivo, asegúrese de que su movimiento no toque la placa y se

deslice adecuadamente, mueve el revólver al siguiente objetivo de superior aumento y
que esté en la posición correcta sobre la muestra. La mayoría de los microscopios tienen
posiciones en donde el objetivo, si está colocado adecuadamente, hace un ruido seco o
chasquido. Si la luz no se observa o el círculo de luz no está centrado, coloque el revólver
en la posición correcta.

19. Use el tornillo micrométrico para que sea nítida su observación. No debiera tener que
utilizar el tornillo macrométrico, si el enfoque anterior fue el adecuado.

20. Si se necesita incrementar los aumentos se repiten los pasos 17 a 19.

 21. Si se necesita usar aceite de inmersión, se requiere usar una gota del mismo en la placa,
en el sito que se desea observar. (Aceite mineral u otros aceites no deben ser utilizados).
Al mover el revólver hacia la posición del objetivo de inmersión, deténgase a media
distancia entre el objetivo anterior y el de inmersión.

22. Añada la gota de aceite de inmersión sobre el centro de la placa en observación.

23. Mueve el revólver de manera que el objetivo de inmersión esté directamente sobre la
placa. La gota de aceite de inmersión debe formar un “puente” entre el objetivo y la placa.

24. Use el tornillo micrométrico para observar una imagen nítida de su muestra.

25. Tal vez se requiera de ajustar el condensador, incrementando o disminuyendo la cantidad

de luz que proviene del condensador utilizando la manija del diafragma. (Figura 8).

26. Nota importante: Asegúrese de que los otros objetivos no se impregnen de aceite de
inmersión, ya que se pueden dañar.

27. Cuando termine la observación con el lente de inmersión, levante el cabezal o baje la
platina, según sea el caso de acuerdo a su microscopio, limpie de inmediato el objetivo del
aceite adherido y remueva la placa con el aceite. Limpie el aceite de las placas si se van a
volver a utilizar o si son placas permanentes de laboratorio. Los objetivos se pueden
limpiar con papel de lente u agua destilada. Solamente use papel de lente para limpiar los
objetivos ya que otros materiales como, papel toalla, toallitas, otros, pueden dañarlos.

28. Cada vez que se requiera de remover una placa, siempre levante el cabezal o baje la
platina, para posteriormente remover la placa observada. Para evitar que de manera
descuidada se dañe el objetivo al rozarlo con la placa.

vi. Resultados.

Los estudiantes identifican las partes del microscopio compuesto en el laboratorio de citología e
histología aplicada.

vii. Cuestionario o Trabajo Práctico:

Los estudiantes deben dibujar cada parte del microscopio indicando su función.

1. ¿Cuál es la función de cada parte del microscopio? Explique sobre la base de dibujo

2. ¿Cuál es el objetivo de tener orden, cuidado y limpieza del microscopio?

3. Explica cuál es la utilidad de tener un correcto ajuste en el microscopio.

5. Explica cómo se obtiene el aumento al que se están haciendo las observaciones.

7. Investiga sobre la historia y descubrimiento del microscopio.