Documentos de Académico
Documentos de Profesional
Documentos de Cultura
CAPÍTULO II
Sistema genético mitocondrial humano
Departamento de Bioquímica y Biología Molecular y Celular, Universidad de Zaragoza. Miguel Servet 177. 50013
Zaragoza., España. lopezper@posta.unizar.es
RESUMEN
Las mitocondrias son los orgánulos subcelulares encargados de la producción de energía en forma
de ATP. Contienen su propio sistema genético con ADN mitocondrial que codifica un número
pequeño de polipéptidos que forman parte de la cadena respiratoria junto con proteínas
mitocondriales codificadas en el núcleo. Para la biogénesis de la mitocondria se requiere la
expresión coordinada de los dos sistemas genéticos, el nuclear y el mitocondrial. Los genes están
dispuestos en el ADN mitocondrial de manera muy compacta con los tARNs intercalados entre los
genes de los rARNs y los codificantes de proteínas. Esta organización génica se ve también
reflejada en su modo de expresión y en las características singulares de los ARNs. Las dos cadenas
del ADN mitocondrial se transcriben completamente en forma de tres moléculas policistrónicas que
se procesan posteriormente por enzimas específicos que cortan en los extremos 5' y 3' de los tARNs
para originar los rARNs, mARNs y tARNs maduros. La mitocondria posee asimismo su propia
maquinaria para la síntesis de las proteínas codificadas en su genoma. El ADN mitocondrial difiere
del nuclear en una serie de características. En especial, el genoma mitocondrial se hereda
exclusivamente de la madre que lo transmite a todos sus hijos. Este ADN tiene tendencia a mutar y
a fijar estas mutaciones en variantes genéticas poblacionales por lo que se está utilizando para
estudiar la filogenia y estructura de poblaciones.
CAPÍTULO
II
31
INTRODUCCIÓN
Las mitocondrias son orgánulos subcelulares con doble membrana que se encuentran
prácticamente en todas las células eucariotas y cuya función principal es la de llevar a cabo
el metabolismo oxidativo con la consiguiente producción de energía en forma de ATP. En
este proceso, conocido como fosforilación oxidativa (sistema OXPHOS), participan una
serie de complejos enzimáticos (complejos I al V) que proporcionan la mayor parte del ATP
celular. Además, estos orgánulos participan también en la biosíntesis de otros componentes
celulares: pirimidinas, aminoácidos, fosfolípidos, nucleótidos, ácido fólico, hemo, urea y
una gran variedad de metabolitos (1).
Una de las características mas sorprendentes del ADN mitocondrial es que presenta
una organización genética extremadamente compacta. Como se puede observar en la
Figura 1 donde se muestra el mapa genético y de transcripción del ADN mitocondrial
humano, éste se encuentra prácticamente saturado por genes. La cadena pesada (H) del
ADN codifica los 2 rARNs, 14 tARNs y 12 polipéptidos, mientras que la cadena ligera (L)
contiene solamente información para 8 tARNs y un polipéptido (ND6). La única zona del
ADN que no codifica ningún gen es un pequeño fragmento que corresponde al 7% del
ADN, localizado alrededor del origen de replicación de una de las cadenas y que incluye el
bucle de desplazamiento (bucle D). Todos estos genes carecen de intrones. Los genes, en la
cadena pesada, se disponen uno a continuación del otro, sin tramos no codificantes
intermedios (16). Además, la mayor parte de genes codificantes de proteínas carecen de un
codon de terminación. Estos presentan una T o TA después del último codon con sentido y
preceden al extremo 5' del gen adyacente. El codon de terminación UAA del mARN se
CAPÍTULO
II
33
forma postranscripcionalmente por poliadenilación del extremo 3' como veremos mas
adelante.
34
CAPÍTULO
II
La elongación de la cadena H hija lo hace de forma unidireccional a lo largo de la
cadena L, al tiempo que desplaza la cadena H parental. La replicación de la cadena L
requiere la acción de una primasa específica y solo comienza cuando el desplazamiento de
la cadena H ha dejado la zona del origen de replicación OL como cadena sencilla. La
síntesis de la cadena ligera hija termina después que la de la cadena pesada (22,25,26)).
Estos modelos se deben al trabajo del grupo Holt mediante estudios con
electroforesis bidireccional en agarosa. En ellos se observaba la presencia de intermediarios
de replicación de doble cadena procedente de un único punto de replicación conocido como
OriZ diferente en posición al OH y OL del modelo anterior. La replicación era bidireccional
(27-31).
Nucleoides
CAPÍTULO
II
35
mitocondrial humano que han sido aislados incluyen los 2 rARNs (rARN 12S y 16S), un
ARN precursor de los mismos, 22 tARNs y 18 ARNs poliadenilados en el extremo 3'
(poli(A)-ARNs), la mayoría de los cuales corresponden a los ARN mensajeros (mARNs)
(34,35). La mayor parte de los ARNs maduros corresponden a un único gen. Solamente dos
de ellos, los mARNs de los genes para las subunidades 6 y 8 de la ATP sintasa y ND4 y 4L,
contienen dos genes cada uno con el marco de lectura solapado. Los tres poli(A)-ARNs
mayores (ARNs 1, 2 y 3), el menor (ARN 18) y 8 tARNs son productos de transcripción de
la cadena ligera del ADN mitocondrial mientras que el resto de los ARNs lo son de la
cadena pesada (Figura 1).
36
CAPÍTULO
II
Figura 1.- Mapa genético y de transcripción del ADN mitocondrial humano
Los dos círculos interiores representan las dos cadenas del ADN mitocondrial con los genes
que codifican: rARNs (rARNs 12 S y 16 S), tARNs, indicados con la abreviatura del
aminoácido que les corresponde, y secuencias codificadoras de proteínas (ND: subunidades
de NADH deshidrogenas; cyt b: apocitocromo b; CO: subunidades citocromo C oxidasa).
La posición de los ARNs está indicada en los círculos exteriores con barras negras
(transcritos de la cadena pesada) y con barras abiertas (transcritos de la cadena ligera). H1,
H2 y L indican los lugares de iniciación de la transcripción de la cadena pesada y ligera,
respectivamente. OH y OL simbolizan el origen de replicación de la cadena pesada y ligera.
Las flechas exteriores indican la dirección de la transcripción de la cadena pesada y ligera
respectivamente. Las flechas al lado de OH y de OL muestran la dirección de síntesis de la
cadena pesada y ligera.
CAPÍTULO
II
37
El ADN mitocondrial humano contiene 13 genes que codifican polipéptidos con un
tamaño que varía de 70 a 610 aminoácidos. En las mitocondrias de células HeLa se han
aislado e identificado, entre los poli(A)-ARNs, 10 mARNs que corresponden a los 12
polipéptidos codificados en la cadena pesada (dos de ellos contienen 2 marcos de lectura
solapados). Estos mARNs contienen exclusivamente la secuencia del patrón de traducción y
una cola de unos 55 adenosinas en el extremo 3'. Los mARNs mitocondriales humanos
comienzan directamente por el codon de iniciación AUG, AUA o AUU o tienen muy
pocos nucleótidos (1 a 3) delante de los mismos. Carecen por tanto de uno de los caracteres
típicos de los mARN de otros sistemas, como es la presencia de un tramo no codificante en
el extremo 5' (40). Tampoco contienen la estructura "cap" en el extremo 5' (41). Asimismo,
el extremo 3' de la mayor parte de los mARNs carecen de una región no codificante y
finalizan con un codon de terminación incompleto U o UA (42). La poliadenilación juega
un papel muy importante y, en particular, la adición postranscripcional de la cola de poli(A)
genera en la mayor parte de los casos el codon de terminación UAA. No existe ninguna
secuencia en común cerca del extremo 3' que pueda actuar como señal de la
poliadenilación, como sucede en los mARN nucleares.
38
CAPÍTULO
II
La síntesis de ARN se inicia en tres lugares diferentes, uno en la cadena ligera (L) y
dos en la cadena pesada (H1 y H2), situados cerca del origen de replicación, dando lugar a
dando lugar a tres moléculas policistrónicas largas que se procesan posteriormente por
cortes endonucleolíticos precisos delante y detrás de los tARNs, dando lugar a los rARNs,
tARNs y mARNs maduros (23,34,40,42). De acuerdo con este modelo que se denomina de
"puntuación por el tARN", las secuencias de los tARNs situadas entre los genes de los
rARNs y mARNs, actúan como señales de reconocimiento para los enzimas de
procesamiento al adquirir la configuración en hoja de trébol en las cadenas nacientes de
ARN. Para la transcripción del mtADN se requiere una ARN polimerasa (43) y dos factores
de iniciación de la transcripción (mtTFA y mtTFB) (44-46).
El código genético utilizado por la mitocondria para traducir sus genes presenta
algunas diferencias muy significativas con respecto al código universal. Así, el codon UGA
codifica triptófano en lugar de ser uno de los codones de terminación. Asimismo, la
mitocondria humana, además de AUG, utiliza AUA y AUU como codones de iniciación,
mientras que AGA y AGG, codones de arginina en el código universal, son señales de
terminación. Reciente mente se ha propuesto que los codones AGA y AGG no actúan
directamente como codones de terminación sino que producen un movimiento del ribosoma
de un nucleótido hacia atrás encontrándose entonces con un codon de terminación
característico del código universal (53).
GENETICA MITOCONDRIAL
40
CAPÍTULO
II
Figura 3.- Modelos de replicación
CAPÍTULO
II
41
con las moléculas de ADN normal y no se manifestará el defecto genético. Sin embargo, al
aumentar el porcentaje de ADN mutado se hará patente un fenotipo patogénico. Es decir, el
fenotipo se manifiesta de acuerdo con un efecto umbral. Si la producción de ATP llega a
estar por debajo de los mínimos de energía necesarios para el funcionamiento de los tejidos
debido a la presencia de mitocondrias defectuosas se produce la aparición de la
patogenicidad.
AGRADECIMIENTOS
1. Attardi G, Schatz G (1988) Biogenesis of Mitochondria. Ann. Rev. Cell Biol. 4, 289-333.
2. Ephrussi B, Hottinguer H, Tavlitzki J (1949) Action de l'acriflavine sur les levures. II. Etude
genetique du mutant "petite colonie". Ann. Ins. Pasteur 76, 351-367.
3. Nass MMK, Nass S (1963) Intramitochondrial fibers with DNA characteristics. J. Cell. Biol. 19, 593-
629.
4. Montoya J, Attardi G (1986) ADN Mitocondrial Humano. Investigación y Ciencia 118, 60-69.
5. Montoya J, Play‡n A, Solano A, Alcaine MJ, López- Pérez MJ, Pérez-Martos A (2000) [Diseases of
mitochondrial DNA]. Rev. Neurol. 31, 324-333.
6. Montoya J, Lopez-Perez MJ, Ruiz-Pesini E (2006) Mitochondrial DNA transcription and diseases:
Past, present and future. Biochim Biophys Acta 1757, 1179-1189.
7. Montoya J, Lopez-Gallardo E, Diez-Sanchez C, Lopez-Perez MJ, Ruiz-Pesini E (2009) 20 years of
human mtDNA pathologic point mutations: Carefully reading the pathogenicity criteria. Biochim
Biophys Acta 1787, 476-483.
8. Montoya J, Lopez-Gallardo E, Herrero-Martin MD, Martinez-Romero I, Gomez-Duran A, Pacheu
D, Carreras M, Diez-Sanchez C, Lopez-Perez MJ, Ruiz-Pesini E (2009) Diseases of the human
mitochondrial oxidative phosphorylation system. Adv Exp Med Biol 652, 47-67.
9. Montoya J, López-Gallardo E, Ruiz-Pesini E (2010) Diagnóstico genético de enfermedades
metabólicas producidas por alteración del ADN mitocondrial. En: (Eds) Sanjurjo P, Baldellou
A.Madrid Ergon 639-656.
10. Wallace DC, Singh G, Lott MT, Hodge JA, Schurr TG, Lezza AMS, II LJE, Nikoskelainen EK
(1988) Mitochondrial DNA mutation associated with Leber's hereditary optic neuropathy. Science
242, 1427-1430.
11. Holt IJ, Harding AE, Morgan-Hughes JA (1988) Deletions of muscle mitochondrial DNA in patients
with mitochondrial myopathies. Nature 331, 717-719.
12. Zeviani M, Moraes CT, DiMauro S, Nakase H, Bonilla E, Schon E, Rowland LP (1988) Deletions of
mitochondrial DNA in Kearns-Sayre syndrome. Neurology 38, 1339-1346.
13. Wallace DC (2005) Mitochondria and cancer: Warburg addressed. Cold Spring Harb Symp Quant
Biol 70, 363-374.
14. Wallace DC (2009) Mitochondria, Bioenergetics, and the Epigenome in Eukaryotic and Human
Evolution. Cold Spring Harb Symp Quant Biol.
15. Wallace DC (2010) Mitochondrial DNA mutations in disease and aging. Environ Mol Mutagen 51,
440-450.
CAPÍTULO
II
43
16. Anderson S, Bankier AT, Barrell BG, de-Bruijn MHL, Coulson AR, Drouin J, Eperon IC, Nierlich
DP, Roe BA, Sanger F, Schreier HP, Smith AJH, Stader R, Young IG (1981) Sequence and
organization of the human mitochondrial genome. Nature 290, 427-465.
17. Andrews RM, Kubacka I, Chinnery PF, Lightowlers RN, Turnbull DM, Howell N (1999) Reanalysis
and revision of the Cambridge reference sequence for human mitochondrial DNA. Nat Genet 23,
147.
18. Mariottini P, Chomyn A, Attardi G, Trovato D, Srong DD, Doolittle R (1983) Antibodies against
synthetic peptides reveal that the unidentified reading frame A6L, overlapping the ATPase gene, is
expressed in human mitochondria. Cell 32, 1269-1277.
19. Mariottini P, Chomyn A, Riley M, Cottrell B, Doolittle RF, Attardi G (1986) Identification of the
polypeptides encoded in the unassigned reading frames 2, 4, 4L of human mitochondrial DNA. Proc.
Natl. Acad. Sci. USA 83, 1563-1567.
20. Chomyn A, Mariottini P, Cleeter MWJ, Ragan CI, Doolittle RF, Matsuno-Yagi A, Hatefi Y, Attardi
G (1985) Functional assignment of the products of the unidentified reading frames o human
mitochondrial DNA. En: (Eds) Functional assignment of the products of the unidentified reading
frames o human mitochondrial DNA. Quagliarello E, Slater EC, Plamieri F, Saccone C, Kroon
AM.Amsterdam Elsevier Sciences 259-275.
21. Kasamatsu H, Vinograd J (1974) Replication of circular DNA in eukaryotic cells. Ann. Rev.
Biochem. 43, 695-719.
22. Clayton DA (1982) Replication of animal mitochondrial DNA. Cell 28, 693-705.
23. Montoya J, Christianson T, Levens D, Rabinowitz M, Attardi G (1982) Identification of Initiation
Sites for Heavy Strand and Light Strand Trascription in Human Mitochondrial DNA. Proc. Natl.
Acad. Sci. USA 79, 7195-7199.
24. Crews S, Ojala D, Posakony J, Nishiguchi J, Attardi G (1979) Nucleotide sequence of a region of
human mitochondrial DNA containing the preciselly identified origin of replication. Nature 277, 192-
198.
25. Clayton DA (1991) Replication and Transcription of Vertebrate mitochondrial DNA. Annu. Rev.
Cell. Biol. 7, 453-478.
26. Shadel GS, Clayton DA (1997) Mitochondrial DNA maintenance in vertebrates. Annu Rev Biochem
66, 409-435.
27. Holt IJ, Lorimer HE, Jacobs HT (2000) Coupled leading- and lagging-strand synthesis of mammalian
mitochondrial DNA. Cell 100, 515-524.
28. Bowmaker M, Yang MY, Yasukawa T, Reyes A, Jacobs HT, Huberman JA, Holt IJ (2003)
Mammalian mitochondrial DNA replicates bidirectionally from an initiation zone. J Biol Chem 278,
50961-50969.
44
CAPÍTULO
II
29. Yasukawa T, Yang MY, Jacobs HT, Holt IJ (2005) A bidirectional origin of replication maps to the
major noncoding region of human mitochondrial DNA. Mol Cell 18, 651-662.
30. Yasukawa T, Reyes A, Cluett TJ, Yang MY, Bowmaker M, Jacobs HT, Holt IJ (2006) Replication of
vertebrate mitochondrial DNA entails transient ribonucleotide incorporation throughout the lagging
strand. Embo J 25, 5358-5371.
31. Reyes A, Yasukawa T, Cluett TJ, Holt IJ (2009) Analysis of mitochondrial DNA by two-dimensional
agarose gel electrophoresis. Methods Mol Biol 554, 15-35.
32. Garrido N, Griparic L, Jokitalo E, Wartiovaara J, van der Bliek AM, Pelbrink JN (2003)
Composition and dynamics of human mitochondrial nucleoids. Mol Biol Cell 14, 1583-1596.
33. Bogenhagen DF, Rousseau D, Burke S (2007) The layered structure of human mtDNA nucleoids. J
Biol Chem.
34. Montoya J, Gaines GL, Attardi G (1983) The Pattern of Transcription of the Human Mitochondrial
rRNA Genes Reveals Two Overlaping Transcription Units. Cell 34, 151-159.
35. Attardi G (1983) RNA Synthesis and processing in mitochondria. En: (Eds) RNA Synthesis and
processing in mitochondria. Apirion D.Boca Raton, Florida CRC Press 227-280
36. Crews S, Attardi G (1980) The sequences of the small ribosomal RNA gene and the phenylalanine
tRNA gene are joined end to end in human mitochondrial DNA. Cell 19, 775-784.
37. Dubin DT, Montoya J, Timko KD, Attardi G (1982) Sequence Analysis and Precise Mapping of the
3`-ends of HeLa Cell Mitochondrial Ribosomal RNAs. J. Mol. Biol. 157, 1-19.
38. Arcari P, Brownlee GG (1980) The nucleotide sequence of a small (3S) seryl-tRNA (anticodon GCU)
from beef heart mitocondria. Nucleic Acids. Res. 8, 5207-5212.
39. Bruijn MHLd, Schreier PH, Eperon IC, Barrell BG (1980) A mammalian mitochondrial serine
transfer RNA lacking the "dihydrouridine" loop and stem. Nucl. Acids Res. 8, 5212-5222.
40. Montoya J, Ojala D, Attardi G (1981) Distinctive features of the 5`-terminal sequences of the human
mitochondrial mRNAs. Nature 290, 465-470.
41. Grohmann K, Amalric F, Crews S, Attardi G (1978) Failiure to detect "cap" structures in
mitochondrial DNA-coded poly(A)-containing RNA from HeLa cells. Nucl. Acids Res. 5, 637-651.
42. Ojala D, Montoya J, Attardi G (1981) tRNA punctuation model of RNA processing in human
mitochondria. Nature 290, 470-474.
43. Tiranti V, Savoia A, Forti F, DApolito MF, Centra M, Racchi M, Zeviani M (1997) Identification of
the gene encoding the human mitochondrial RNA polymerase (h-mtRPOL) by cyberscreening of the
expressed sequence tags database. Hum Mol Genet 6, 615-625.
44. Fisher RP, Clayton DA (1985) A transcription factor required for promoter recognition by human
mitochondrial RNA polymerase. J Biol Chem 260, 11330-11338.
CAPÍTULO
II
45
45. Fisher RP, Clayton DA (1988) Purification and characterization of human mitochondrial
transcription factor 1. Mol Cell Biol 8, 3496-3509.
46. Falkenberg M, Gaspari M, Rantanen A, Trifunovic A, Larsson NG, Gustafsson CM (2002)
Mitochondrial transcription factors B1 and B2 activate transcription of human mtDNA. Nat Genet
31, 289-294.
47. Kruse B, Narasimhan N, Attardi G (1989) Termination of transcription in human mitochondria:
identification and purification of a DNA binding protein factor that promotes termination. Cell 58,
391-397.
48. Daga A, Micol V, Hess D, Aebersold R, Attardi G (1993) Molecular Characterization of the
Transcription Termination Factor from Human Mitochondria. J Biol Chem 268, 8123-8130.
49. Fernandez-Silva P, Martinez-Azorin F, Micol V, Attardi G (1997) The human mitochondrial
transcription termination factor (mTERF) is a multizipper protein but binds to DNA as a monomer,
with evidence pointing to intramolecular leucine zipper interactions. EMBO J 16, 1066-1079.
50. Jimenez-Menendez N, Fernandez-Millan P, Rubio-Cosials A, Arnan C, Montoya J, Jacobs HT,
Bernado P, Coll M, Uson I, Sola M (2010) Human mitochondrial mTERF wraps around DNA
through a left-handed superhelical tandem repeat. Nat Struct Mol Biol
51. O'Brien TW (2003) Properties of human mitochondrial ribosomes. IUBMB Life 55, 505-513.
52. Matthews DE, Hessler RA, Denslow ND, Edwarsds JS, O`Brien TW (1982) Protein composition of
the bovine mitochondrial ribosome. J. Biol. Chem. 257, 8788-8794.
53. Temperley R, Richter R, Dennerlein S, Lightowlers RN, Chrzanowska-Lightowlers ZM (2010)
Hungry codons promote frameshifting in human mitochondrial ribosomes. Science 327, 301.
54. Boynton J, Gilham N, Lambowitz A (1980)? En: (Eds)? Chambliss G, Craven G, Dovies J, Davis K,
Kaban L, Nomura M.Baltimore Univ. Park Press. 903-950
55. HsuChen CC, Cleaves GR, Dubin DT (1983) A major lysine tRNA with a CUU anticodon in insect
mitochondria. Nucl. Acids Res. 11, 8659-8662.
56. Brown WM, George JM, Wilson AC (1979) Rapid evolution of animal mitochondrial DNA. Proc.
Natl. Acad. Sci. USA 76, 1967-1971.
57. Ozawa T (1997) Genetic and functional changes in mitochondria associated with aging. Physiol Rev
77, 425-464.
58. Wallace DC (1994) Mitochondrial DNA sequence variation in human evolution and disease. Proc
Natl Acad Sci USA 91, 8739-8746.
59. Stoneking M, Soodyall H (1996) Human evolution and the mitochondrial genome. Curr Opin Genet
Develop 6, 731-736.
46 CAPÍTULO II