BENEMÉRITA UNIVERSIDAD

AUTÓNOMA DE PUEBLA

FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICAS

LICENCIATURA EN QUIMICO FARMACOBIOLOGO

LABORATORIO DE QUIMICA BIOINORGANICA

NÚMERO DE EQUIPO:

NOMBRE DE LOS MIEMBROS DEL EQUIPO:

FECHA DE REALIZACIÓN DE LA PRÁCTICA

3 DE NOVIEMBRE DEL 2022

FECHA DE ENTREGA DEL REPORTE

11 DE NOVIEMBRE DEL 2022

ALGUNOS PIGMENTOS NATURALES

INTRODUCCION
La mayoría de las plantas terrestres presentan dos formas de clorofilas denominadas
Chl a y Chl b. La diferencia entre ambas clorofilas es que Chl a presenta un grupo
metilo en el perímetro del anillo tetrapirrólico, mientras que en Chl b este grupo ha sido
oxidado para formar un grupo formol (-CH=O), también conocido como grupo formilo.
Tal diferencia permite que las clorofilas a y b absorban luz de longitudes de onda
ligeramente diferentes dentro del espectro visible.
Cuando vemos la luz reflejada o transmitida por las hojas de las plantas, las
percibimos de un color verde. Esto se debe a que las clorofilas, que son los principales
pigmentos de las hojas, no absorben fotones en la región verde del espectro, siendo
éste el color que se refleja o se transmite. Entonces absorbe principalmente luz violeta
roja y azul por lo que refleja el color verde.
La extracción de y reconocimiento de estos pigmentos es interesante para el
estudio y conocimiento de sus propiedades, por lo que existen técnicas para distintos
tipos de observación, como lo es la cromatografía, estas para el análisis y purificación
de los productos de reacción son ampliamente utilizadas. Todas las técnicas
cromatográficas dependen de dos fases inmiscibles: una fase móvil, que trasporta las
sustancias que se separan y que progresa en relación con la otra fase, llamada face
estacionaria.
En el caso de esta práctica se realizará una cromatografía de tipo adsorción,
dentro de esta tecnica pueden diferenciarse dos tipos, denominadas cromatografía de
columna y cromatografía de capa fina. Para la cromatografía de columna se emplean
columnas verticales cerradas en su parte inferior con una llave que permita su
regulación del flujo de la fase móvil. Las columnas se llenan con un adsorbente, mojado
con el disolvente que se vaya a emplear en el proceso cromatográfico.
Como método de identificación uno de los más sencillos, accesibles, utiles y
utilizados es la espectroscopia y la espectroscopia UV. Se pueden identificar y
cuantificar biomoléculas en solución y muestras biológicas.

OBJETIVOS
 El estudiante: Aislará y caracterizará mediante espectroscopía ultravioleta-visible
a una clorofila. Determinará mediante espectroscopía ultravioleta-visible la
 influencia de la sustitución del ión magnesio por otros iones metálicos en el anillo
de la clorofila.
 Aislará y caracterizará mediante espectroscopía de UV-Vis a otras moléculas
similares a la clorofila como son la hemoglobina y la vitamina B12.

MATERIALES Y REACTIVOS
 Mortero  Papel aluminio  Solución
 Vasos de  Regla y lápiz concentrada de
precipitados de  Gis blanco una sal de cobre
50 ml  Hojas maduras (II)
 Vaso de de vegetales  Ácido acético al
precipitado de verdes 10%
250 Ml  Acetona al 80%  Solución de
 Espátula  Éter etílico elución =
Lámpara de  Ácido éterde
luz Ultravioleta clorhídrico al 0.1 petróleo:acetona
 4 tubos de N :n-propanol
ensaye  Solución (90:10:0.5)
 Pipeta Pasteur concentrada de
 Papel filtro una sal de Zinc
DESARROLLO DE LA PRACTICA
1. Despedace finamente una hoja de acelga o cualquier otra hoja verde tierna.
2. Macháquela en un mortero con un poco de acetona al 80%. Decante la
mezcla. El extracto es una mezcla impura de clorofila a y b. Coloque el
extracto obtenido ante una lámpara de luz UV.
3. Anote sus observaciones
4. SEPARACIÓN DE LAS CLOROFILAS. Marque en el gis una escala de 0.5
en 0.5cm comenzando a aproximadamente 6mm del extremo grueso.
5. Con una pipeta Pasteur coloque una pequeña franja del extracto de clorofila
justo sobre la marca inicial del gis y déjelo secar.
6. Prepare una cámara de elución colocando en el vaso de precipitados de 10 a
15 ml de la mezcla de elución, coloque la tira de papel filtro dentro del vaso
y sobre las paredes. Introduzca con cuidado el gis con la muestra seca a la
cámara de elución.
7. Tape la cámara de elución con el papel aluminio el cual tendrá una
perforación para detener al gis. Cada tres minutos anote la distancia
recorrida por cada uno de los componentes de la muestra.
8. Registre el gráfico correspondiente tiempo contra distancia de
desplazamiento.
9. Pare el desarrollo de la cromatografía cuando el efluente se encuentre a
0.5cm del límite superior del gis.

OBSERVACIONES Y RESULTADOS
ANALIZADOS

TIEMPO DISTANCI
A
0.14 0.5
0.3 1.5
1 2
1.4 2.5
2.35 3
5.25 3.5
7.05 4
8.14 4.5
9 5

Curba
6
5
5 4.5
4
4 3.5
3
Distancia

3 2.5
2
2 1.5

1 0.5

0
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10
Tiempo
 Ilustración 1Ultravioleta se puede distinguir como absorbe el verde

el orden en que se fluyen los pigmentos es de

forma inversa a su polaridad, es decir, los más
polares quedan retenidos cerca de la línea de
aplicación mientras que los menos polares, cerca
de la línea de máxima altura del eluyente.

CONCLUSIÓN
Logramos identificar la clorofila de las espinacas que ocupamos en
esta ocasión, también pudimos observar los diferentes tipos de
clorofila con la vista, gracias a la cromatografía que separaba los
diferentes componentes y nos daba un color variante dependiendo
del componente que se observaba. Otro hecho importante que
logramos ver fue, el como las diferentes longitudes de onda tienen
efecto en los colores que vemos, porque fue muy diferente ver la
clorofila con luz del sol que con la luz ultravioleta.
CUESTIONARIO
1. ¿Cuál es el papel del magnesio en la fotosíntesis?
Las clorofilas a y b se encuentran en casi todos los organismos fotosintéticos que
generan oxígeno. Tienen una estructura cíclica compleja (llamada porfirina) con un
ion Mg2+ en su centro. La clorofila a tiene un grupo metilo unido con el anillo II
de la porfirina, mientras que la clorofila b tiene un grupo aldehído unido con el
mismo sitio. La feofitina a tiene estructura similar a la clorofila a. El ion Mg2+ se
sustituye por dos protones. Las clorofilas a y b y la feofitina a tienen una cadena
fitol esterificada con la porfirina. La cadena fitol se extiende y fija la molécula con
la membrana. La luteína y el caroteno β son los carotenoides más abundantes en las
membranas tilacoides, Mg2+: Varias enzimas fotosintéticas (p. ej., fructosa-1,6-
bifosfatasa) se activan con Mg2+. La luz induce un
aumento en la concentración estromal de Mg2+ de 1 a
3 mM hasta cerca de 3 a 6 mM. (Recuerde que el
Mg2+ se desplaza a través de la membrana tilacoide
hacia el estroma durante las reacciones a la luz.).
También es el componente estructural de los
ribosomas, donde se empieza la síntesis de proteínas
y estas pueden ser estructurales o catalizadores de
reacciones químicas ya que los cloroplastos y las
mitocondrias tienen varias similitudes, participa en el
proceso de transferencia de energía, su función es
activar la catálisis de diversos procesos (desempeño
energético de la planta), también ayuda a la fijación
de bióxido de carbono CO2 durante la fotosíntesis.

2. Describa el ciclo correspondiente a la fotosíntesis.

6 H2O + 6 CO2 + luz = C6H12O6 + 6 O2
La fórmula anterior del proceso de la fotosíntesis significa que para realizar el paso
elemental de la fotosíntesis de las plantas son necesarias:
 La presencia de 6 moléculas de agua (H2O).
 La presencia de 6 moléculas de dióxido de carbono (CO2).
 El aporte de fotones o energía lumínica.
Gracias a los cloroplastos y al proceso de fotosíntesis, estos ingredientes se acaban
transformando en una molécula de glucosa (C6H12O6) y 6 moléculas de oxígeno
(02). El oxígeno es expulsado de vuelta a la atmósfera, mientras que la glucosa se
utiliza para proporcionar energía a la planta y producir compuestos como
proteínas, almidón o lípidos, entre otros.

También se puede describir en 4 pasos:

Absorción: en la etapa de absorción la planta absorbe agua y minerales del entorno,
generalmente mediante sus raíces.
Circulación: en esta etapa de la fotosíntesis de las
plantas los nutrientes absorbidos circulan a través del
vegetal hasta las hojas, que es donde se realizar casi
siempre la fotosíntesis.
Fotosíntesis: en la etapa propia de la fotosíntesis es
donde se lleva a cabo el proceso de transformar agua,
dióxido de carbono y luz en energía para la planta. Es un
proceso muy complejo en el que pueden diferenciarse
dos grandes fases de la fotosíntesis: la fase luminosa y la
fase oscura. En la fase luminosa, la planta utiliza la energía lumínica para convertir
las moléculas de CO2 y H2O en ATP, una unidad básica de energía bioquímica
que todos los seres vivos usamos. Los responsables de esto son los cloroplastos,
unos orgánulos que cuentan con su propio ADN y están presentes en todos los
seres vivos capaces de llevar a cabo el proceso de fotosíntesis gracias a la clorofila
que contienen, que les da a las plantas su color verde característico. Aquí puedes
aprender más sobre Qué es la clorofila y sus tipos. En la fase oscura, el ATP
producido en la fase luminosa se transforma en materia orgánica, en un proceso
químico complejo que ya no necesita de luz.
Alimentación y crecimiento: por último, la planta usa los compuestos producidos
para alimentarse y para producir nuevas estructuras y crecer.

3. ¿Qué otros metales están asociados al proceso de la fotosíntesis?

Nitrógeno, calcio, potasio, fosforo, aluminio, azufre, cloro.

4. Explique por qué es posible la sustitución del ion magnesio por otros iones
metálicos usados.
El NADPH (equivalente o poder reductor) y el ATP (enlace fosfato de alta energía,
energía química) generados en el proceso fotosintético y utilizados para la
reducción de CO2 atmosférico, se utilizan también en otros procesos metabólicos
que por tanto resultan también energizados por la luz. Es el caso de la asimilación
de nitrato y sulfato.
Nitrógeno y azufre son dos elementos minerales denominados esenciales por su
participación en el metabolismo. Pero antes de su incorporación a los procesos
metabólicos son convertidos de las formas de absorción comunes a formas
reducidas.
Por eso se habla de reducción asimilatoria, asimilación de nitrato y sulfato.
El nitrógeno se absorbe fundamentalmente en forma de ión nitrato (NO3-) o en
forma de ión amonio (NH4+)

5. Qué problemas puede presentar una planta si el ion magnesio es

reemplazado por otros iones metálicos.
El nitrito que resulta de su actividad catalítica es altamente tóxico por lo que se
transporta inmediatamente al cloroplasto donde la enzima nitrito reductasa reduce
el nitrito a amonio, resultando así a una planta toxica.

6. Puede ser reemplazado el magnesio por iones metálicos pesados ¿Sí por
qué y no por qué? Cite ejemplos.
La feofitina es capaz de unir eficientemente iones de Zn o de Cu en el lugar que
ocupaba el magnesio, formando pigmentos estables y de color verde atractivo. La
toxicidad del cobre limita su uso, pero los complejos cúpricos de clorofilas o
clorofílicas están autorizados en la Unión Europea como colorantes alimentarios en
algunos productos.
7. Proponga la estructura de cómo se encuentran unidos los iones metálicos
que sustituyeron al magnesio.

8. Realizar la separación de los componentes de la mezcla obtenida de la hoja

verde por algún tipo de cromatografía.
 BIBLIOGRAFÍA
Ismail Cakmak y Atilla M. Yazici.2015. El Magnesio, un Nutriente Olvidado que Puede
Salvar tu Cultivo. Extraído de
https://www.intagri.com/articulos/nutricion-vegetal/magnesio-nutriente-olvidado-salvar-
cultivo. Esta información es propiedad intelectual de INTAGRI S.C., Intagri se reserva el
derecho de su publicación y reproducción total o parcial.

Extraído de https://www.intagri.com/articulos/nutricion-vegetal/magnesio-nutriente-
olvidado-salvar-cultivo - Esta información es propiedad intelectual de INTAGRI S.C.,
Intagri se reserva el derecho de su publicación y reproducción total o parcial.
Elena P. y Urria C.2009. Fotosíntesis: Aspectos Básicos. Facultad de Ciencias
Biológicas. Universidad Complutense de Madrid.

Bertha-von-Suttner-Str .2019. K+S Minerals and Agriculture GmbH . 7 - 34131 Kassel

http://www.ks-minerals-and-agriculture.com/eses/fertiliser/advisory_service/nutrients/
magnesium.html
Clorofilas. Los Pigmentos Vegetales y la Fotosíntesis - passel. (s. f.).
https://passel2.unl.edu/view/lesson/ae42848963d4/3
Cromatografía - Concepto, principios, tipos, fases y ejemplos. (s. f.). Concepto.

https://concepto.de/cromatografia/