Vibrio Cholerae

20
19
Análisis microbiológico
del Vibrio cholerae
FUNDAMENTOS DE AYUDA DIAGNÓSTICA I

DOCENTE: JUAN ABELINO BARÓN FIGUEROA
ALUMNA: SANDY NICOLE BURGOS CABANILLAS
CICLO: IV
GRUPO: B2P3
TRUJILLO-PERÚ
SANDY NICOLE BURGOS CABANILLAS 0
2019
Vibrio cholerae FUNDAMENTOS DE AYUDA DIAGNÓSTICA I
ÍNDICE PÁG
I. INTRODUCCIÓN ........................................................................... 2
II. OBJETIVOS ................................................................................... 3
2.1. GENERAL ..................................................................................... 3
2.2. ESPECÍFICOS ................................................................................ 3
III. JUSTIFICACIÓN.......................... ERROR! BOOKMARK NOT DEFINED.
IV. MARCO TEÓRICO ...................................................................... 4
4.1. VIBRIONES ................................................................................... 4
4.2. CLASIFICACIÓN BIOLÓGICA ........... ERROR! BOOKMARK NOT DEFINED.
4.3. BIOLOGÍA Y VIRULENCIA................ ERROR! BOOKMARK NOT DEFINED.
4.4. ESTRUCTURA ANTIGÉNICA .......................................................... 7
4.5. PATOGENÍA ............................................................................... 10
4.6. EPIDEMIOLOGÍA ........................................................................ 16
4.7. MANIFESTACIONES CLÍNICAS .................................................... 17
4.8. DIAGNÓSTICO............................................................................ 19
4.8.1. IDENTIFICACIÓN ................................................................. 19
4.8.2. SEROLOGÍA ............................ Error! Bookmark not defined.
4.9. TRATAMIENTO .............................. ERROR! BOOKMARK NOT DEFINED.
4.10. PREVENCIÓN Y CONTROL .............. ERROR! BOOKMARK NOT DEFINED.
V. CONCLUSIONES......................... ERROR! BOOKMARK NOT DEFINED.
VI. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS ............. ERROR! BOOKMARK NOT
DEFINED.
VII. ANEXOS ................................ ERROR! BOOKMARK NOT DEFINED.

I. INTRODUCCIÓN
Vibrio cholerae, con cepas que causan cólera, es una varilla curva
Gram-negativa móvil perteneciente a la
familia Vibrionaceae . Aunque se han identificado aproximadamente
200 serogrupos O reconocidos, solo se sabe que las cepas serogrupos
O1 y O139 causan enfermedades graves y pandemias de
cólera. Raramente se encuentran infecciones intestinales y / o extra
intestinales con serogrupos no O1 y no O139 o cepas O1 no toxigénicas
y parecen tener poco impacto en la salud pública. Las cepas
pandémicas de los serogrupos O1 y O139 existen como habitantes
naturales de los ecosistemas acuáticos, lo que los convierte en
patógenos humanos facultativos. V. choleraeEl serogrupo O1 tiene dos
biotipos (clásico y El Tor) y tres serotipos (Ogawa, Inaba e
Hikojima). El serotipo más frecuente es Ogawa, mientras que
Hikojima es muy raro e inestable en el medio ambiente. Las cepas
de V. cholerae no O1 y no O139 se aíslan con mayor frecuencia de los
ríos y las zonas de estuarios en comparación con las cepas O1 y
O139. Existe evidencia de que el fago CTX ϕ codificado por la toxina
del cólera (CT) puede transducir estas cepas ambientales no
toxigénicas, convirtiéndolas en cepas toxigénicas, un evento que se ha
postulado que también tiene lugar en el ambiente gastrointestinal, lo
que resulta en la detección de toxinas. 1
En el pasado, la permanencia de V. cholerae toxigénico en el medio

ambiente se consideraba breve y los brotes de cólera se debían

principalmente a la transmisión fecal-oral. Actualmente, se ha

descubierto que V. cholerae podría sobrevivir durante mucho tiempo
en el agua, suponiendo un estado viable, pero no cultivable. Este
hallazgo apuntó a una nueva hipótesis, a saber, que un reservorio
ambiental de V. cholerae es responsable del cólera endémico, y se
formuló un marco epidemiológico de cólera correspondiente que
incorpora un V. cholerae ambientalreservorio. El papel del ambiente
acuático en el mantenimiento de la dinámica del cólera depende de la
condición sanitaria de la comunidad. El endemismo en una comunidad
bien desinfectada requiere un reservorio ambiental permanente,
mientras que el endemismo en una comunidad pobre solo requiere un
reservorio transitorio.1
II. OBJETIVOS
2.1. GENERAL
- Proporcionar al estudiante una amplia comprensión de los

fundamentos microbiológicos del V. cholerae.
2.2. ESPECÍFICOS
- Describir la epidemiología y la clasificación, los métodos

(moleculares y basados en el cultivo) propuestos para la
detección y de Vibrio cholerae.
- Reconocer los biotipos, la ruta de transmisión y así como la

virulencia del Vibrio cholerae.

- Brindar un enfoque integral de la patogenia de Vibrio cholerae

para ayudar a las comunidades y a los responsables políticos a
evitar brotes de cólera.
- Analizar los distintos tipos de diagnóstico microbiológico del

Vibrio Cholerae.
III. MARCO TEÓRICO
3.1. VIBRIONES
Los miembros del genero Vibrios son bacilos gramnegativos curvos 0

rectos, anaerobios facultativos, aspor6genos y m6viles. Los vibriones
pueden requerir NaCI 0 que su crecimiento se estimule por la adici6n de
este. Todos los miembros del genero Vibrio, con excepci6n de V.
rnetschnikovii y V. gazogenes, son oxidasa positivos y reducen los nitratos
a nitritos. La familia Vibrionaceae incluye muchas especies, que en su
mayor parte son habitantes normales del ambiente acuatico. De más de 30
especies del complejo Vibrio-Photobacterium, solo 12 se han reconocido
como pat6genos para el ser humano . Aunque la mayor parte de estas 12
especies se aislan en caso de infecciones intestinales y extraintestinales,
solo V cholerae se asocia con el c61era epidemico. Los vibriones no
identificados se han denominado "especies marinas" 0, simplemente,
"vibriones marinos". Estas especies marinas se definen como cepas de
Vibrio 0 Photobacterium oxidasa positivas; fermentan la D-glucosa, no
crecen en caldo nutritivo sin NaCI, pero crecen si este se agrega. La mayor
parte de los microorganismos aislados de aguas de los océanos 0 los

estuarios pertenecen al grupo de "vibriones marinos" y son dificiles de

identificar excepto en unos cuantos laboratorios especia1izados, Debido a
que no se asocian con enfermedades humanas, los vibriones marinos de
ordinario no tienen que ser identificados. Los laboratorios cl!nicos y de
salud pública por 10 general notifican los vibriones pat6genos para el ser
humano indicando el género y la especie, y todos los demas como
"vibriones marinas". Los serogrupos de V. cholerae O1 y O139 producen
cólera en el ser humano, en tanto que otros vibrios pueden ser causa de
infecciones de tejidos blandos y piel, septicemia o enteritis. En el siguiente
cuadro se presentan los vibriones de importancia médica.2

3.2. CLASIFICACIÓN TAXONÓMICA
REINO Bacteria
FILO Proteobacteria
CLASE Gamma Proteobacteria
ORDEN Vibrionales
FAMILIA Vibrionaceae
GÉNERO Vibrio
ESPECIE cholerae
3.3. CARACTERÍSTICAS
Bacilo gram negativo, no formador de esporas, anaerobio facultativo,

oxidasa positiva, el serogrupo O1 incluye biotipos no distinguibles
serológicamente clásicos y EI Tor, produce una enterotoxina termolábil
(toxina CT); las cepas que no sean O1/O139 no producen la toxina CT,
pero pueden producir otras toxinas.2
El Vibrio cholerae, es un bacilo Gram negativo, curvo, perteneciente a la

familia Vibrionaceae, móvil, flagelado, no forma esporas, mide de 2 a 5
micras de largo, sobrevive a temperaturas entre 22 º C y 40 º C y crece bien
en medios alcalinos. Para el Vibrio cholerae O1 se han descrito 2 biotipos,
El Clásico y El Tor, cada biotipo tiene tres serotipos: Inaba, Ogawa e
Hikojima. . La infección se adquiere por la ingestión de alimentos o agua

contaminada con el Vibrio, la dosis infectante es variable y depende del

vehiculo, requiriendo una menor dosis cuando el vehículo son corresponde
a alimentos contaminados. El período de incubación es variable, depende
de la dosis infectante fluctuando entre dos horas y cinco días.3
3.4. FISOLOGÍA Y ESTRUCTURA ANTIGÉNICA
Las especies de Vibrio pueden crecer en una variedad de medios sencillos

con un amplio intervalo de temperatura (de 14 °C a 4 0 °C). Todas las
especies de Vibrio necesitan cloruro sódico (NaCl) para crecer. V cholerae
puede crecer en la mayor parte de los medios de cultivo sin añadir sal, pero
la mayor parte de las demás especies (especies halófilas) necesitan de la
adición de NaCl. Los vibrios toleran un amplio intervalo de pH (p. ej., pH
de 6,5 a 9), aunque son sensibles a los ácidos gástricos. Los pacientes con
reducción o neutralización de la producción de ácidos gástricos son más
vulnerables a las infecciones por este género. 2

Autor: Emilio Bueno, Brandon Sit, Matthew K. Waldor & Felipe

Cava Fuente: Nature Microbiology (2018)
https://doi.org/10.1038/s41564-018-0253-0 Anaerobic nitrate reduction
divergently governs population expansion of the enteropathogen Vibrio
cholerae
La mayor parte de los vibrios tienen flagelos polares (importantes para su

motilidad) y varios pili importantes para la virulencia. Por ejemplo, las
cepas epidémicas de V cholerae, el agente etiológico del cólera, sintetizan
el pilus corregulado por la toxina. La estructura de la pared celular de los
vibrios también es relevante. Todas las cepas cuentan con
lipopolisacáridos formados por lípido A1 (endotoxina), polisacárido
central y una cadena lateral de polisacárido O. El polisacárido O se emplea

para subdividir las especies de Vibrio en serogrupos: se han definido 200

serogrupos2
de V cholerae, múltiples serogrupos de V vulnificus y V parahaemol ticus.

El interés que ha despertado este sistema de clasificación no es meramente
académico: V. cholerae OI y 0139 sintetizan la toxina del cólera y se
asocian a la aparición de epidemias de esta entidad. Otras cepas de esta
especie no producen dicha toxina ni causan enfermedad epidémica. V
cholerae serogrupo 01 se subdivide, a su vez, enserotipos y biotipos. Se
han reconocido tres serotipos: Inaba, Ogawa e H ikojim a. Las cepas
pueden pasar del serotipo Inaba al Ogawa, y el serotipo Hikojima
representa un estado de transición que expresa antígenos de los dos
anteriores. Se han definido dos biotipos de V cholerae 0 1: Clásico y El
Tor. . Estos biotipos se subdividen por sus diferencias fenotípicas y
morfológicas. Se han referido siete pandemias mundiales de V. ch olerae.
Las cepas causantes de la sexta pandemia mundial correspondían al biotipo
Clásico, mientras que casi todas las implicadas en la séptima y actual
pandemia lo hacen al biotipo El Tor. V vulnificus y V. cholerae no 01
producen cápsulas polisacáridas ácidas importantes para las infecciones
diseminadas.2
V. cholerae 01 no produce ninguna cápsula, así que las infecciones

provocadas por este organismo no se extienden más allá de los límites del
intestino.V cholerae y V parahaemolyticus poseen dos cromosomas
circulares, cada uno de los cuales porta genes esenciales para estas
bacterias. Se desconoce si otras especies de Vibrio tienen un genoma con

una estructura similar. En el género Vibrio también es frecuente encontrar

plásmidos, incluidos los que tienen codificada la resistencia
antimicrobiana.2
3.5. PATOGENÍA Y INMUNIDAD
El bacteriófago CTX<t> codifica los genes para las dos subunidades de la

toxina del cólera [ctxA y ctxB ). Este bacteriófago se une al pilus
corregulado por la toxina (TCP) y pasa al interior de la célula bacteriana,
donde se integra en el genoma de V. ch olerae. El locus cromosómico de
este bacteriófago lisogénico contiene, igualmente, otros factores de
virulencia: el gen a c e para la entero to xin a accesoria del cólera, el gen
zot para la toxina de la zónula oclusiva y el gen cep para las proteínas
quimiotácticas. V cholerae 01 y 019 poseen un gran número de copias de
estos genes, cuya expresión se encuentra bajo el control de genes
reguladores. La toxina del cólera es una toxina formada por el complejo A
-B sem ejante desde el punto de vista estructural y funcional a la
enterotoxina termolábil de Escherichia coli.3
Un anillo compuesto por cinco subunidades B idénticas de la toxina del

cólera se une a los receptores del gangliósido GMi en la superficie de las
células epiteliales intestinales. La porción activa de la subunidad A se
internaliza, interacciona con proteínas G que controlan la adenil ciclasa y
provoca la conversión catabólica del trifosfato de adenosina (ATP) en
monofosfato de adenosina cíclico [AMPc), lo que origina la hipersecreción
de agua y electrólitos. Los pacientes aquejados de una infección grave
llegan a perder hasta 1 litro de líquido por hora durante el período de
máxima actividad de la enfermedad. Está acusada pérdida de líquidos

provocaría normalmente la eliminación de los microorganismos del
aparato digestivo; no obstante, las células de V. cholerae son capaces de
adherirse a la capa de células mucosas a través de: 3
1) el TCP codificado por el complejo génico tcp y
2) las proteínas quimiotácticas codificadas por los genes cep. En

consecuencia, el TCP es un elemento destacado tanto como receptor del
fago portador del gen de la toxina del cólera como para la adhesión a la
mucosa que tapiza el aparato digestivo. Las cepas no adherentes son
incapaces de establecer una infección. En ausencia de la toxina del cólera,
V. cholerae 01 aún provoca una diarrea significativa por medio de la
acción de la toxina de la zónula oclusiva y la enterotoxina accesoria del
cólera. Como su propio nombre indica, la toxina de la zónula oclusiva
relaja las uniones estrechas (zonula occludens] de la mucosa del intestino
delgado, lo que incrementa la permeabilidad intestinal, mientras que la
enterotoxina produce aumento de la secreción de líquido.3

A diferencia de otros serotipos distintos del 01, V. cholerae 0 139 posee el

mismo complejo de virulencia que las cepas 01. Por consiguiente, la
capacidad de las cepas 0 139 para adherirse a la mucosa intestinal y
sintetizar la toxina del cólera es responsable de la producción de una
diarrea acuosa semejante a la del cólera.3
3.6. MECANISMO FISIOPATOLÓGICO DELM V.

CHOLERAE
V.cholerae es el prototipo de los síndromes diarreicos en los cuales la

enfermedad no es causada por invasión tisular de los microorganismos
sino a través de la producción de toxinas afectan el intercambio
intraintestinal normal de agua y electrolitos. Las cepas toxígenas generan

una toxina que se unen a un receptor sobre la membrana de la célula

epitelial, activa la adenilatociclasa y produce niveles elevados de
adenosinmofosfato ciclico (cAMP) e hipersecreción de sal y lo que
conduce a la diarrea característica en “agua de arroz “del cólera. A
continuación, se proporciona un relato de la secuencia paso a paso de la
gastroenteritis inducida por V' cholerae. La figura siguiente muestra es
una ilustración esquemática del modo de acción de la toxina colérica. 4
Secuencia que conduce a la gastroenteritis inducida por V. cholerae

1. Los microorganismos ingeridos en aguas contaminadas deben pasar

primero las secreciones altamente acidas del estómago. Se calcula que se
necesitan 1010 microorganismos por mililitro para sobrevivir al pasaje
gástrico en las personas sanas; se necesitan solo unos 100
microorganismos por mililitro en las personas hipoclorhídricas. ya sea
debido a una gastrectomía previa o por la ingestión de antiácidos en el
tratamiento de la enfermedad ulcerosa gástrica.4
2. Para producir enfermedad, las células bacterianas de V. cholerae deben

adherirse a las células epiteliales de la mucosa gástrica e intestinal. Estas
bacterias son móviles y secretan mucina. dos propiedades que ayudan a la
penetración de la capa protectora de mucina que reviste la superficie de la
mucosa gastroenterica. La fijación de las bacterias es un mecanismo
complejo que requiere el reconocimiento por parte de las células
bacterianas de un marcador de superficie sobre las células epiteliales al que
se pueden unir.4
3. V. cholerae produce una molécula de enterotoxina compuesta por dos

subunidades: una subunidad A (activa) y una subunidad B (fijadora). La
subunidad A esta compuesta por dos péptidos: A! con actividad de toxina
y A1, que facilita la penetración de la subunidad A en la célula. La
subunidad B une la molécula de toxina a los receptores gangliosidos GM1
específicos de la toxina del cólera sobre la membrana de la célula epitelial
intestinal. Hay cinco subunidades B por molécula de toxina, dispuestas en
un anillo alrededor de un centro que contiene la enzima A1. La unión inicial
ocurre rápidamente, seguida de un cambio conformacional lento en la

molécula de la toxina, que conduce a la internalización de la enzima A en

la célula huésped; por lo tanto, existe una fase de latencia corta (15 a 60
minutos) entre el momento en que se ingiere el agua infectada por cólera
y el comienzo de los síntomas. A través de una serie de pasos, cataliza la
ADP-ribosilación de la proteína reguladora Gs (estimuladora), que la traba
en el estado activo. La proteína Gs actúa para retornar la adelinato ciclasa
de su forma inactiva a su forma activa, lo que a su vez produce una
elevación intracelular en el AMP cíclico.4
4. El AMP cíclico impide la reabsorción de iones sodio a través de la

membrana del ribete en cepillo de la célula epitelial intestinal y la
excreción de bicarbonato de sodio y potasio en la luz intestinal. El quilo
intestinal tiene altas concentraciones de sodio y cloro (isotónico),
bicarbonato (dos veces la concentración del plasma) y potasio (tres a cinco
veces la concentración del plasma). Por lo tanto, el agua pasa pasivamente
desde las células epiteliales a la luz intestinal en respuesta a los altos
gradientes de presión osmótica, siguiendo el viejo adagio, ‘‘donde va el
sodio, va el agua”.4
5. Por lo tanto, existe una secreción difusa de líquido desde las células
epiteliales intestinales y la acumulación de grandes cantidades de agua en
la luz intestinal. El ritmo de producción de líquido aumenta entre 3 y 10
horas después de la exposición. La pérdida de líquido persiste hasta
durante 5 días en los pacientes que no reciben antibióticos, después de lo
cual las células bacterianas del intestino se eliminan por un mecanismo
desconocido del huésped. El resultado son grados variados de

deshidratación y desequilibrio electrolítico que pueden conducir a acidosis

metabólica. hipopotasemia, shock y muerte en los casos extremos.4
3.7. EPIDEMIOLOGÍA
Ocurrieron seis pandemias (epidemias en todo el mundo) de cólera entre

1817 y 1923, causadas muy posiblemente por V. cholerae O1 del biotipo
clásico y en gran parte se originaron en Asia, por lo general en el
subcontinente indio. La séptima pandemia comenzó en 1961 en las Islas
Célebes de Indonesia, con diseminación a Asia, Medio Oriente, y África.
Esta pandemia fue causada por V. cholerae biotipo El Tor. La séptima
pandemia, que comenzó en 1991, se propagó a Perú y luego a otros países
de Sudamérica y Centroamérica. También se presentaron casos en África.
En esta pandemia millones de personas han padecido cólera. Hay quienes
consideran que el cólera causado por la cepa de serotipo O139 es la octava
pandemia que comenzó en el subcontinente indio en 1992 a 1993 con
propagación a Asia. La enfermedad ha sido infrecuente en Norteamérica
desde mediados de 1800, pero existe un foco endémico en la costa del
Golfo de Louisiana y Texas. El cólera es endémico en India y en el sureste
de Asia. Desde estos centros, es transportado por las vías de embarque,
rutas de comercio y rutas de migración de peregrinos. La enfermedad se
disemina por el contacto de individuos con la enfermedad leve o inicial y
por el agua, los alimentos y las moscas. En muchos casos, sólo 1 a 5% de
las personas susceptibles expuestas presentan la enfermedad. El estado de
portador pocas veces dura más de tres a cuatro semanas y no está clara la
importancia de los portadores en la transmisión de la enfermedad. Los

vibrios sobreviven en agua hasta por tres semanas. V. cholerae vive en

medios acuáticos y tales ambientes son el reservorio natural de los vibrios.
V. cholerae vive adherido a algas, copépodos y conchas de crustáceos.
Puede sobrevivir por años y multiplicarse, pero cuando las condiciones no
son adecuadas para su multiplicación puede volverse latente. El control se
basa en la educación y en la mejora de las condiciones sanitarias, sobre
todo del alimento y del agua. Se debe aislar a los pacientes, desinfectar sus
excretas y realizar seguimiento a los contactos. La quimioprofilaxis con
fármacos antimicrobianos puede ser útil. La inyección repetida de una
vacuna que contenga lipopolisacáridos extraídos de vibrios o suspensiones
densas de Vibrio puede conferir una protección limitada a las personas con
una exposición intensa (p. ej., contactos familiares) pero no es una medida
eficaz de control epidémico.5
3.8. MANIFESTACIONES CLÍNICAS
El cólera es una enfermedad diarreica aguda, que afecta a individuos de

todas las edades. Se caracteriza por la aparición de diarrea acuosa profusa
con deshidratación secundaria de diferente cuantía. 2
El 80% de los casos son asintomáticos o cursan con un cuadro leve. Un

20% se manifiesta con diarrea acuosa aguda profusa moderada y un 10-
20% de estos puede evolucionar a un cuadro más grave. 3
El inicio del cuadro es abrupto con diarrea líquida profusa descrita como
“agua de arroz”, asociada a náuseas, vómitos, dolor abdominal. Puede
haber calambres musculares resultantes del desbalance hidroelectrolítico

por la pérdida importante de potasio a través de las deposiciones. La fiebre

se presenta en baja frecuencia (5%). 4
Las manifestaciones clínicas en los niños son similares a las descritas para
los adultos, pero presentan con mayor frecuencia hipoglicemia,
convulsiones, fiebre y alteraciones de conciencia. Las manifestaciones del
cuadro tienden también a ser más graves en embarazadas y adultos
mayores.3
Los casos asintomáticos como los sintomáticos excretan el Vibrio por las
deposiciones entre 7 a 14 días después de haber adquirido la infección,
volviendo a contaminar el medio ambiente y continuando así el ciclo de
infección a otras personas.2
La forma clínica grave del cólera se caracteriza por diarrea aguda acuosa,
profusa, de alta frecuencia asociada a deshidratación grave de instalación
rápida. Sin tratamiento, este cuadro puede ser fatal.4
Los síntomas de la diarrea moderada o severa son:2
- Diarrea aguda profusa

- Vómitos
- Decaimiento
- Calambres musculares, especialmente de extremidades inferiores
Los signos de deshidratación severa son:
- Sed

- Piel y mucosas secas

- Disminución de la diuresis
- Pulso débil
- Hipotensión
- Letargia o coma
Los pacientes deben ser adecuadamente evaluados para iniciar la

hidratación y reposición de electrolitos según corresponda.2
3.9. DIAGNÓSTICO
3.9.1. IDENTIFICACIÓN
La identificaci6n mínima de V. cholerae 01 solo requiere la confirmaci6n

serol6gica de la presencia de antígenos del serotipo 01 en los aislamientos
sospechosos. Sin embargo, puede ser necesaria una caracterizaci6n más
completa del microorganismo que incluya diversas pruebas bioquímicas,
así como la determinación de otras características. El laboratorio debe
decidir cuándo es apropiado realizar estas pruebas adicionales en los
aislamientos clínicos, ya que no deben formar parte de la identificaci6n
común de V. cholerae 01. En términos generales, si el aislamiento proviene
de una regi6n amenazada por el cólera epidémico 01 que se encuentra en
las primeras fases de un brote de c6lera, es apropiado confirmar la
producci6n de toxina del cólera y la identificaci6n bioquímica. Otras
pruebas que podrían brindar importante informaci6n de salud pública son
las de hem6lisis, biotipificaci6n, subtipificaci6n molecular y sensibilidad

a los antimicrobianos. Estas pruebas solo se deben realizar en un número

limitado de aislamientos. 6
3.9.1.1. AISLAMIENTO DE VIBRIO CHOLERAE A PARTIR

DE MUESTRAS FECALES
Aunque V cholerae 01 crece en diversos medios de agar que se utilizan

comúnmente, el aislamiento a partir de muestras fecales se realiza con
mayor facilidad empleando medios selectivos. Se recomienda el agua
peptonada alcalina (APW) como caldo de enriquecimiento, y el agar con
tiosulfato, citrato, sales biliares y sacarosa (TCBS) como el medio de agar
selectivo preferible para el aislamiento de V choterae 01. En algunos casos
(por ejemplo, cuando el paciente se encuentra en fases muy tempranas de
la enfermedad y tiene evacuaciones liquidas), puede ser innecesario el use
de muestras enriquecidas o medios selectivos en Ca+. Sin embargo,
siempre se debe usar el caldo de enriquecimiento y una media selectiva en
placa cuando se trata de personas convalecientes, infecciones presuntivas
asintomáticas, muestras ambientales, y cuando es probable que la muestra
contenga gran cantidad de microorganismos competidores.6
A. ENDQUECLMLENTO EN AGUA PEPTONADA ALCALiNA
Vibrio spp. crece muy rápidamente en agua peptonada alcalina, y al cabo

de 6 a 8 horas está presente en mayor cantidad que otros microorganismos.
El enriquecimiento en dicho medio favorece el aislamiento de V cholerae
01 cuando hay pocos microorganismos, como en muestras de personas
convalecientes y de portadores asintomáticos. Se han descrito otros caldos
de enriquecimiento para el cultivo de V cholerae. Entre ellos se puede
mencionar el medio de enriquecimiento de Monsur, que contiene

tripticasa, telurito de potasio y taurocolato de sodio (sales biliares). A
veces se utiliza una modificación del agua peptonada alcalina, en la cual
se agrega telurito de potasio en concentraciones de 1:100.000 a 1:200.000.
Los medios de enriquecimiento que contienen un agente selectivo quiza
no ofrezcan ventaja alguna sobre el agua peptonada alcalina si esta se
utiliza con un periodo de incubación breve (6 a 8 horas).6
B. MEDLOS SELECTIVOS EN PLACE
1. AGAR CON TLOSULFATO, CLTRATO, SALES BILLARES Y

SACAROSA
El agar con tiosulfato, citrato, sales biliares y sacarosa (TCBS) es la media

que se prefiere para el aislamiento de V cholerae y se utiliza amplia- mente
en todo el mundo. El agar TCBS se expende en el comercio y es fácil de
preparar; no requiere esterilización en la autoclave y es diferencial y
selectivo (Cuadro IV-1). Sin embargo, tiene una vida de almacenamiento
relativamente corta una vez preparado (de 3 a 5 días), a menos que las
placas se protejan cuidadosamente de la desecación. La selectividad del
agar TCBS está sujeta a variaciones de un late a otro y de una marca a otra,
y el cultivo en este medio no es conveniente para las pruebas de
aglutinación con antisueros contra V cholerae 01.6

El agar TCBS es verde cuando se prepara. El crecimiento de un día para

otro (18 a 24 horas) de V cholerae producirá colonias grandes (2 a 4 mm
de diámetro), ligeramente aplanadas, amarillas, con el centro opaco y la
periferia transmitida (Figura IV-1). El color amarillo se debe a la
fermentación de la sacarosa en el medio. Los microorganismos que no
fermentan la sacarosa, como es el caso de V parahaemolyticus, producen
colonias de color verde a azul verde. Las colonias sospechosas que se
someterán a pruebas ulteriores deben resembrarse en un medio no
inhibitorio, como agar gelatina, agar infusión de coraz6n (HIA) agar hierro
de Kligler (KIA) o agar hierro con tres anicaxes (TSI).6

2. AGAR TAUROCOLATO-TELURITO-GELATINA (AGAR TTG O

MEDLO DE MONSUR)
El agar taurocolato-telurito-gelatina (17G) es un agar diferencial y

selectivo ideado específicamente para el aislamiento de V. cholerae. El
agar TTG tiene una vida de almacenamiento relativamente larga después
de preparado, y se pueden utilizar las colonias tornados directamente del
medio para efectuar las pruebas de la oxidasa y de aglutinación (véase el
Cuadro IV-1). Este medio tiene como inconvenientes que no se expende
en el comercio y que las colonias de V cholerae incubadas de un día para
otro en 61 tienden a ser más. pequeñitas (1 a 2 mm) que las cultivadas en
agar TCBS. También varía Ia calidad del telurito de potasio, que se agrega
al medio para aumentar la selectividad; por lo tanto, debe titularse cada
lote para determinar la concentración 6ptima que ha de usarse en el agar
ITC.6

El crecimiento de un día para otro (18 a 24 horas) de V cholerae en agar

TTG se caracteriza por colonias pequeñitas y opacas con el centro
ligeramente oscuro (Figura IV-2). cabo de 24 horas, el centro de la colonia
se hace más oscuro y, al final, toda ella toma un color de "acero pavonado".
Además del color oscuro, que se debe a la reducción del telurito, hay una
zona opaca semejante a un halo alrededor de las colonias. El efecto de halo,
debido a la producción de la enzima gelatinasa, se puede intensificar
mediante refrigeración breve (15 a 30 minutos) de la placa. Como muchos
miembros del genera Vibrio tienen características similares en el agar ITC,
se requieren pruebas adicionales (antisueros, pruebas bioquímicas o
ambos) para identificar los microrganismos aislados en este medio.6
3. AGAR DE MACCON KEY
Para aislar especies de la familia Enterobacteriaceae se utiliza mucho el

agar de MacConkey, que también permite el crecimiento de algunas cepas
de V cholerae. Las colonias de este bacilo incubadas de un día para otro
en agar de MacConkey tienden a ser pequeñas o medianas (1 a 3 mm) y
por lo general se yen como lactosa negativas o ligeramente rosadas; con
frecuencia recuerdan a las colonias de microorganismos que producen
fermentación "tardía" o "lenta." de la lactosa (Cuadro IV-1; Figura IV-3).
Las colonias que presuntivamente correspondan a V cholerae se
resembraran en medios no inhibitorios para efectuar pruebas adicionales.6

C. MEDLOS NO SELECTIVOS EN PLACA
1. AGAR GELATINA
El agar gelatina es un buen medio no selectivo para el cultivo de V

cholerae. La producción de gelatinasa, que es una característica de los
vibriones en general, se puede determinar en el agar gelatina y se reconoce
por la aparición de una zona opaca parecida a un halo alrededor de las
colonias. El efecto de halo se puede identificar mediante la refrigeración
breve (15 a 30 minutos) de la placa. Las colonias de V cholerae en el agar
gelatina son lisas, opacas, blancas y de 2 a 4 mm de diámetro tras la
inactivación de 18-24 horas a una temperatura de 350 a 37 °C. Cuando las
colonias se observan con luz transmitida oblicuamente con aumentos de
10x a 20x, pueden aparecer finamente granulosas e iridiscentes, con un
brillo verdoso como de bronce. Las colonias someterse directamente a las
pruebas de aglutinación con antisueros, de la oxidasa y del hilo a hebra

mucoide. Se puede utiliv.ar agar gelatina sin sales como un medio
selectivo para descartar los vibriones marinos halífilos (que requieren sal)
semejantes a V cholerae, que frecuentemente se aíslan de pescados y
mariscos y de muestras ambientales. 6
2. AGAR DE EXTRACTO DE CARNE (AGAR NUTRITIVO

ALCALLNO)
El agar de extracto de carne es similar al agar gelatina en su capacidad para

permitir el crecimiento de Veltoierae; sin embargo, a diferencia de este,
las colonias que aparecen en 0 no tienen características distintivas. Al cabo
de la incubación de 18 a 24 horas, las colonias de V cholerae en agar de
extracto de carne son de 2 a 4 mm de diámetro, lisas, opacas y de color

crema. Cuando se observan con luz oblicua con aumentos de 10X y 20x,
las colonias se yen finamente granulares e iridiscentes, con un brillo
verdoso coma de bronce. Las pruebas de oxidasa y del hilo mucoide y la
aglutinación con antisueros se pueden realizar directamente con colonias
presuntivas aisladas en placas de agar de extracto de carne.6
D. AISLAMLENTO E IDENTIFICATION PRESUNTIVA
1. INOCULACLAN DIRECTA DE MUESTRAS FECALES EN

MEDiOS SELECTIVOS EN PLACE
En los medios muy selectivos (agares TCBS y TTG) la siembra se hace

con un inoculo abundante de heces liquidas, suspensión fecal o hisopado
rectal (Figura IV-4). Con medios de baja selectividad (agar gelatina, agar
de extracto de carne y agar sangre), se utiliza un inoculo ligero, el cual se
siembra mediante estriación con asa de alambre para aislar colonias. No es
necesario flamear el asa entre la estriación de los diferentes cuadrantes de
la placa. Los medios de alta selectividad requieren una estriación más
cerrada en los cuadrantes que se siembran primero, no así los medios de
baja selectividad. Después de la inoculación, se incuban las placas durante
18 a 24 horas a una temperatura de 35° a 37 °C.6
2. INOCULACIÓN DE AGUE PEPTONADA ALCALINA A PARTIR

DE MUESTRAS FECALES
El agua peptonada alcalina se puede inocular con heces liquidas,

suspensión fecal o hisopado rectal (Figura IV-4). El inoculo de heces no
debe exceder del 10% del volumen del caldo. Se incuba el tubo con la tapa
sin apretar a una temperatura de 35° a 37 °C durante 6 a 8 horas. Después
de este periodo de incubación, se resiembra en agar TCBS empleando una

o dos asadas de agua peptonada alcalina obtenidas de la porción más alta
del caldo, incluida la superficie, puesto que los vibriones crecen
preferentemente en esta zona. El tubo no se agita ni se mezcla antes de
resembrar. Si el caldo no se puede subcultivar después de 6 a 8 horas de
incubación, se resiembra a las 18 horas en un tubo nuevo de agua
peptonada alcalina. Este segundo tubo debe resembrarse en un medio
solido después de 6 a 8 horas de incubación.6
3. AISLAMLENTO DE COLONLAS PRESUNTIVAS A PARTIR DE

MEDIOS EN PLACE
Se seleccionan varias colonias presuntivas de la placa de agar TCBS y se

inoculan en agar de infusión de corazón con plano inclinado u otro medio
no selectivo. No debe utilizarse agar nutritivo porque no contiene sal ni
permite el crecimiento óptimo de V cholerae. Se incuba a una temperatura
de 35° a 37 °C.6
4. AGLUTLNACION EN LAMINA O PORTAOBJETO
Las colonias sospechosas de V cholerae recién aisladas en un medio de

agar no selectivo se pueden someter a la prueba de aglutinación con
antisuero polivalente contra V cholerae 01. Por lo general, después de 5 a
6 horas de incubación, las colonias que crecen en el piano inclinado son
suficientes para llevar a cabo pruebas serológicas en lamina con antisueros
polivalentes contra V cholerae 01; si no es así, el cultivo se incuba de
nuevo de un día para otro. Los aislamientos que aglutinan con el antisuero
polivalente contra el serogrupo 01 se identifican como presuntivo V
cholerae 01. El presuntivo V cholerae 01 se puede someter a confirmación

mediante aglutinación con antisueros monovalentes o con antisueros
Ogawa o Inaba; pero quizá no se necesite la confirmación de todos los
aislamientos, en especial cuando el abasto de antisueros es limitado. La
identificación mínima de V cholerae 01 requiere solamente la
confirmación serológica de la presencia de antígenos del serotipo 01 en los
aislamientos presuntivos. Sin embargo, a veces es necesaria la
característica más completa del microrganismo, lo cual puede incluir
pruebas de producción de la toxina, de hemolisinas, así como la de
determinación de la sensibilidad a los antimicrobianos e identificación
bioquímica, del biotipo o del subtipo molecular. Estas pruebas solo se
deben efectuar en ciertos aislamientos, como los que se han recuperado al
principio de un brote o en el curso de la vigilancia epidemiológica en zonas
amenazadas por el Okra epidemic°. Solamente los aislamientos que se
confirman como V cholerae 01 por pruebas serológicas deben
caracterizarse aún más. 6


5. PRUEBAS BLOQUIMICAS DE SELECCIÓN
Por lo general no son necesarias las pruebas bioquímicas de selección para

los aislamientos de V cholerae sospechosos a partir de muestras fecales,
puesto que las pruebas en laminilla con antisueros polivalentes contra 01
bastan para la identificación presuntiva. Sin embargo, si el suministro de
antisueros es limitado, pueden ser de utilidad las pruebas del hilo mucoide
y de la oxidasa u otras pruebas bioquímicas para lograr la selección más
completa de los aislamientos antes de practicar las pruebas con antisueros.
No hay un solo procedimiento de selección de V cholerae 01 que resulte
ideal para todos los laboratorios y todas las muestras. El laboratorista debe
elegir un procedimiento de selección con base en los recursos a su alcance
(por ejemplo, las existencias de antisueros), en los tipos y el número de
microorganismos competidores que probablemente hay en las muestras
que se cultivan, y en la capacidad del medio selectivo de placa para inhibir
el crecimiento de esos microorganismos competidores. La prueba del hilo
mucoide, en la que se utiliza un cultivo fresco en agar no selectivo, es útil
para descartar los microorganismos distintos de Vibrio spp.,
particularmente Aeromonas spp. (Cuadro IV12). También se puede utilizar
la prueba de la oxidasa para seleccionar los microorganismos distintos de
Vibrio spp., como los de la familia Enterobacteriaceae. El agar hierro de
Kligler (MA) o el agar hierro de tres azucares (TSI) descartan
Pseudomonas y algunas especies de Enterobacteriaceae. Por lo general, la
prueba de la arginina es más titil que la de la lisina para seleccionar
Aeromonas y ciertas especies de Vibrio, pero se puede recurrir a cualquier
de estos medios. No hay necesidad de utilizar dos pruebas bioquímicas que

excluyan al mismo microorganismo. Por ejemplo, si se utiliza la prueba de

la arginina, por lo general no hay ventaja alguna en seleccionar también
con la prueba de la Lisina, en virtud de que ambos arninoacidos descartan
las mismas especies. Las tapas de todos los tubos de las pruebas
bioquímicas habrán de mantenerse poco apretadas antes de la incubación.
Esto tiene importancia particular para los tubos con medios de KIA o TSI
en piano inclinado, puesto que, si las tapas están demasiado apretadas y
existen condiciones anaerobias, quizá no se produzcan las reacciones
características de V cholerae. 6

3.9.1.2. IDENTIFICACIÓN BIOQUÍMICA DE V. CHOLERAE
Los métodos para la obtención y transporte de las muestras de

fecales, el aislamiento primario y la identificación presuntiva en

agar selectivo se incluyen en los Apéndices 9 y 10. Los cultivos

con sospecha de ser V. cholerae deben subcultivarse en un medio
no selectivo (por ejemplo, agar infusión de corazón [AIC] o agar
triptona soya [ATS]) como preparación para la identificación por
serología en lámina y pruebas bioquímicas. Las cepas de V.
cholerae requieren de 0,5% de ClNa (sal) para un crecimiento
óptimo en medio de agar; algunas formulaciones comerciales de
agar nutriente no contienen sal y no deben usarse para el cultivo
de V. cholerae. En general, el análisis con pruebas bioquímicas
previo a la prueba con los antisueros O1 y O139 no es necesario
cuando se sospecha presencia de V. cholerae en muestras de
fecales. No obstante, si el suministro de antisueros somáticos es
limitado, las pruebas bioquímicas pueden servir para la detección
adicional de aislamientos, antes de ir a las pruebas con antisueros.
Las pruebas de detección y la serología en lámina tienen que
hacerse con el crecimiento de un medio no selectivo. La Figura 45
presenta un diagrama de flujo para el aislamiento y la
identificación de cepas de V. cholerae y la Figura 46 provee un
modelo de planilla que puede usarse para registrar los resultados
de las pruebas de detección.7


A. PRUEBA DE OXIDASA
La prueba de oxidasa usa el reactivo de Kovac (una solución al 1%

[p/vol] de N, N, N’, N’ –tetrametil-p-dihidroclorofenilendiamina)
para detectar la presencia de citocromo c en la cadena respiratoria
de la bacteria; si el reactivo de la oxidasa es catalizado, se torna
púrpura. La prueba de la oxidasa se puede hacer en papel de filtro
o en un hisopo.7
Haga la prueba de oxidasa con crecimiento fresco de la superficie

inclinada (cuña) del AIC o AHTA o cualquier otro medio no selectivo
que no contenga carbohidratos; no use crecimiento de agar tiosulfato,
citrato, sales biliares y sacarosa [ATCSBS] porque puede producir
tanto resultados falsos negativos como falsos positivos. No use asa de
Nicromo para esta prueba, pues puede producir una reacción falsa
positiva. Para los propósitos de control de calidad, los controles positivo
y negativo se deben probar al mismo tiempo que se hace la prueba del
aislamiento.7
1. MÉTODO DEL PAPEL DE FILTRO HUMEDECIDO
a) En una placa de Petri, añada a un pedazo de papel de filtro dos

o tres gotas de reactivo de oxidasa de Kovac y deje que el papel
absorba el reactivo; el papel de filtro debe estar húmedo (pero
no mojado) después que ha absorbido el reactivo.7
b) Tome una porción de la colonia a probar de un medio no

selectivo y frótela en el papel de filtro humedecido usando un

asa de platino, un asa plástica, un hisopo estéril, un aplicador

de madera estéril o un mondadientes estéril. (No use un asa de
Nicromo.)7
c) Si el aislamiento es V. cholerae, en 10 segundos debe darse una

reacción positiva (púrpura) en la región donde el crecimiento ha
sido extendido .7
2. MÉTODO DEL HISOPO
d) Escoja con un hisopo las colonias sospechosas de una placa

de cultivo no selectivo o de un crecimiento de una cuña de
agar no selectivo.7
e) Añada una gota del reactivo de oxidasa de Kovac al hisopo

usando una pipeta de Pasteur.7
f) Si el aislamiento es V. cholerae, en 10 segundos habrá una

reacción positiva (púrpura) .7
g) Si el aislamiento no se torna púrpura a los 10 segundos de

haber añadido el reactivo de oxidasa de Kovac, no será
considerado oxidasa positiva. Los microorganismos de los
géneros Vibrio (Tabla 19), Neisseria, Campylobacter,
Aeromonas, Plesiomonas, Pseudomonas y Alcaligenes son
todos positivos a oxidasa; todas las Enterobacteriaceae son
negativas a oxidasa.

TABLA 19: Reacciones de Vibrio cholerae en pruebas de pesquisaje
Prueba de pesquisaje Reacciones de Vibrio cholerae Figura

(número)
Prueba de oxidasa Positivo Figura 10
Figura 20
Prueba de la cuerda Positivo Figura 47
Agar hierro de kligler K/A (cuña roja/fondo amarillo), no produce gas, no Figura 48
(AHK) H2Sa [18–24 horas]
Agar hierro triple azúcar A/A (cuña amarilla/fondo amarillo, no produce Figura 48
(AHTA) gas, no H2Sa [18–24 horas]
Agar hierro lisina (AHL) K/K (cuña púrpura/fondo púrpura), no produce

gas, no H2Sa,b [18–24 horas]
–
Coloración de Gram Pequeños bacilos curvos gramnegativos –
Montaje húmedo Pequeños bacilos curvos con motilidad –

rápida
a K= alkaline; A= acid
b An alkaline reaction (purple) in the butt of the medium indicates that lysine was
decarboxylated. An acid reaction (yellow) in the butt indicates that lysine was
not decarboxylated.

B. ANÁLISIS BIOQUÍMICOS ADICIONALES
La reacción de la cuerda, el agar hierro de Kligler (AHK), el agar

hierro triple azúcar (AHTA) o el agar hierro lisina (AHL), la
coloración de Gram y una preparación húmeda de motilidad, son
otras pruebas que pueden usarse para detectar los aislamientos
antes de que se prueben con el antisuero (véase la Tabla 19). Debe
determinarse la utilidad de estas pruebas antes de incluirlas en la
rutina; la justificación de cada prueba (por ejemplo, el uso de la
prueba de la cuerda para sacar las Aeromonas) se incluye en la
descripción de los métodos que figuran a continuación. 7
1. LA PRUEBA DE LA CUERDA
La prueba de la cuerda utiliza crecimiento fresco de un agar no

selectivo y es útil para excluir las especies que no son Vibrio,
particularmente las de Aeromonas. La prueba de la cuerda puede
desarrollarse en una lámina de vidrio o en una placa plástica de
Petri, suspendiendo un crecimiento de agar infusión de corazón (u
otro medio no inhibidor) durante 18–24 horas en una gota de
solución acuosa de desoxicolato de sodio al 0,5%. Si el resultado
es positivo, las células bacterianas serán lisadas por el
desoxicolato de sodio, la solución perderá turbidez y el ADN se
desprenderá de las células lisadas, causando la viscosidad de la
mezcla. Se formará una “cuerda” mucoide cuando se introduzca
lentamente un asa de inoculación en la suspensión (Figura 47). Las

cepas de V. cholerae son positivas, mientras que por lo general las

cepas de Aeromonas son negativas (véase la Tabla 19). Otras
especies de Vibrio pueden dar una reacción positiva o débil a la
prueba de la cuerda.7
FIGURA 47: Prueba de la cuerda positiva con Vibrio cholerae

2. AGAR HIERRO DE KLIGLR Y AGAR HIERRO TRIPLE

AZÚCAR
El AHK y el AHTA sirven para excluir las especies de Pseudomonas y

ciertas Enterobacteriaceae. Es importante que el agar hierro de
Kligler y el agar hierro triple azúcar sean preparados de manera que los
tubos tengan un tope profundo y una cuña larga. Si el tope no es
suficientemente profundo se pueden generar reacciones engañosas en
estos medios. Se considera aceptable un tubo preparado con un tope de
aproximadamente 3,5 cm de profundidad y una cuña de
aproximadamente 2,5 cm.
Las cuñas de agar AHK o AHTA se inoculan por punción del tope y
estriando la superficie del medio. Incube las cuñas a 35°C–37°C y
examínelas durante 18–24 horas. Todas las tapas de los tubos de los
medios bioquímicos deben aflojarse antes de la incubación; esto es de
particular importancia para las cuñas de AHK o AHTA. Si las tapas están
muy ajustadas y existen condiciones de anaerobiosis en el tubo, ocurrirá
una reacción inapropiada y las reacciones características de V.cholerae
pueden no presentarse.7

Las reacciones de V. cholerae en AHK que contenga glucosa y

lactosa son similares a aquellas de las Enterobacteriaceae no
fermentadoras de la lactosa (cuña alcalina [roja], tope ácido
[amarillo], no produce gas, ni H2S). Sin embargo, en AHTA las
cepas de V. cholerae producen una cuña ácida (amarilla), un tope
ácido (amarillo), no producen gas, ni H2S.7
3. AGAR HIERRO LISINA
El AHL sirve para detectar aislamientos de Aeromonas y ciertas

especies de Vibrio, las cuales, a diferencia del V. cholerae, no
decarboxilan la lisina. El AHL tiene que ser preparado de manera
que los tubos tengan un tope profundo (de aproximadamente 3,5

cm) y una cuña larga (de aproximadamente 2,5 cm). Si el extremo

del AHK o del AHTA no es suficientemente profundo, pueden
generarse reacciones engañosas en este medio. En el AHL, la
descarboxilación de la lisina ocurre solamente en condiciones de
anaerobiosis y, por insuficiencia del medio en el tubo, puede
ocurrir una reacción falsa negativa. Inocule e AHL puncionando
el tope y estriando la cuña; después de incubar durante 18–24
horas a 35°C–37°C, examine la cuña del AHL para ver las
reacciones típicas de cholerae. Los microorganismos que
producen lisina descarboxilasa en AHL causan una reacción
alcalina (color púrpura) en el extremo del tubo ; los microorganismos
sin la enzima producen una reacción ácida (color amarillo) en el tope
del tubo. La producción de H2S se manifiesta por un
ennegrecimiento del medio. La reacción del AHL para el V. cholerae
es típica, con una cuña y un tope alcalinos (púrpura), y sin
producción de gas ni H2S (véase la Tabla 19). Las cepas de Proteus
y Providencia spp. producirán con frecuencia una cuña roja causada
por desaminación de la lisina.7
4. COLORACIÓN DE GRAM
Examinando una cuña de crecimiento de toda la noche de Vibrio

cholerae en agar infusión de corazón por la coloración de Gram, se
demostrarán los típicos bacilos pequeños, en forma de curva o
coma, gramnegativos (véase la Tabla 19). La tinción con cristal
violeta es solamente una técnica más rápida, que demostrará
también la morfología típica de las células de las especies de
Vibrio.7
A. MONTAJE HÚMEDO ENTRE CUBREOBJETOS Y

PORTAOBJETOS
Se ha usado microscopias de campo oscuro y por contraste de fase

para detectar aislamientos con sospecha de ser V. cholerae. Con
estas técnicas, las suspensiones en solución salina se examinan
microscópicamente buscando la presencia de microorganismos,
bacilos pequeños con forma típica de curva o coma y alta motilidad
(“estrella fugaz”) (véase la Tabla 19).7
5. IDENTIFICACIÓN SEROLÓGICA DE AISLAMIENTOS DE

V. CHOLERAE O1 Y O139
Si se sigue la identificación bioquímica presuntiva de un agente

como V. cholerae, es apropiado confirmarlo por serología. Si se
sospecha que hay una epidemia de cólera, el agente causal más
común es V. cholerae O1. Si la cepa aislada no corresponde a V.
cholerae O1, habrá que probar con V. cholerae O139. Si no se aísla
ninguno de estos microorganismos, será necesario enviar las
muestras de heces a un laboratorio de referencia. Los laboratorios
locales y regionales tienen que enviar al laboratorio de referencia
los aislamientos que requieran pruebas con el antisuero O139; si
el laboratorio nacional de referencia no está capacitado para
confirmar la identificación de un aislamiento de V. cholerae como
O1 u O139, algún laboratorio internacional de referencia puede
guiarlo.7

Para conservar recursos, el laboratorio puede probar primero con

los antígenos somáticos O1 de V. cholerae y después, con el
antisuero O139 solo en caso de que el aislamiento no dé una
reacción de aglutinación positiva con el antisuero O1.7
6. IDENTIFICACIÓN PRESUNTIVA USANDO LOS

ANTISUEROS O1 Y O139
Para la prueba de aglutinación en láminas con los antisueros

polivalentes O1 u O139, se debe usar crecimiento fresco con
sospecha de ser V. cholerae en medio de agar no selectivo. El uso de
crecimiento de agar tiosulfato, citrato, sales biliares, sacarosa (ATCBS)
puede dar una reacción falsa negativa. Después de 5 a 6 horas de
incubación, el crecimiento en la superficie de la cuña es casi siempre
suficiente para realizar la prueba de aglutinación en lámina con el
antisuero; si no, incube por un período más largo. Si el aislamiento
no aglutina con el antisuero O1, pruebe con el antisuero O139. Si la
reacción con el polivalente O1 o con el antisuero O139 es positiva,
el aislamiento puede ser notificado presuntamente como de V.
cholerae O1 u O139. Estos aislamientos presuntivos de V. cholerae
O1 pueden probarse con antisueros monovalentes de Ogawa e Inaba
(métodos que se presentarán a continuación). Una vez que una
colonia de una placa ha sido identificada como V. cholerae O1 u
O139, no es necesario seguir probando otras colonias de la misma
placa. (Véase el Apéndice 2 para el análisis del control de calidad
de los antisueros.)7

7. CONFIRMACIÓN DE V. CHOLERAE O1 CON ANTISUEROS INABA Y
OGAWA
El serogrupo O1 de V. cholerae se ha dividido en otros tres serotipos: Inaba, Ogawa

y Hikojima (el cual es muy raro). La identificación de serotipos se hace por
aglutinación en antisueros monovalentes por tipo específico de antígenos O (Tabla
20). Una reacción positiva con cualquiera de los antisueros Inaba u Ogawa es
suficiente para confirmar la identificación de un aislamiento de V. cholerae O1. Los
aislamientos cuya aglutinación es débil o lenta con el antisuero del serogrupo O1 y
que no aglutinan con el antisuero de Inaba o Ogawa, se consideran que no
pertenecen al serogrupo O1. La identificación con estos antígenos es válida
solamente para los aislamientos del serogrupo O1. Por esta razón, los antisueros
Inaba y Ogawa nunca deben usarse con cepas que son negativas con el antisuero
polivalente O1.Con frecuencia, las cepas de un serotipo producen una aglutinación
lenta o débil con el antisuero de otro serotipo, dependiendo de lo bien que hayan
sido absorbidos los antisueros específicos para el serotipo. Por esta razón, se deben
examinar simultáneamente las reacciones de aglutinación con los antisueros de
Inaba y Ogawa; debe usarse la reacción más fuerte y más rápida para la
identificación del serotipo. Con antisueros adecuadamente absorbidos, son raras, si
las hay, las cepas que aglutinan muy fuerte y similarmente con ambos antisueros.
(Ogawa e Inaba). Si se sospechara de tales reacciones, las cepas deben ser remitidas
a un laboratorio de referencia más exámenes y pueden considerarse como “posible
serotipo Hikojima.7

TABLA 20: Reacciones de aglutinación en antisuero absorbido de serotipos de Vibrio cholerae

serogrupo O1
V.cholerae serotipo O1 antisuero Ogawa antisuero Inaba
Ogawa +a –b
Inaba – +
Hikojima c + +
a + indica una reacción de aglutinación positiva en el antisuero absorbido.
b – indica una reacción de aglutinación negativa en el antisuero absorbido.
c si existe una reacción positiva en ambos antisueros (Ogawa y Inaba) y se sospecha el serotipo Hikojima, envíe el aislamiento a un laboratorio de
referencia internacional, siguiendo las regulaciones de embalaje que se presentan en el Apéndice 12.
8. PROCEDIMIENTO PARA LA AGLUTINACIÓN EN LÁMINA
Las pruebas de aglutinación para los antígenos somáticos O para V. cholerae

pueden realizarse en una placa de Petri o en una lámina de cristal limpia.7
a) Divida la lámina en secciones con un lápiz de cera y coloque una pequeña

gota de solución salina fisiológica en cada sección de la lámina.7
b) Saque una porción del crecimiento de la superficie del medio de AHK,

AHTA o AIC u otro medio de agar no selectivo usando un asa de
inoculación o aguja, un palillo aplicador estéril o un mondadientes. (No se
deben hacer las pruebas serológicas con crecimiento de medios selectivos
como agar MacConkey o agar DXL, porque puede generar resultados
serológicos falsos.) Emulsione el crecimiento en cada gota de solución
salina fisiológica en la lámina y mezcle completamente para crear una
suspensión moderadamente lechosa.7
c) Añada una pequeña gota de antisuero a una de las suspensiones; la

segunda suspensión sirve como control. Para conservar antisuero, se
pueden usar volúmenes muy pequeños, por ejemplo 10 µl; si no se dispone
de micropipeta, se puede usar un asa curva de inoculación para dispensar
pequeñas cantidades de antisuero. Por lo regular, los volúmenes
aproximadamente iguales de antisuero y de suspensión del crecimiento

se mezclan, aunque el volumen de la suspensión puede llegar a ser el doble
del volumen del antisuero.7
d) Mezcle bien la suspensión y el antisuero a modo de mecedora, mueva la

lámina varias veces para observar la autoaglutinación. Se ve mejor la
aglutinación si se observa la lámina bajo una luz brillante y sobre un fondo
negro. Si la reacción es positiva, a los 30 segundos o 1 minuto aparecerá el
precipitado (véase la Figura 42). Examine la suspensión de salina
cuidadosamente para estar seguro de su uniformidad y de que no muestra
grumos resultantes de la autoaglutinación. Si hay autoaglutinación, el cultivo
se caracteriza como “rugoso” y no puede ser serotipificado.7
9. CONFIRMACIÓN DE V. CHOLERAE O139
Los aislamientos sospechosos de ser V. cholerae que reaccionan con antisuero

O139, pero no con el antisuero polivalente O1 deben enviarse a un laboratorio de
referencia. La confirmación de V. cholerae O139 incluye las pruebas para la
producción de enterotoxina colérica y la verificación del antígeno O139 por
aglutinación en lámina con antisuero O139. No se han identificado serotipos del
serogrupo O139. Los ensayos de enterotoxinas (PCR, IE y ADN) son complejos y
no están comprendidos en este manual. Hay pocos laboratorios capaces de hacer
estas pruebas, por lo que principalmente se lleva a cabo en laboratorios
internacionales de referencia.7
Después de identificado el agente, se puede comenzar con las pruebas para

identificar los patrones de susceptibilidad a los antimicrobianos, si es que se van a
usar los últimos para el tratamiento del cólera.
3.10. TRATAMIENTO
El objetivo del tratamiento es restablecer los fluidos y electrolitos a través de la

hidratación.1
a. HIDRATACIÓN
Existen diversos protocolos de re-hidratación, pero lo básico es reconocer el grado de

deshidratación para seleccionar adecuadamente la vía de administración de fluidos. Para
3 el 80% de los casos, la administración de solución de hidratación oral es eficaz y

suficiente con soluciones que contengan glucosa y electrolitos. La hidratación vía
endovenosa (EV) se reserva para los casos graves con deshidratación severa y en aquellos
que no toleran la hidratación por vía oral. La fase inicial de rehidratación se debe realizar
en 2 a 4 horas para continuar con una hidratación de mantención. Entre las soluciones
recomendadas para la hidratación EV está el Ringer lactato por la reposición de
bicarbonato, la solución salina normal no está recomendada. 1
b. TRATAMIENTO ANTIMICROBIANO
Los antimicrobianos tienen un rol secundario en el tratamiento del cólera, ayudan a

reducir el volumen de las deposiciones, acortan el período de síntomas y excreción
bacteriana. La cepa causante del actual brote en Haití ha demostrado ser susceptible a
doxiciclina y también a ciprofloxacino y macrólidos: Tratamiento de elección: Adultos:
Doxiciclina 300 mg. oral por una vez. Niños menores de 8 años: Azitromicina 10 mg/Kg.
por vía oral por 3 días. Niños mayores de 8 años: Doxiciclina 4 mg/ kg (máx 300 mg)
por vía oral por 1 vez Embarazadas: Azitromicina 500 mg. por vía oral por 3 días
Tratamiento alternativo: Adultos: Ciprofloxacino 1 gr. por vía oral por una vez
Azitromicina 500 mg. por vía oral por 3 días. Niños: Ciprofloxacino en dosis única de
20mg/Kg de peso El tratamiento médico precoz y adecuado reduce considerablemente la
mortalidad alcanzando tasas de letalidad inferiores al 1%.1
3.11. PREVENCIÓN Y CONTROL
a. MEDIDAS GENERALES
Se deben mantener estrictas medidas de higiene, entre éstas: 1
• Lavado frecuente de manos: antes de comer o preparar alimentos, antes de

amamantar, luego de ir al baño, de limpiar a sus hijos luego de ir al baño o
mudarlos y después de cuidar a alguien enfermo.
• Consumir agua potable o embotellada para beber, lavado de dientes y limpieza
de áreas de preparación de alimentos.
• Lavar, pelar y cocinar los alimentos en especial pescados y mariscos.
b. MEDIDAS ESPECÍFICAS

La quimioprofilaxis para contactos intrafamiliares de casos de cólera no ha

demostrado ser útil, sin embargo, pudiese ser considerada en áreas geográficas de alta
transmisibilidad de la infección siempre junto a otras medidas de prevención. En
nuestro país existe registrado un producto de administración oral indicado para la
“inmunizacion activa de adultos y niños a partir de los dos años de edad, que viajen
por períodos menores de seis meses a regiones endémicas de cólera". Se deben recibir
dos dosis y pasar varias semanas antes que las personas estén protegidas, por lo que
las vacunas no reemplazan las medidas generales de prevención. Debido a que esta
enfermedad no es objetivo del PNI, por no ser un problema sanitario en nuestro país,
la disponibilidad de este producto está limitada a establecimientos del sector privado.1
IV. CONCLUSIONES
Vibrio cholerae es una bacteria Gram negativa anaerobia facultativa, flagelada. La
especie es causante de la enfermedad del cólera en humanos. Esta enfermedad intestinal
provoca fuertes diarreas y puede causar la muerte si no es atendida adecuadamente. Causa
más de 100.000 muertes al año, la mayoría en niños
Los aislamientos de V. cholerae serogrupo O1 están clasificados en dos biotipos: El Tor

y el clásico, con base en varias características fenotípicas. Por lo regular, el biotipo El Tor
causa virtualmente todos los casos de cólera en el mundo; los aislamientos del biotipo
clásico no se encuentran fuera de la India o Bangladesh. Además, las cepas de V. cholerae
O1 se clasifican en dos serotipos (Inaba y Ogawa) con base en la aglutinación con
antisuero
A mediados de 2000, cuando se escribía este documento, los agentes antimicrobianos

recomendados por la OMS para el tratamiento de los pacientes con cólera incluían
tetraciclina, doxiciclina, furazolidona, trimetoprimasulfametoxazol, eritromicina y
cloranfenicol. También se consideran eficaces los fármacos ciprofloxacino y
norfloxacino.
V. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS
1) Momba, M. and Azab El-Liethy, M. Vibrio cholerae and Cholera

biotypes.[internet].2017[citado el 25 de octubre del 2019]. Michigan State
University, E. Lansing, MI, UNESCO:Global Water Pathogen
Project.Disponible en http://www.waterpathogens.org/book/Vibrio

2) Carroll K, Hobden J , Miller S, Morse S , et al . Jawetz, Melnick y Adelberg:

Microbiología Médica. 27° edición .Mexico: McGraw-Hill; 2016. Cap. 17.
pp.235-237
3) Murray P, Rosenthal K, Pfaller M.Microbiología Médica. 8 edición.España:
Elservier; 2017.cap.28.pp.273-276
4) Washintong C.W , Koneman E.W, Allem S.D, Janda W.M.et al . Koneman
Diagnóstico microbiológico Texto y Atlas en color.6° edición .Buenos Aires,
Argentina : Editorial medica panamericana; 2008.cap.8.pp.387-390
5) Maguiña Vargas C, Seas Ramos C, Galán Rodas E , Santana Canchanya J.
Historia del cólera en el Perú en 1991.[inernet]2010[citado el 25 de octubre
del 2019]. Acta Med Per 27(3) .Disponible en :
http://www.scielo.org.pe/pdf/amp/v27n3/a11v27n3
6) Manual de Laboratorio para la Identificación y Prueba de Susceptibilidad a
los Antimicrobianos. Vibrio cholerae.[internet]2016[citado 25 de octubre del
2019] cap IX. .Disponible en :
http://www.bvsde.paho.org/texcom/colera/manuallabcap9.pdf
7) CDC. Aislamiento de Vibrio cholerae a partir de muestras
fecales.[internet]2016[citado el 25 de octubre del 2019].Disponible :
https://www.cdc.gov/cholera/pdf/es/Aislamiento-de-Vibrio-cholerae-a-
partir-de-muestras-fecales_cap%C3%ADtulo-4.pdf

Vibrio Cholerae

Cargado por

Información del documento

Descripción original:

Derechos de autor

Formatos disponibles

Compartir este documento

Compartir o incrustar documentos

Opciones para compartir

¿Le pareció útil este documento?

¿Este contenido es inapropiado?

Copyright:

Formatos disponibles

Vibrio Cholerae

Cargado por

Copyright:

Formatos disponibles

20

FUNDAMENTOS DE AYUDA DIAGNÓSTICA I

SANDY NICOLE BURGOS CABANILLAS 1

En el pasado, la permanencia de V. cholerae toxigénico en el medio

SANDY NICOLE BURGOS CABANILLAS 2

principalmente a la transmisión fecal-oral. Actualmente, se ha

- Proporcionar al estudiante una amplia comprensión de los

- Describir la epidemiología y la clasificación, los métodos

- Reconocer los biotipos, la ruta de transmisión y así como la

SANDY NICOLE BURGOS CABANILLAS 3

- Brindar un enfoque integral de la patogenia de Vibrio cholerae

- Analizar los distintos tipos de diagnóstico microbiológico del

III. MARCO TEÓRICO

Los miembros del genero Vibrios son bacilos gramnegativos curvos 0

SANDY NICOLE BURGOS CABANILLAS 4

estuarios pertenecen al grupo de "vibriones marinos" y son dificiles de

SANDY NICOLE BURGOS CABANILLAS 5

3.2. CLASIFICACIÓN TAXONÓMICA

CLASE Gamma Proteobacteria

Bacilo gram negativo, no formador de esporas, anaerobio facultativo,

El Vibrio cholerae, es un bacilo Gram negativo, curvo, perteneciente a la

SANDY NICOLE BURGOS CABANILLAS 6

contaminada con el Vibrio, la dosis infectante es variable y depende del

3.4. FISOLOGÍA Y ESTRUCTURA ANTIGÉNICA

Las especies de Vibrio pueden crecer en una variedad de medios sencillos

SANDY NICOLE BURGOS CABANILLAS 7

Autor: Emilio Bueno, Brandon Sit, Matthew K. Waldor & Felipe

La mayor parte de los vibrios tienen flagelos polares (importantes para su

SANDY NICOLE BURGOS CABANILLAS 8

para subdividir las especies de Vibrio en serogrupos: se han definido 200

de V cholerae, múltiples serogrupos de V vulnificus y V parahaemol ticus.

V. cholerae 01 no produce ninguna cápsula, así que las infecciones

SANDY NICOLE BURGOS CABANILLAS 9

una estructura similar. En el género Vibrio también es frecuente encontrar

3.5. PATOGENÍA Y INMUNIDAD

El bacteriófago CTX<t> codifica los genes para las dos subunidades de la

Un anillo compuesto por cinco subunidades B idénticas de la toxina del

máxima actividad de la enfermedad. Está acusada pérdida de líquidos

1) el TCP codificado por el complejo génico tcp y

2) las proteínas quimiotácticas codificadas por los genes cep. En

SANDY NICOLE BURGOS CABANILLAS 11

A diferencia de otros serotipos distintos del 01, V. cholerae 0 139 posee el

3.6. MECANISMO FISIOPATOLÓGICO DELM V.

V.cholerae es el prototipo de los síndromes diarreicos en los cuales la

SANDY NICOLE BURGOS CABANILLAS 12

una toxina que se unen a un receptor sobre la membrana de la célula

Secuencia que conduce a la gastroenteritis inducida por V. cholerae

SANDY NICOLE BURGOS CABANILLAS 13

1. Los microorganismos ingeridos en aguas contaminadas deben pasar

2. Para producir enfermedad, las células bacterianas de V. cholerae deben

3. V. cholerae produce una molécula de enterotoxina compuesta por dos

SANDY NICOLE BURGOS CABANILLAS 14

molécula de la toxina, que conduce a la internalización de la enzima A en

4. El AMP cíclico impide la reabsorción de iones sodio a través de la

SANDY NICOLE BURGOS CABANILLAS 15

deshidratación y desequilibrio electrolítico que pueden conducir a acidosis

Ocurrieron seis pandemias (epidemias en todo el mundo) de cólera entre

SANDY NICOLE BURGOS CABANILLAS 16

vibrios sobreviven en agua hasta por tres semanas. V. cholerae vive en

3.8. MANIFESTACIONES CLÍNICAS

El cólera es una enfermedad diarreica aguda, que afecta a individuos de

El 80% de los casos son asintomáticos o cursan con un cuadro leve. Un

SANDY NICOLE BURGOS CABANILLAS 17