• Procesamiento, estabilidad y localización

de ARN eucariota.
RNA es modificado en el núcleo
• ARN nuclear heterogéneo (hnRNA): ARN que
comprende transcripciones de genes nucleares
elaborados por la ARN polimerasa II; tiene una
amplia distribución de tamaño y baja estabilidad.
• hnRNP: forma de ribonucleoproteína del hnRNA
(ARN nuclear heterogéneo), en el que el hnRNA
forma un complejo con proteínas.
• Los pre-ARNm no se exportan hasta que se completa
el procesamiento; por tanto, se encuentran sólo en el
núcleo.
 El extremo 5 'del ARNm eucariótico está protegido
• La caperuza o casquete (CAP) del 5 ʹ se forma agregando una G a la base
terminal através de un enlace 5ʹ-5 ʹ.
El proceso de protección tiene lugar durante la transcripción y puede ser
importante para liberar la pausa de transcripción.

El extremo 5 ‘ CAP del

ARNm y está metilado
en varias posiciones.
Los sitios de empalme nuclear son de secuencia
corta
• Los sitios de empalme son las secuencias que rodean
inmediatamente los límites exón-intrón. Se nombran por sus
posiciones relativas al intrón.
• El sitio de empalme 5 'en el extremo 5' (izquierdo) del intrón
incluye la secuencia de consenso GU.
• El sitio de empalme 3 'en el extremo 3' (derecho) del intrón
incluye la secuencia de consenso AG
• Regla GU-AG Regla GT-AG en términos de secuencia de ADN
para intrones principales
• AU-AC para intrones menores
Los extremos de los intrones están definidos por la regla GU-AG.
 Los sitios de empalme se leen en pares

• El empalme depende únicamente del reconocimiento de

pares de sitios de empalme.
• Todos los sitios de empalme 5’ y todos los sitios de empalme
3' son funcionales.
• Las secuencias conservadas adicionales en los sitios de
empalme 5 'y 3' definen sitios de empalme funcionales entre
muchos otros sitios potenciales en el pre-ARNm.
 Splice Sites Are Read in Pairs

Las uniones de empalme se reconocen solo en las combinaciones correctas por pares.
 El empalme de pre-ARNm se produce a través
de un lazo
• El empalme requiere los sitios de empalme 5 'y 3' y un sitio de
bifurcación hebra arriba del sitio de empalme 3 ‘.
• La secuencia de la ramificación es conservada en la levadura,
pero no asi en eucariotas multicelulares.
• Se forma un lazo cuando el intrón se escinde en el sitio de
empalme 5 'y el extremo 5' se une a una posición 2 'en una A
en el sitio de ramificación del intrón.
 El empalme se produce en dos etapas.
Primero se escinde el extremo 5’ del y
luego se une al extremo 3’ de otro exón
 Los snRNA son necesarios para el empalme

• ARN citoplasmáticos pequeños(scRNA; scyrps) – ARN que

están presentes en el citoplasma (y a veces también se
encuentran en el núcleo).
• ARN nuclear pequeño(snRNA; snurps) – Una de las
muchas especies pequeñas de ARN confinadas al núcleo;
varios de ellos están involucrados en el empalme u otras
reacciones de procesamiento de ARN.
• ARN nucleolar pequeño(snoRNA) – un ARN nuclear
pequeño que se localiza en el nucleolo.
 Los snRNA son necesarios para el empalme
• Los cinco snRNP involucrados en el empalme son U1, U2, U5,
U4 y U6.
• Junto con algunas proteínas adicionales, los snRNP forman el
espliceosoma.

The spliceosome is ~12 MDa. Five

snRNPs account for almost half of
the mass.
 Los snRNA son necesarios para el empalme

• Todos los snRNPs excepto el U6 contienen una secuencia

conservada al que se unen las proteínas Sm ( En
enfermedades autoinmunes se ha podido encontrar
anticuerpos anti-SM.)
• Factor de empalme: componente proteico del espliceosoma
que no forma parte de uno de los snRNP.
• Transesterificación: reacción que rompe y crea enlaces
químicos en una transferencia coordinada de modo que no se
requiere energía
PuAU3-6GPu
pre-mRNA en proceso de empalme

Formación del complejo de empalme.

• En células de eucariotas multicelulares, las proteínas SR
juegan un papel esencial en el inicio de la formación del
complejo de corte y empalme.
• El emparejamiento de sitios de corte y empalme se puede
lograr mediante la definición de intrones o exones.
Ensamble del espliceosoma

• El complejo inicial de corte y

empalme progresa a pre-
espliceosoma (el complejo A)
en presencia de ATP.
• El reclutamiento de snRNP de
U5 y U4 / U6 convierte el
complejo A en el
espliceosoma maduro (el
complejo B1).
• A continuación, el complejo
B1 se convierte en el
complejo B2 en el que se
libera U1 snRNP para permitir
que U6 snRNA interactúe con
el sitio de empalme 5 '.
• Cuando U4 se disocia de U6
snRNP, U6 snRNA puede
emparejarse con U2 snRNA
para formar el sitio catalítico
activo.
• Ambas reacciones de
transesterificación tienen
lugar en el espliceosoma
activado (el complejo C).
• La reacción de empalme es
reversible en todos los pasos.
 Un espliceosoma alternativo utiliza diferentes
snRNP para procesar la clase menor de intrones

• Una vía de empalme alternativa utiliza otro conjunto de

snRNP que comprenden el espliceosoma U12.
• Los intrones diana se definen por secuencias de consenso más
largas en las uniones de empalme en lugar de estrictamente
de acuerdo con las reglas GU-AG o AU-AC.
• Los espliceosomas mayores y menores comparten factores
proteicos críticos, incluidas las proteínas SR
El empalme está acoplado temporal y funcionalmente
con varios pasos en la expresión genética

• El empalme puede ocurrir durante o después de la

transcripción.
• Las maquinarias de transcripción y empalme están integradas
física y funcionalmente.
• El empalme está conectado a la exportación de ARNm y al
control de estabilidad.
• Complejo de unión exón (EJC): complejo proteico que se
ensambla en las uniones exón-exón durante el empalme y
ayuda en el transporte, localización y degradación del ARN.
• Desintegración del
ARNm mediada por
mutacion sin sentido
(NMD): una vía que
degrada un ARNm
que reconoce una
mutación sin sentido
antes del último
exón.
 El empalme alternativo es una regla, en eucariotas
multicelulares
• Se pueden excluir o incluir exones específicos o secuencias
exónicas en los productos de ARNm utilizando sitios de corte y
empalme alternativos.
• El empalme alternativo contribuye a la diversidad estructural
y funcional de los productos génicos.
: Different modes of alternative splicing.
13 -15-16-17

13-14-17

13-17
• La determinación del sexo en Drosophila implica una serie de
eventos de empalme alternativo en genes que codifican
productos sucesivos de una vía.
 4

La determinación del sexo en D. melanogaster implica una vía en la que

ocurren diferentes eventos de empalme en las hembras.
 El empalme se puede regular mediante
potenciadores y silenciadores de empalmes
exónicos e intrónicos

Exonic and intronic sequences can modulate the splice site selection by functioning as
splicing enhancers or silencers.
 Las reacciones de empalme trans utilizan ARN
pequeños

• Las reacciones de empalme

generalmente ocurren solo en cis
entre sitios de empalme en la
misma molécula de ARN.
• El empalme trans se produce en
tripanosomas y gusanos donde una
secuencia corta (ARN SL) se
empalma en los extremos 5 'de
muchos ARNm precursores.
• Los SL RNA tienen una estructura
que se asemeja al sitio de unión a
Sm de los U snRNA.
Figure 21.26: Splicing usually occurs
only in cis between exons carried on
the same physical RNA molecule.
 Los extremos 3 'de los ARNm se generan por
escisión y poliadenilación

• La secuencia AAUAAA es una señal

de escisión para generar un extremo
3 'del ARNm que está poliadenilado.
• La reacción requiere un complejo de
proteínas que contiene un factor de
especificidad, una endonucleasa y
poli (A) polimerasa.
El factor de especificidad y la
endonucleasa escinden el ARN aguas
Figure 21.29: The sequence AAUAAA
abajo de AAUAAA.
is necessary for cleavage to generate
a 3’ end for polyadenylation.
Los extremos 3 'de los ARNm se generan por
escisión y poliadenilación

• El factor de especificidad y la
poli (A) polimerasa agregan ~
200 residuos A de forma
procesiva al extremo 3 '.
La cola de poli (A) controla la
estabilidad del ARNm e influye
en la traducción.
 The 3′ mRNA End Processing Is Critical for
Termination of Transcription

• Hay varias formas de

finalizar la transcripción por
diferentes ARN polimerasas.
• La formación del extremo 3
'del ARNm indica la
terminación de la
transcripción de Pol II.

Figure 21.31: Transcription by Pol I and

Pol III uses specific terminators to end
transcription.
• Allosteric
model
• Torpedo
model
Estabilidad y localización del
mRNA
Caracteristicas de los mRNA
Tipos de ribonucleasas
Determinación de la vida media de los
mRNA