7.

BIOCATALIZADORES: ENZIMAS

ENZIMAS —> Son proteínas sintetizadas por los seres vivos cuya Por eso decimos que son biocatalizadores.
función es catalizar determinadas reacciones bioquímicas, es decir, Modifican químicamente a las sustancias a las que
incrementar la velocidad de la reacción al disminuir la energía de se unen (sustratos) que son transformadas en
activación necesaria para la misma. otras sustancia distintas (productos).

7.1. COMPOSICIÓN DE LAS ENZIMAS

El componente principal de todas las enzimas es de carácter proteico, es decir, una cadena polipeptídica (o varias).
De hecho, algunas enzimas son exclusivamente proteicas.
Otras enzimas, por el contrario, presentan una parte proteica y otra parte no proteica. Estas enzimas se denominan holoenzimas. En
ellas hablamos de:
Apoenzima: Es la parte proteica del holoenzima.
Cofactor: Es la parte no proteica del holoenzima. A su vez, los cofactores pueden ser:
- Cofactores metálicos: Son cationes metálicos que suelen requerirse para activar al enzima. Hacen que la enzima adopte una
estructura adecuada para unirse al sustrato. Ej.: Mg2+, Zn2+, Ca2+, Mn2+, Fe2+…
- Coenzima: Son moléculas orgánicas más o menos complejas que intervienen en el mecanismo catalítico (ej. donan o ceden
electrones) o favorecen la unión del sustrato. Ej.: NAD+, FAD, NADP+, coenzima A…
Algunas enzimas pueden requerir de ambos tipos de cofactores.
La unión apoenzima-cofactor puede ser de dos tipos:
– Débil y transitoria (mediante enlaces no covalentes). Es muy común en coenzimas aceptoras de electrones (ej. NAD+) y en todos los
cationes.
– Fuerte y permanente (mediante enlaces covalentes). En este caso el cofactor es una coenzima y se le denomina grupo prostético (ej.
grupo hemo de los citocromos).
La apoenzima por sí sola es inactiva. Solo cuando se une al cofactor o cofactores necesarios puede realizar su función (es decir,
cuando la holoenzima está completa).
Por supuesto, las enzimas como cualquier proteína pueden inactivarse si sufren una desnaturalización (como toda proteína, tienen
estructuras primaria, secundaria, terciario y, algunas, cuaternaria).

7.2. ESTRUCTURA DE LAS ENZIMAS

Las enzimas son básicamente proteínas (total o mayoritariamente en el caso de las holoenzimas), formadas por aminoácidos.
En la cadena polipeptídica podemos hablar de 4 tipos de aminoácidos según su importancia en la función catalítica:
• Aminoácidos no esenciales: podrían suprimirse o cambiarse por otro sin que la enzima perdiese su actividad.
• Aminoácidos estructurales: no intervienen directamente en la catálisis, pero si se suprimen o sustituyen, la enzima pierde su estructura
y, por tanto, su actividad.
• Aminoácidos de unión: actúan sujetando y orientando al sustrato. • Aminoácidos catalíticos: responsables de la catálisis.
Los dos últimos determinan la zona más importante de la enzima al ser en ella donde se lleva a cabo la reacción enzimática: el centro
activo.

CENTRO ACTIVO —> Es la porción de la enzima responsable del reconocimiento y sujeción del
sustrato y de llevar a cabo la catálisis.
El centro activo presenta varias características:
– Está formado por unos pocos aminoácidos, por lo que supone solo una pequeña porción en relación al
tamaño total de la enzima.
– Suele encontrarse en el interior de una hendidura de la enzima.
– La unión enzima-sustrato se establece por interacciones no covalentes (débiles) entre ciertos grupos
funcionales del sustrato con varias cadenas laterales de la enzima. Esto supone que debe existir cierta
complementariedad entre la forma del sustrato y la del centro activo.

 En el centro activo pueden distinguirse dos sitios:

• Sitio de unión: Su misión es orientar y fijar el sustrato a la enzima, lo que supone reconocer el tamaño y la forma del mismo. Está
constituido por aminoácidos de unión y de él depende la especificidad de sustrato.
• Sitio activo o catalítico: Está formado por aminoácidos catalíticos, cuyas cadenas laterales participan directamente en la catálisis (ruptura
y formación de enlaces químicos). De él depende la especificidad de reacción.
Estos dos sitios pueden presentar entre sí dos posiciones relativas:
– Integrados.
– Separados.

Modelos de u nión enzi ma-sustrato

La unión entre enzima y sustrato se debe a la conformación del centro activo de la enzima que está determinado por la estructura
terciaria o cuaternaria. Existen dos modelos para explicar esa complementariedad:

Modelo de llave y cerradura: El centro activo es Modelo de ajuste inducido: El centro activo no está perfectamente
exactamente complementario a la forma del sustrato, de definido. Si el sustrato interacciona con la enzima induce en ella un
modo que este encaja como una llave en su cerradura. cambio conformacional, y configura un centro activo
complementario.

7.3. PROPIEDADES DE LAS ENZIMAS

Aparte de las propiedades que comparten con el resto de proteínas, las enzimas presentan otras características importantes:
Gran poder catalítico: Son biocatalizadores muy eficientes: incluso a concentraciones micromolares (μM) aceleran la velocidad de las
reacciones biológicas un millón de veces o más, y siempre dentro de rangos de pH y temperatura compatibles con la vida.
Doble especificidad: La especificidad reside en la parte proteica de la enzima y puede ser:
- De reacción: Cada enzima cataliza un único tipo de reacción.
Ej.: una quinasa solo “sabe” unir grupos fosfato a una molécula.
- De sustrato: Cada enzima actúa sobre un determinado tipo de molécula o moléculas.
Ej.: la glucoquinasa fosforila glucosa; la hexoquinasa fosforila cualquier hexosa.
Regulación de su actividad: Muchas enzimas aumentan o disminuyen su actividad por efecto de diversos agentes reguladores (pH,
ciertas moléculas, temperatura.. ).

 7.4. MECANISMO DE ACCIÓN ENZIMÁTICA

En una reacción química, dos o más sustancias (reactivos), por efecto de un factor
energético, se transforman en otras sustancias (productos).
A+ B → C + D (reactivos → productos)
En toda reacción química se produce una variación de energía entre los reactivos y
los productos. Dicha variación es la energía libre (G).
Hay 2 tipos de reacciones según esa variación:
Exergónicas/Exotérmicas: cuando desprenden energía, es decir, la energía de los
reactivos es mayor que la energía de los productos.
- reactivos → productos + G
Endergónicas/endotérmicas: cuando absorben energía, es decir, la energía de los
reactivos es menor que la energía de los productos.
- reactivos + G → productos

En principio, las reacciones exergónicas son espontáneas (ocurren por sí

mismas). Pero, con frecuencia, para que se inicien es necesario aportar
previamente cierta cantidad de energía, denominada energía de activación
(Ea), sin la cual la reacción no se produce o es muy lenta.

La Ea inicia la reacción. Una vez iniciada, la reacción tiene lugar con

desprendimiento energético (G + Ea).
reactivos + Ea → productos + Ea + G

Los catalizadores son sustancias que participan en la reacción química

disminuyendo la energía de activación necesaria para que la reacción se
inicie.

Las enzimas se comportan como cualquier catalizador químico:

‣ Se unen a los sustratos y disminuyen la energía de activación necesaria
para que se transforme en el producto o productos.
‣ De ese modo, favorecen o aceleran la velocidad de reacción química.
‣ No alteran la variación de energía libre.
‣ No modifican el equilibrio químico (solo aceleran la llegada a este).
‣ Acabada la reacción con una molécula de sustrato, se recuperan libres
y sin alterar, por lo que pueden volver a realizar su acción sobre otras
moléculas de sustrato.
Todas las reacciones metabólicas están catalizadas por enzimas.

 7.5. LA REACCIÓN ENZIMÁTICA

Las reacciones enzimáticas transcurren siempre con la

formación del complejo enzima-sustrato (resultado de la unión del
sustrato al centro activo de la enzima), cuya formación es
imprescindible para que pueda producirse la reacción.
Al formarse el complejo enzima-sustrato, el sitio catalítico actúa
sobre el sustrato transformándolo en el/los producto/s.
Esto se representa con la siguiente ecuación:

Los productos se separan de la enzima y esta puede unirse de

nuevo a una molécula de sustrato y catalizar una nueva reacción.
Por eso una pequeña cantidad de enzima puede catalizar una
gran cantidad de sustrato.

8. CINÉTICA ENZIMÁTICA

La cinética química es el estudio de la velocidad a la que se produce una determinada reacción

química. Por tanto, la cinética enzimática estudia la velocidad de las reacciones catalizadas por
enzimas.
La velocidad (v) de una reacción puede definirse como la cantidad de sustrato (S) que desaparece
por unidad de tiempo (t), es decir:

La velocidad de las reacciones enzimáticas depende, en principio, de dos factores, que son las
moléculas implicadas en la reacción, es decir, depende de:
Concentración de sustrato
Concentración de enzima .

8.1. CONCENTRACIÓN DE SUSTRATO [S]

La cinética enzimática responde al modelo de Michaelis-Menten.

Al medir la velocidad de una reacción enzimática con distintas
concentraciones de S. (manteniendo temperatura y concentración de
enzima constantes), se obtiene una gráfica como la siguiente:
La velocidad es directamente proporcional a la concentración de S,
hasta llegar a un cierto límite en el cual se alcanza un máximo
(velocidad máxima, Vmax), y ya no varía aunque se incremente la
concentración de S
Ese fenómeno se conoce como saturación por sustrato y se produce
a altas CONCENTRACIONES DE S, porque todas las moléculas de
enzima están unidas a una molécula de sustrato. Es decir, todas las
enzimas están en forma de complejos enzima-sustrato (ES), y no
pueden actuar sobre otros moléculas de sustrato.
La ecuación que rige la velocidad de una reacción enzimática viene
expresada por la ecuación de Michaelis-Menten:
El otro parámetro de esta ecuación es la constante de Michaelis (KM).
Es una constante propia de cada enzima y para unas ciertas
condiciones, y se define como la concentración de sustrato a la que
la velocidad de reacción es la mitad de la velocidad máxima.

 También se puede decir que la KM es la concentración de S a la cual la mitad de las moléculas de enzima están en forma de
complejo ES.
La KM es un parámetro muy importante que indica la afinidad de la enzima por el sustrato:
• Una KM baja, indica que el complejo ES se forma fácilmente (la velocidad semimáxima se alcanza con poca concentración de S).
Es decir, existe una alta afinidad entre la enzima y el sustrato.
• Una KM alta, indica que el complejo ES se forma con dificultad (se necesita una gran concentración de S para alcanzar la
velocidad semimáxima). Es decir, existe una baja afinidad entre enzima y sustrato.
↓ KM → ↑ afinidad E-S
↑ KM → ↓ afinidad E-S

8.2. CONCENTRACIÓN DE ENZIMAS [E]

La enzima es la responsable de la reacción enzimática. Por

tanto, cuanto mayor sea la [E], mayor será la velocidad de
la reacción.
La relación entre [E] y velocidad es directamente
proporcional. Al representar la velocidad en función de la
[E] obtendríamos esta gráfica:
Al representar gráficamente la velocidad en función de la
[S], observamos cómo al doblar la [E] se dobla también
la vmax y vmax/2. Sin embargo, no se altera la KM.

9. REGULACIÓN DE LA ACTIVIDAD ENZIMÁTICA

Las reacciones enzimáticas están reguladas por una serie de factores que intervienen activando o inhibiendo directamente a la
enzima. Estos factores pueden influir, por tanto, en la cinética enzimática.
Los principales factores moduladores de la actividad de una enzima son:
- Temperatura
- pH
- Inhibidores
- Efectores alostéricos
Estudiaremos el efecto de cada uno de ellos sobre las enzimas.

9.1. TEMPERATURA
Las enzimas tienen una temperatura óptima de funcionamiento, a la
que actúa con una eficacia máxima. A medida que la temperatura se
aleja de ese óptimo, la actividad enzimática disminuye.
Al representar la actividad enzimática en función de la temperatura,
se obtienen gráficas similares a esta en todas las enzimas:
Las enzimas presentan temperaturas óptimas dentro de rangos
fisiológicos. En el ser humano suelen estar en torno a los 36-37ºC

Altas temperatu ras. Bajas temperatu ras.

Si la temperatura es mayor que la temperatura óptima de la enzima,
la actividad enzimática disminuye porque comienza a alterarse la
estructura terciaria o cuaternaria de la proteína (se alteran los
enlaces débiles que las estabilizan). Esa alteración puede afectar al
centro activo y, por tanto, a la actividad de la enzima.
Si la temperatura es excesiva puede producirse una
desnaturalización e inactivación total.
Por debajo de la temperatura óptima, la actividad de la
enzima también es menor. Esto se debe a que, como
en cualquier reacción química, la agitación de las
moléculas disminuye y, por tanto, disminuye la
probabilidad de encuentro enzima-sustrato.

 9.2. pH
Normalmente, las enzimas solo actúan dentro de unos ciertos intervalos de
pH y presentan un pH óptimo en el cual su actividad es máxima. Cuanto más
alejado esté dicho valor, menor será la actividad enzimática.
Las gráficas de actividad enzimática en función del pH suelen tener un
aspecto similar a los de la temperatura..
… aunque hay excepciones.
Las variaciones de pH se deben a variaciones en la concentración de iones
(H+, OH–) del medio. Estos iones interaccionan con las fuerzas
electrostáticas (enlaces iónicos y enlaces de H) que mantienen estabilizada
la estructura del enzima. La alteración de dicha estructura
(desnaturalización) provoca una pérdida de actividad.
Cada enzima tiene un pH óptimo (o un rango de pH óptimos). En la mayoría
de las enzimas el pH óptimo estará próximo al pH 7. No obstante, algunas
enzimas deben funcionar a pH extremos (ej. pepsina del jugo gástrico).

9.3. INHIBIDORES
Se llaman inhibidores a aquellas moléculas capaces de unirse a las enzimas y disminuir su actividad.
Existen varios tipos de inhibición, que pueden ser clasificadas en dos grupos: inhibición reversible e inhibición irreversible.

I nhi bición reversi ble

El inhibidor se une a la enzima mediante enlaces débiles, unión que no es permanente, por lo que
puede dejarla libre de nuevo (es reversible). Dicha unión disminuye la unión entre la enzima y el
sustrato.
Un ejemplo es la inhibición reversible competitiva. En ella, cuando el inhibidor se une a la enzima
origina un complejo enzima-inhibidor, que no da lugar a ningún producto e impide la unión del sustrato
a la enzima.
La inhibición reversible competitiva se produce porque el inhibidor tiene una forma similar al sustrato
y puede unirse al centro activo de la enzima. De hecho, las moléculas de inhibidor compiten con las
moléculas de sustrato para unirse a la enzima.
Este tipo de inhibidores disminuyen la afinidad de la enzima por el sustrato (KM), pero no modifican la
vmax, que se puede alcanzar con mayores concentraciones de S.
Por ello, la inhibición se puede revertir aumentando la concentración de S.

I nhi bición i rreversi ble

En ella, el inhibidor se une con la enzima mediante enlace covalente (la unión es irreversible) e impide su total actividad.
El inhibidor puede unirse al centro activo impidiendo que el sustrato llegue al mismo, o bien puede unirse a otra zona de la enzima e
induce un cambio estructural que impide que el sitio catalítico realice su acción (aunque el sustrato esté unido al centro activo).
Estos inhibidores también se conocen como venenos.

Existen dos tipos de efectores alostéricos:

9.4. EFECTORES ALOSTÉRICOS •Activadores alostéricos: Hacen que el
centro activo aumente su afinidad de la
Existe un gran número de enzimas que tienen zonas (distintas enzima por el sustrato. Por tanto, aumenta
al centro activo) que permiten la unión de diversas moléculas. la actividad enzimática.
Este tipo de enzimas se denominan enzimas alostéricas. Las •Inhibidores alostéricos: Disminuyen la
zonas de unión son los centros alostéricos o reguladores, y las afinidad del centro activo por el sustrato.
moléculas que se unen a ellos se denominan efectores alostéricos. Por tanto, disminuye la actividad enzimática.
Cuando el efector se une al centro alostérico de la enzima, induce en ella un Estos mecanismos de regulación enzimática
cambio conformacional que afecta al centro activo, modificando por tanto su son muy habituales en las reacciones
actividad catalítica. metabólicas.