DIAGNÓSTICO MICROBIOLOGICO

Se basa en reconocer un espectro clínico y demostrar la presencia del agente etiológico en el organismo o la huella
inmunológica que pueda dejar este en el paciente. El diagnóstico clínico debe ser confirmado con el diagnostico
microbiológico hecho en el laboratorio. Existen dos tipos:

- Técnicas directas: que se basan en demostrar la presencia del agente microbiano, sus metabolitos o compuestos
antigénicos
- Técnicas indirectas: detecta anticuerpos circulantes o HS retardada reflejo de una infección pasada o actual por un
microorganismo

Aislar un microorganismo no necesariamente significa que sea este quien cause la enfermedad, todo va a depender
del tipo de muestra de lo contrario se deberá sospechar colonización, artefacto o contaminación de la muestra, es un hecho
que las muestras asépticas son más específicas que la colonizadas.

Toma de muestra
Se Debe realizar del sitio exacto de la lesión sin el uso de antimicrobianos, lo más precoz posible y preferiblemente
liquidas.
- Vías respiratorias altas: raramente útiles, excepto cuando se busca un patógeno específico (S pyogenes, Bordetella
pertussis, Corynebacterium diphteriae, meningococos o gonococos). Toma única de faringe con torunda. Cultivos
faríngeos, no indicados en ausencia de fiebre o de linfadenopatía cervical.
- Vías respiratorias bajas: realizar también hemocultivos, muestra efectiva si hay < 10 células epiteliales y > 25
leucocitos por campo. Puede usarse broncoscopia con biopsia mediante cepillo o lavado broncoalveolar (LBA) para
la recogida de Pneumocystis, M. tuberculosis, CMV y hongos.
- Orina: limpieza periuretral, desechar los primeros militros y recolectar la orina a la mitad de la micción. Debe
refrigerarse si no se envía al laboratorio en el plazo de 1 hora (puede mantenerse 4 a 6 horas). En caso de sonda, se
debe pinzar la sonda por cierto tiempo y luego recoger directamente de la sonda (desinfectada) con jeringa y aguja
estériles, y nunca de la punta del Foley o cito-flo.
- Hemocultivos: en todo paciente febril con escalofríos, enfermedad grave, posible endocarditis, infección vascular o
inmunosuprimido. Optimo: 2 a 3 hemocultivos (de sitios distintos) de 10 a 30 ml separados por 15 min a 1 hora,
previos a antibioticoterapia y bajo absoluta asepsia. Evitar recogerlos de vena femoral, de cánulas intravasculares
permanentes o de sangre arterial.
- Líquido cefalorraquídeo: medir además glicemia, proteínas totales, recuentos celulares y cultivos.
- Aparato digestivo: los cultivos de heces permiten detectar MO que no forman parte de la flora intestinal normal o la
proporción de esta y determinar si alguno de ellos se vuelto patológico. Si no se va a cultivar en el plazo de 1 hora,
conservar en glicerol tamponado con fosfato.
- Exudados y líquidos corporales: óptima mediante aspiración de pus con jeringa y aguja a través de la piel
desinfectada.
- Piel y tejidos blandos: generalmente muy contaminados por flora normal, por lo que se debe aspirar con jeringa o
cultivar biopsia en sacabocados.

Demostración del agente

- Examen microscópico: ya sea al fresco o mediante alguna tinción

- Cultivo: permite el crecimiento y reproducción in vitro de bacterias para observar sus propiedades y conseguir
un mejor estudio bioquímico e imnulógico, existen de enriquecimiento, aislamiento y diferencial. Su desventaja
es que los resultados tardan como mínimo 48-72 horas, algunas especies inclusive semanas y meses.
- Identificación: es específica y se logra mediante el aspecto de la colonia, pruebas fisiológicas, químicas o
inmunológicas.
- Comprobación de antigenicidad: solo en algunos casos donde el MO no se sapofítico común
 - Sensibilidad a antimicrobianos (antibiograma): determina al menos el mejor tratamiento específico. Calcula:
o Concentración mínima inhibitoria: menor cantidad en µg/ml capaz de inhibir la multiplicación de una
cepa bacteriana. NO SIEMPRE ES IGUAL A CMI
o Concentración mínima bactericida: menor concentración capaz de matar a la misma cepa bacteriana
o Niveles séricos de antibióticos: útil en pacientes con insuf. Renal o hepática en donde se tengas dudas
de las biodisponibilidad (especialmente si no se puede IV)
o Capacidad bactericida del suero: es la mayor dilución del suero de un paciente al que se le administran
antibióticos, capaz de matar a la bacteria responsable en condiciones en estándar.

Técnica directa Uso Relevantes en procedimiento Comentarios

Se hace un frotis con la muestra, Divide a las bacterias en dos grandes grupos
Diagnostico
se fija, se colorea con violeta Gram+ (se tiñen se violeta) y Gram- (de rosa)
probable o
cristal, se añade lugol, se Útil para seleccionar tratamiento empírico
Tinción de Gram presuntivo
decolora, su vuelve a colorear Económico y rápido
(sumado a clínica y
con fucsina o safranina, se lava y No funciona para bacterias sin pared,
epidemiologia)
observa intracelulares ni muy pequeñas
Demostrar MO Se hace un extendido con la
acido-alcohol muestra, se tiñe con fucsina
Los MO se ven de color rojo y el resto del
Tinción de Ziehl- resistentes fenicada o carbolfucsina, se
material azul
Neelsen (paredes con calienta, se decolora con ácido-
Evidencia mycobacterium
ácidos grasos de alcohol y se contratiñe con azul
cadena larga) de metileno
Igual que Ziehl- Igual que Ziehl-Neelsen pero no Útil para demostrar Criptosporidium,
Kinyoun
Neelsen se caliente Nocordias e Isospora
Muy utilizado para
se tiñe con Giemsa (azul de
evidenciar
metileno y eosina), se Útil para paludismo, toxoplasma,
Giemsa protozoarios
deshidrata con OH absoluto y se Pneumocystis y babesiosis
sanguíneos y
aclara con xilol
rickettsias
Utiliza un haz enfocado de luz
muy intensa en forma de un
Útil para
cono hueco sobre el espécimen
Campo oscuro demostrar
vivo, el cual al moverse dispersa
Treponema
la luz y se hace visible sobre el
fondo oscuro
Se obtiene la muestra del
raspado del fondo de una
Para infecciones
vesícula, se hace el frotis. Se tiñe
Prueba de Tzank por varicela zoster
con Giemsa y se buscan los
y herpes simple
cuerpos de inclusión y las células
gigantes multinucleadas
Técnica de inmunoensayo en la
IgM+ IgG-: aguda
cual un antígeno inmovilizado se
Serología (ej. Detecta títulos de IgM+ IgG+: activa
detecta mediante
ELISA o Ensayo por anticuerpos y IgM- IgG+: convalecencia o crónica
un anticuerpo enlazado a
inmunoabsorción antígenos IgM al 6to día, IgG de 2-3 sem
una enzima capaz de generar un
ligado a enzimas) específicos suero Puede detectar anticuerpos IgM o IgG,
producto detectable como
antígenos y otros anticuerpos específicos
cambio de color por ejemplo
Diagnóstico de
enfermedades
infecciosas agudas Replicación de ADN mediante
PCR (reacción de y que son de difícil ADN polimerasas durante ciclos Es costosa y algunas tardan semanas
cadena demostración sea de altas y bajas temperaturas, Puede utilizarse cualquier tipo de muestra
polimerasa) por cultivo o para poder separar, replicarlas e Altamente sensible y especifica
microscópico… nuevo y amplificar
especialmente
virales
 Prueba no treponémica
detecta en el suero la presencia
Puede dar falsos positivos en:  infecciones por
de reaginas (anticuerpos para el
cualquier otra treponema, embarazo,
material lipídico liberado por
Diagnostico enfermedades autoinmunes, lepra, lupus
VDRL células lesionadas en el curso de
sugestivo de sífilis eritematosos, leucemia, envejecimiento, DM,
la infección) así como lípidos de
tuberculosis, mononucleosis, drogadicción
la superficie celular del
por vía intravenosa, etc.
treponema
Carece de especificidad y sensibilidad
Determina mediante una
Diagnóstico de
reacción de HS retardada la
infección (actual o Muy utilizada en tuberculosis, lepra,
Pruebas de HS de presencia de anticuerpos al
anterior) pero no brucelosis, muermo, chancro blando,
base celular precipitar con el antígeno
de enfermedad linfogranuloma venéreo y difteria
administrado y provocar un
infecciosa
nódulo intradérmico