USO DE AISLADOS NACIONALES EN

BIOREMEDIACION ACUICOLA

John Salazar Fiallo

Arkeaslab S.A
Sociedad Latinoamericana de Acuicultura
2016
 HECES
SOLIDAS / LIQUIDAS
MUDAS
ALIMENTO +
BALANCEADO MO DEL SUELO CAPACIDAD
Y
ALGAS
FERTILIZANTES
MELAZA OTROS DE
CAMARONES
MOP
MICRO Y/O
CAL MATERIALES CARGA ?
OTROS
ORGANISMOS PECES
 Acumulación e Inhibición

Materiales de
Población Natural de
Desecho en
Microorganismos
Aumento
El estado de los fondos de los estanques es
proporcional a nuestro conocimiento y
habilidad en el manejo de piscinas ?
Los bajos niveles de profundidad influyen en el
rápido crecimiento y acumulación de
poblaciones de algas bentonicas

Beatriz Borrega
 La generación de lodos reducidos no
mineralizados, tiende a producir metabolitos
tóxicos afectativos

Beatriz Borrega
La acumulación de hierro no mineralizado,
genera acidez y produce mortalidades de
carácter permanentes.

Yader Rodríguez
 Alternativas Posibles de Corrección :
Condicionantes:
• Alimento
• Densidad de Población
• Renovación
• Insumos Adicionales
• Limo en Suspensión
• Suelos Agrícolas
• Material Orgánico Histórico
• Suelo Biológicamente Pobre
Alternativas:
• Comederos o
Automatización
• Capacidad de Carga
• Recirculación
• Puesta de lo Necesario
• Corrección de Suelos
• Evaluación Previa
• Bioremediación
 Bioremediacion

• Se define como el uso de microorganismos vivos,

componentes celulares y sus enzimas para transformar
y/o mineralizar, materiales orgánicos, residuos de
agentes contaminantes y provocar una alteración del
estado Redox de metales.

• En 1980, Yasuda y Taga anticiparon que las bacterias

serian útiles como agentes de control biológico de
enfermedades y como activadores de la tasa de
regeneración de nutrientes en acuacultura.
Componentes necesarios para un proceso de
Bioremediacion
Aceptor de Electrones

SUSTRATO Bacterias
CONTAMINADO

Células

Donador de Electrones CO2

 Acetato

Residuos
Lípidos
Domésticos

DONADORES
DE
Carbohidratos Piruvato
ELECTRONES

Proteínas Metanol
 BACTERIAS
INTERACCION METABOLICA

JUEGAN UN ROL IMPORTANTE EN LA

DINAMICA
DE NUTRIENTES EN LOS SISTEMAS DE OXIDACION REDUCCION
PRODUCCION
DE ACUACULTURA

PRINCIPALES RESPONSABLES CARBONO

NITROGENO
DE
AZUFRE
MANTENER EL EQUILIBRIO FOSFORO
ECOLOGICO HIERRO
ENTRE MANGANESO
MATERIALES VIVOS O MUERTOS
EN EL SUELO Y AGUA

Todos los ciclos biogeoquimicos estan vinculados y

el metabolismo relacionado con la transformacion
de estos nutrientes, tiene impacto global. CICLO
(Prescott et.al 2002)
BIOGEOQUIMICO
 Cuestionario Base

• En que radica la importancia de manejar cepas propias

de una comercial.
• Es necesario llevar a cabo un proceso de Bioremediacion
en piscinas de producción acuícola?
• Hacia donde va dirigida la eficiencia del producto
biológico a usar ?
• Que resultados debo de observar una vez iniciado el
proceso ?
• El balance bioquímico del agua se puede afectar debido
a la densidad poblacional del consorcio bacteriano?
• Que tipo o clase de agentes biológicos debemos usar ?
Diagrama Conceptual del Flujo de Carbono
durante la Descomposición de un Sustrato
MODELO AGREN & BOSSATA

Co2 BIOMASA
MICROBIANA

SUELO – SUSTRATO - DETRITUS

 N2

CICLO DEL NITROGENO

MO
NH3
AMONIACO
 Que hace la Bioremediacion

BIOTRANSFORMACION

 La actividad biológica
generada por un • DESCOMPOSICION DE UN
COMPUESTO ORGANICO EN OTRO
consorcio SIMILAR NO CONTAMINANTE O
MENOS TOXICO.
microbiológico, altera la
estructura molecular de
los materiales y el grado MINERALIZACION
de alteración determina
si se ha producido
biotransformacion o • ES LA DESCOMPOSICION A DIOXIDO
DE CARBONO, AGUA Y COMPUESTOS
mineralización. CELULARES.
 Parámetros Necesarios de control en una
Bioremediacion viable
• pH
• Temperatura
• Metabolismo del suelo : co2
• Redox : suelo / agua
• Amonio
• Nitritos
• Nitratos
• Evaluacion visual y olfativa de lodos
Consorcio Bacteriano Remediador

HETEROTROFO

NITRIFICANTE
 Generación de Aislados

Alpha I Alpha II (inserto)

• 1.- Evaluación metabólica
del suelo y Redox. Inserto (+)

• 2.- Toma de muestras

dilución – siembra y
aislados. Inserto(-)

• 3.- Micro bioquímica de

identificación inicial y/o
secuenciación molecular.
• 4.- Preservación
 1.-Evaluación del Metabolismo del Suelo

• Los suelos sanos y activos están en constante

producción de Co2.
• La generación de Co2 es la resultante de la
digestión de los materiales orgánicos presentes,
procurando de esta manera la eliminación de los
mismos.
• La eficiencia de un producto biológico sobre un
sustrato o suelo es medible y va en directa
relación con la cantidad de Co2 liberado.
 Ubicación de muestras de
Campo y Control

campo

control

Pablo Valcare
 Procedimiento in Situ
1.- Se hacen dos cuadrados
en el suelo de un metro por
lado. Uno en el sitio
expuesto y el otro (control)
en un área aparte.
2.- Coloca en recipiente
pequeño con hidróxido de
potasio 0,1 N, cubriendo
con el vaso grande
enterrado inhibiendo el
contacto exterior de la
muestra.
3.- Después de 24 horas se
titra con gotas de
fenolftaleína y acido
clorhídrico 0,1 N.
 Respirometria

FRASCO DE VIDRIO

CO2
CO2

HIDROXIDO
DE SODIO FONDO / SUSTRATO
 En Laboratorio

HIDROXIDO DE
SODIO
Mapeo de Redox
Toma de Muestras de Suelo
Bolsas para transporte de Muestras Estériles
Hisopo de Transporte de Muestras
Medio Stuart
 Medio especifico para
recolección, transporte y
conservación de muestras
aptas para estudios
microbiológicos.
Tiene un mínimo aporte de
nutrientes que permite la
recuperación de los
microorganismos sin que
Medio de haya replicación.

Transporte Medio semi-solido, no

nutritivo de Tioglicolato de
Stuart Sodio

• Esta es otra forma de El pH alto minimiza la

tomar Muestras destrucción bacteriana
preservadas para por acidificación.
transportar al
laboratorio.
 Tratamiento de Muestras
• Procedimiento:
• Diluciones:
• Tomar con tubos de PVC de 6
cm. de diámetro. • Solución salina (hacer
diluciones hasta 5 tubos).
• Introducir el tubo máximo a 15
cm de profundidad del fondo. • Sembrar en agar
• Evitar remover la superficie. • AN, TSA o AM: 0,1 ml y/o
1mL
• Colocar los tubos en fundas
estériles de transporte. • Incubar entre 27 y 30C por
24 a 72 horas.
• Mantener cadena de frio en
transporte o mantener en • Contar Colonias observadas.
refrigeración no mayor a 5
horas.
 Aislamiento

• Siembra por estría y

agotamiento en agar TSA
o agar Nutriente.

• Establecer mínimo Línea

III de Pureza.

• Observación Morfológica
de Colonias.
Contaje de Colonias mediante: CFU Scope
v1.1
 Protocolos de Verificacion

• Forma
• Motilidad
• Tinción
• Enzimas
• Micro Bioquímicas
• En Microbiología, los
estándares
McFarland son usados
de Tubos de Macfarland
como una referencia
para ajustar la turbidez
de las suspensiones
bacterianas hasta que
el número de bacterias
llegue al rango
establecido
específicamente para
identificación y pruebas
de susceptibilidad.

• El estándar de Mc-
Farland mas utilizado
es al 0.5% y
corresponde
aproximadamente a
una suspensión
homogénea de 1.5 x 10
a la 8e células
bacterianas / ml.
3.- Micro bioquímica, dilución del Inoculo y
siembra en Micro galerías Sistema de
Identificación Microgen

0,5
Macfarland
Dosificación de Reactivos en Micro galerías
Interpretación de Resultados Microgen
GN ID Panel A+ Panel B
4.- Preservación de Cepas de Reserva en
Viales Cryobank
 Inoculo en
Viales de Cryobank
VIAL DE CRYOBANK

BACTERIAS

CONGELACION
GLICEROL

MICROPERLAS POROSAS
 Preparacion de Medios Bases

Medio para Nitrificantes Medio para Heterotofas

• Agua 1L. • AGUA 1 L.
• Cloruro de amonio 1 g. • PEPTONA O TRIPTONA 5g.
• Fosfato di potásico 1 g. • EXTRACTO DE CARNE 3g.
• Carbonato de calcio 1 g.
• Sulfato de magnesio 10 g.
• Sulfato ferroso 10 mg.
• Cloruro de calcio 10 mg.
• Sales inorgánicas 0,02 mg.
de:
• Mn, Mo, Cu, Co, Zn.
Bioreactor
Escalados I,II,III
 Crecimiento
Bacteriano • Fase Lag o de Adaptación
El crecimiento microbiano
puede medirse en términos
de concentración celular
(número de células por
• Fase Log o Exponencial
unidad de volumen de
cultivo) o densidad celular
(peso seco de las células
por unidad de volumen de
• Fase Estacionaria
cultivo).

En organismos unicelulares • Fase Senescente

la multiplicación conduce a
un aumento en el número
de individuos dando lugar a
una población o a un
cultivo
 Fase Lag o de adaptación

NO HAY DIVISION
CELULAR
Log. del numero

NO HAY INCREMENTO
Celulas viables

NETO DE MASA
LA CELULA ESTA SINTETIZANDO
NUEVOS COMPONENTES

CELULAS ENVEJECIDAS CARECEN

DE PROVISION SUFICIENTE DE ATP

LA INOCULACION EN UN MEDIO
QUIMICAMENTE DIFERENTE GENERA
UNA FASE DE LATENCIA MAS LARGA

TIEMPO
 Fase Log o Exponencial

CRECEN Y SE DIVIDEN A LA VELOCIDAD MAXIMA

POSIBLE QUE LE PERMITE SU POTENCIAL GENETICO

LAS CONDICIONES DE CULTIVO

SON OPTIMAS

SI SE HAN ADAPTADO A LA
NATURALEZA DEL MEDIO

DURANTE ESTA FASE LA

POBLACION ES MUY UNIFORME
EN CUANTO A SUS PROPIEDADES
QUIMICAS Y FISIOLOGICAS

TIEMPO
 Fase Estacionaria

EL CRECIMIENTO SE
DETIENE Y LA CURVA SE
HACE HORIZONTAL

EN ESTA FASE LOS CULTIVOS

LLEGAN A 1 x 10 ? E

EL TAMAÑO DE LA POBLACION FINAL

VARIA EN FUNCION DE LA
DISPONIBILIDAD DE NUTRIENTES, OTROS
FACTORES Y EL TIPO DE
MICROORGANISMO

TIEMPO
 Fase Senescente

INCAPACIDAD DE CRECER
Y REPRODUCIRSE

CNV

RESPUESTA GENETICA
DESENCADENADA

MUERTE CELULAR
PROGAMADA
 Factores a Considerar

• Adaptación
• Incapacidad de contacto
• Sobrevivencia y competencia
• Micro habitad y nutrientes
• Carga energética
• Depredación
 Factores de Afectacion
El inoculo puede Incapacidad del
convertirse en Incapacidad de
inoculo de
fuente importante contactar los
competir y
de alimento de compuestos a
sobrevivir con los
depredadores del degradar
autóctonos
suelo
 Características de un Aislado Natural
• Contener un mínimo de tres, máximo 6 cepas.
• Deberá tener características nitrificante y
heterótrofa.
• Manejable en pH 6-8.
• Estabilidad biológica soportada mínimo 90 días
en sustratos solidos, semisólidos y líquidos.
• No generar gases.
• Exclusión comprobada contra vibrios,
pseudomonas y aeromonas.
 Tareas Especificas
• Es importante y necesario conocer de manera
técnica la eficiencia de un consorcio bacteriano
antes de usarlo.
• Evaluar su expresión sobre el objetivo o fin
especifico por el que fue aislado o adquirido.
• Muestreos microbiológicos paralelos a los
análisis químicos de agua y suelo.
• La tendencia debe de estar orientada a que el
aislado sea de cepas autóctonas.
• Producir cepas para Bioremediacion y Pre -
digestión.
Piscinas Inoculadas

Beatriz Borrega
Piscina Inoculada

Beatriz Borrega
 Gracias por su atención
jsalazar@arkeaslab.com