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Revista de ingeniería química 392 (2020) 123674

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Desinfección electroquímica de efluentes secundarios de una planta de tratamiento de

aguas residuales: Eficiencia de remoción de ARGs y variación de resistencia antibiótica
en bacterias sobrevivientes

hongna liun,⁎,1, Zhiguo Zhangun,b,1, Jiangtao Duanun,C, Naliun, Binxu Liun, Canción de tintineoun,
Muhammad Fahad Sardarun, Xiwu Lvb, Changxiong Zhuun,⁎
Grupo de Investigación de Cuencas Limpias Agrícolas, Instituto de Medio Ambiente y Desarrollo Sostenible en Agricultura, Academia China de Ciencias Agrícolas, Beijing
un

100081, PR China
b Escuela de Energía y Medio Ambiente, Universidad del Sureste, Nanjing 210096, PR China
C Facultad de Horticultura, Universidad de Agricultura de China, Beijing 100193, PR China

DESTACAR GRÁFICAMENTE ABSTRACTO

• Las generaciones de cloro libre y %OH

variaron entre los tratamientos T y D.
• La eliminación de ARG estuvo estrechamente
asociada con el cloro libre y el % de OH.

• La abundancia relativa de ARG disminuyó

con el aumento de las densidades de
corriente.

• Menos bacterias resistentes a múltiples antibióticos

sobrevivieron a los tratamientos con CE.

• Los índices MAR de las aguas residuales se

redujeron significativamente después de la
desinfección EC.

INFORMACIÓN DEL ARTÍCULO RESUMEN

Palabras clave: Se llevaron a cabo experimentos de desinfección electroquímica (EC) a escala de laboratorio para investigar su eficacia de eliminación de
Desinfección electroquímica 23 genes de resistencia a antibióticos (ARG) que confieren contra 8 clases de antibióticos y sus efectos sobre la resistencia a los
Densidad de corriente antibióticos de las bacterias supervivientes. Los tratamientos de EC se realizaron a diferentes densidades de corriente (tratamiento D) y
tiempo de electrólisis
con diferentes tiempos de reacción (tratamiento T). La electrólisis prolongada dio como resultado una tasa de inactivación más alta que
Radicales hidroxilo
una mayor densidad de corriente, mientras que la primera fue menos eficiente en la eliminación de ARG. Por ejemplo, las proporciones
cloro activo
de inactivación para los tratamientos T20 y D80 fueron >99 %, mientras que la disminución en la abundancia relativa de ARG con D80 (de
0,54 a 4,1) fue mayor que con T20 (de 5,4 a 5,2). La frecuencia de detección de bacterias resistentes a los antibióticos probados disminuyó
entre un 9 % y un 100 % después del tratamiento con EC. Esto se atribuyó principalmente a un cambio en la composición bacteriana.
Disminuyó la proporción de bacterias con alta frecuencia de resistencia a los antibióticos (comoEscherichia), mientras que con frecuencias
de baja resistencia (como AcinetobacteryPseudomonas) aumentó. Además, menos bacterias multirresistentes sobrevivieron a la
desinfección EC, lo que también contribuyó a la disminución significativa en la frecuencia de bacterias resistentes a los antibióticos, así
como en los índices de resistencia multiantibióticos de las muestras de aguas residuales (de 0,47 a 0,35) después de la EC. tratamiento (P
< 0,05). En total, la desinfección EC no solo redujo la abundancia relativa de ARG, sino que también perjudicó la

⁎Autores correspondientes.
Correos electrónicos:lihongna828@163.com (H. Li),zhuchangxiong@caas.cn (C.Zhu).
1Hongna Li y Zhiguo Zhang, estos autores contribuyeron igualmente a este trabajo.

https://doi.org/10.1016/j.cej.2019.123674
Recibido el 14 de agosto de 2019; Recibido en forma revisada el 7 de noviembre de 2019; Aceptado el 29 de noviembre de 2019 Disponible
en Internet el 2 de diciembre de 2019
1385-8947/ © 2019 Elsevier BV Todos los derechos reservados.
H. Li, et al.
resistencia a los antibióticos de las bacterias supervivientes. Por lo tanto, podría ser un método de desinfección prometedor para controlar la
diseminación de la resistencia a los antibióticos.
1. Introducción
La resistencia a los antibióticos es una gran amenaza para la salud humana y la
seguridad ecológica; se debe al mal uso y uso excesivo de antibióticos durante las últimas
décadas[1,2]. Se han encontrado bacterias resistentes a los antibióticos (ARB) y genes de
resistencia a los antibióticos (ARG) en gran abundancia en diferentes matrices
ambientales.[3,4]. No hay duda de que se fortalecerá la transferencia horizontal de ARG a
patógenos humanos, lo que conducirá a un aumento de los costos de atención médica e
infecciones potencialmente mortales.[5].
Las plantas de tratamiento de aguas residuales (EDAR) juegan un papel crucial
en la eliminación de diversos contaminantes. Sin embargo, se ha confirmado que
las EDAR no son efectivas en la eliminación de ARB y ARG durante los procesos de
tratamiento biológico.[6]. Se han encontrado ARG en efluentes de una variedad de
plantas de tratamiento de aguas residuales a gran escala en niveles muy
superiores a los de los ambientes acuáticos típicos.[7,8], y ya se ha informado una
correlación significativa entre los niveles de ARG fluviales y la capacidad aguas
arriba de las plantas de tratamiento de aguas residuales.[9]. La desinfección, uno
de los tratamientos avanzados de aguas residuales, puede brindar la oportunidad
de controlar la liberación de resistencia a los antibióticos en el medio ambiente. La
cloración y la radiación ultravioleta son los métodos de desinfección más comunes
utilizados en las EDAR.[10]. Son efectivos para reducir los niveles generales de
ARB, al tiempo que inducen la selección de ARB (es decir, un aumento
proporcional de ARB entre las bacterias sobrevivientes) al mismo tiempo.[11–14].
Shi et al.[15]reveló que la cloración concentra varios ARG, así como plásmidos,
secuencias de inserción e integrones asociados con la transferencia horizontal de
los ARG. El enriquecimiento de ARG yintⅠ1 también se ha informado durante la
ozonización y la desinfección UV[dieciséis]. Nuestro estudio reciente también
demostró que la desinfección UV impone una selección significativa de bacterias
resistentes a múltiples antibióticos[17]. Algunos procesos de oxidación avanzada
(POA), como la reacción de foto-Fenton, UV/H2O2, o el tratamiento fotocatalítico,
han recibido una atención creciente[18]. Estudios previos han indicado que los
AOP son efectivos para inactivar ARB[13]. Sin embargo, la eficiencia de la
eliminación de ARG es controvertida.[14,19]. Además, se necesitan tiempos de
contacto de decenas a cientos de minutos para estos procesos. [14,20]. Por lo
tanto, es necesario desarrollar métodos más efectivos para eliminar la resistencia
a los antibióticos en las aguas residuales.
Los procesos electroquímicos (EC) pueden realizarse sin la necesidad de
almacenar productos químicos como lo requieren los métodos basados en
productos químicos (p. ej., cloración, ozonización y la reacción de Fenton) y
generar concentraciones constantes de oxidantes.en el lugardurante el
tratamiento. Se ha aplicado ampliamente para eliminar diversas aguas residuales,
desinfectar el agua potable y mejorar la remediación de suelos contaminados.[21–
23]. También se ha demostrado que los procesos de EC son altamente efectivos
para inactivar bacterias[24]y Mézule et al.[25]mostró que el tratamiento con EC es
más efectivo para inactivar esporas bacterianas y bacterias recalcitrantes que la
cloración. Los estudios sobre el tratamiento electrocinético de suelos
contaminados con antibióticos también han demostrado que funciona de manera
brillante en la eliminación de ARB y ARG.[26,27]. Sin embargo, hasta ahora, el
potencial del proceso EC para la eliminación de ARB y ARG en las aguas residuales
no ha recibido suficiente atención. La inactivación por el tratamiento con EC se
atribuye principalmente a especies reactivas de oxígeno de vida corta (como %OH,
O% y HO2%) y sustancias más estables (Cl2, HOCl y OCl−) generado durante la
electrólisis[28,29]. Sin embargo, rara vez se ha estudiado la influencia de estos dos
tipos de oxidantes sobre la inactivación bacteriana y la eliminación de ARG. Como
el tiempo de electrólisis y la densidad de corriente pueden jugar diferentes roles
en la generación de estos oxidantes
[30], es esencial investigar más a fondo los efectos del % de OH y el cloro
libre sobre las bacterias y la reducción de ARG. Ya se ha revelado que el cloro
libre electrogenerado promueve en gran medida el rendimiento bactericida
del tratamiento EC.[31,32]. Sin embargo, no está claro si tiene el mismo
efecto sobre la degradación de los ARG en una celda de electrólisis.
2
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La resistencia a los antibióticos se puede diseminar a través de la
transferencia vertical (división celular) y la transferencia horizontal de genes,
incluida la conjugación, la transducción y la transformación natural.[33]. Entre
estos, la conjugación se basa en células donantes y receptoras viables y juega el
papel más importante.[34]. Por lo tanto, es importante investigar la resistencia a
los antibióticos de las bacterias viables antes y después de la desinfección. Aunque
se sabe que la resistencia a los antibióticos se modifica en las aguas residuales
desinfectadas [35,36], los mecanismos subyacentes aún no están claros.
Por lo tanto, nos propusimos investigar la eficiencia de eliminación de 23 ARG
que confieren resistencia a 8 clases de antibióticos en el presente estudio, a fin de
obtener una comprensión integral de la variación de ARG durante la desinfección
EC. También se investigaron los efectos del tratamiento con EC sobre la estructura
de la comunidad bacteriana y sus efectos subyacentes sobre el resistoma en las
aguas residuales. Finalmente, también se estudiaron los efectos del tratamiento
con CE sobre la resistencia a antibióticos de aislados viables y los posibles cambios
en el estado de resistencia a antibióticos de las aguas residuales.
2. Materiales y métodos
2.1. Muestras de aguas residuales
Se recolectaron muestras de aguas residuales del efluente del proceso biológico en
una PTAR municipal que utilizaba el sistema de lodos activados cíclicos en Zhuozhou,
provincia de Hebei, China. Las muestras se recolectaron en dos botellas de polietileno
esterilizadas de 10 L y se almacenaron en hielo. Las muestras se desinfectaron dentro de
las 5 h posteriores al muestreo. El pH inicial fue de 7,10 y la concentración de Cl–es de
157,8 mg/L para el agua cruda utilizada en este trabajo.
2.2. Experimentos de desinfección electroquímica
Las muestras de aguas residuales se asentaron en contenedores de
mantenimiento durante al menos 30 minutos para eliminar las partículas antes de
la electrólisis. La desinfección EC se realizó en condiciones galvanostáticas a
temperatura ambiente en un vaso de precipitados de 400 mL. Diamante dopado
con boro con un área geométrica expuesta de 1 cm2(CONDIAS GmbH, Alemania)
como ánodo y acero inoxidable como cátodo. Un diagrama esquemático del
sistema de electrólisis utilizado en este trabajo se dio enFigura S1. La distancia
entre electrodos se fijó en 10 mm. La solución se agitó con una barra magnética
durante la electrólisis. El efluente secundario de la PTAR se denomina aquí “RW”.
Se realizaron dos conjuntos de experimentos (tratamiento T y tratamiento D). El
tratamiento T usó diferentes tiempos de electrólisis (1, 5, 10 y 20 min) con una
densidad de corriente constante (20 mA/cm2), denominados T1, T5, T10 y T20. El
tratamiento D usó diferentes densidades de corriente (10, 20, 40 y 80 mA/cm2) con
un tiempo de electrólisis constante (5 min), denominados D10, D20, D40 y D80. Al
final de cada tratamiento, la reacción se terminó agregando un exceso de
tiosulfato de sodio (10 mM). Cada tratamiento se realizó al menos tres veces. Se
utilizaron cinco mililitros de cada muestra tratada para el análisis microbiano y el
resto se filtró a través de un filtro de 0,2 μm (FDJHJS, Jinteng, China) para una
mayor extracción de ADN. También se realizaron experimentos de desinfección
con aguas residuales modelo (MW) para explorar los mecanismos internos de
diferentes especies oxidantes, y se ilustró información detallada en los Métodos
S1.
2.3. Extracción de ADN de muestras de aguas residuales y qPCR en tiempo real de ARG
El ADN total se extrajo de la membrana del filtro usando el FastDNA Spin
Kit for Soil (MP Biomedicals, CA). qPCR se utilizó para cuantificar los niveles
de ARG. La mezcla de reacción de qPCR comprendía 1 μL de plantilla de ADN,
0,10 μL de cada cebador 20 pM (Tabla S1), 10 μL de SuperReal PreMix Plus
(Tiangen, China) y 8,8 μL de agua libre de ARNasa. El programa para qPCR
fue el siguiente: desnaturalización inicial en
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95 °C durante 5 min; 40 ciclos de 15 s a 95 °C y 30 s a la temperatura de recocido ( Índice MAR = a/(b×C) (2)

Tabla S1); y un paso final para una curva de fusión. La especificidad del producto
dondeunes la puntuación de resistencia agregada de todos los aislados en una muestra,b
se confirmó mediante el análisis de la curva de fusión y la visualización en geles de
es el número de antibióticos probados, yCes el número de aislamientos en la muestra[38]
agarosa. El coeficiente de correlación al cuadrado (R2) fue > 0,99 para todas las
.
curvas de calibración y la eficiencia de amplificación fue del 95 al 110 %. Se usó
agua estéril como control negativo en cada corrida. Todos los experimentos
2.7. Determinación de radical hidroxilo y cloro libre
fueron realizados por triplicado.

La concentración de cloro libre se determinó mediante el N, Ndietil-

2.4. Secuenciación de alto rendimiento de muestras desinfectadas con EC
pag-método colorimétrico de fenilendiamina[28], y el % de OH se midió
de acuerdo con el método utilizado en nuestro trabajo anterior con
La secuenciación de alto rendimiento se realizó en Personalbio Inc. (Beijing,
dimetilsulfóxido[39].
China) utilizando Illumina Miseq. 2000. Se amplificó el gen 16S rRNA bacteriano de
la región V3-V4 con los cebadores 338F (ACTCCTACG GGAGGCAGCAG) y 806R
2.8. Métodos de análisis
(GGACTACHVGGGTWTCTAAT). El procedimiento de PCR utilizado en Li et al.[27]fue
seguido. A continuación, se aplicó la estrategia de secuenciación de los extremos
Se aplicó el método ΔΔCT para comparar la abundancia relativa de ARG en
de los pares para generar un número aproximadamente igual de lecturas limpias
diferentes muestras de la siguiente manera[40]:
para cada muestra. Se eliminaron las lecturas sin procesar que contenían tres o
más "N" o aquellas contaminadas por adaptadores, y las lecturas limpias filtradas CT= CT(ARG) CT(dieciséisS)
se usaron para análisis metagenómicos.
CT= CT(tratado) CT(Control)
2.5. Recuento, aislamiento e identificación de bacterias.
C=2( Connecticut)

El nivel de eliminación de bacterias heterótrofas cultivables mediante
desinfección EC se evaluó mediante un procedimiento de placas de dilución.
Brevemente, las muestras se diluyeron en serie en solución salina (0,85 %) y luego
0,1 ml de las diluciones se sembraron en agar Luria-Bertani (Solarbio, China) por
triplicado. Luego las placas se incubaron a 35℃durante 24 h, y se formaron
colonias bacterianas claras en las placas y se contaron. Las concentraciones de
bacterias en las muestras se calcularon como unidades formadoras de colonias
por mililitro. Las colonias de cada muestra con tratamiento D se seleccionaron
aleatoriamente de placas de agar Luria-Bertani y se purificaron mediante el
método de estrías en placa. Finalmente, se obtuvieron 73, 60, 58 y 56 aislamientos
de RW, D10, D20 y D40, respectivamente. El procedimiento de PCR para los genes
16S rRNA fue como en nuestro estudio reciente[17]. Los productos de PCR fueron
purificados y secuenciados por Sangon Biotech (Shanghai, China). Las secuencias
ensambladas se analizaron utilizando la herramienta de búsqueda BLAST
Alignment para identificar las especies de aislamientos.
donde CT es el ciclo umbral, ARG es uno de los 23 ARG, 16S es el gen 16S rRNA,
"Tratado" representa una muestra tratada por desinfección EC y "Control" significa
las aguas residuales sin tratar. FC es el cambio de veces de la abundancia relativa
de ARG (normalizados a ARNr 16S) en las muestras tratadas en relación con la
muestra de control. FC>1 indica que los ARG se enriquecen después del
tratamiento con EC; si FC<1, la abundancia relativa de ARG se reduce.
Los datos se analizaron utilizando OriginPro 8.0. Las pruebas de significancia y
los análisis de correlación de Pearson se realizaron con SPSS 19.0. R se utilizó para
el análisis de redundancia de rendimiento y el análisis de componentes
principales.
3. Resultados y discusión
3.1. Eficiencia de inactivación de la desinfección EC

2.6. Prueba de susceptibilidad a antibióticos La concentración de bacterias heterótrofas cultivables totales fue
2,1 × 104–2,4 × 104unidades formadoras de colonias/mL en el efluente secundario
La susceptibilidad a los antibióticos de las cepas purificadas aisladas de la EDAR. La eficacia bactericida del tratamiento con EC se investigó
de cada muestra se analizó de acuerdo con las pautas del Clinical & aumentando el tiempo de electrólisis o la densidad de corriente. En la fase inicial,
Laboratory Standards Institute.[37]. Se probaron un total de diez la tasa de aumento de la inactivación con el aumento del tiempo de electrólisis fue
antibióticos: tetraciclina (TC, 16 μg/mL), sulfadiazina (SD, 512 μg/mL), menor que con el aumento de la densidad de corriente para el tratamiento a 20
cefalexina (CEP, 16 μg/mL), penicilina (PEN, 16 μg/mL), eritromicina mA/cm2durante 5 min (T5 o D20). La reducción logarítmica fue
( ERY, 8 μg/mL), vancomicina (VAN, 32 μg/mL), gentamicina (GEN, 16
μg/mL), cloranfenicol (CAP, 32 μg/mL), ofloxacina (OFX, 8 μg/mL) y
ciprofloxacina (CIP, 32 μg/mL). Utilizamos la concentración inhibitoria
mínima de cada antibiótico recomendada por el CLSI
[37].estafilococo aureusATCC 29213 yE. coliATCC 25922 se utilizaron como
controles negativos. Un aislado se registró como resistente a un antibiótico
si se observaban colonias claras en la placa con este antibiótico y al mismo
tiempo no se observaban colonias de controles negativos en la misma placa.
Todos los experimentos se realizaron al menos
dos veces.

Él un
ntibi res ic frecuencia instantánea ency era
Antiguo Testamento Termi norteeducado como
Delaware

detectio nortefrecuencia escy(%) =(UN/B)×100% (1)

dondeUN es el adormecer er de aislamientos o untibiótico arenaBes el
número o aislamiento fun
prueba fr resistentes a la muestra[38].

A ellos ulti- untibio El índice de resistencia a los antibióticos aplicación ied para estimar
el potencio cial rehermana (MAR) fue nce de bacterias a múltiples tibio tics, o para re-
presente th e ge real a niveles de resistencia a antibióticos de una
nordeste desperdiciarmuestra de agua

Esto facilitó la C comparación de resistencia a antibióticos niveles entre

una vez que

géneros bacterianos o w muestras de aguas residuales. Se calculó el índice MAR Figura 1.Niveles de inactivación de bacterias heterótrofas cultivables totales con
diferentes tiempos de electrólisis (a) y densidades de corriente (b).
como sigue:

3
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0,25 en T10, y fue sólo 0,11 en T1 (Figura 1). Sin embargo, la eficiencia de tabla 1
inactivación aumentó considerablemente con aumentos adicionales en el Concentraciones de cloro libre y radical hidroxilo en electrolito MW1 (0,2 M Na2ASI
tiempo de electrólisis, y la amplificación fue mayor que la tratada con QUE4y 160 mg/L NaCl) con diferentes tiempos de electrólisis (T) y densidades de
aumentos en la densidad de corriente (P < 0,05). Finalmente, los niveles corriente (D).

bactericidas de 3,8 log y 2,9 log se lograron con los tratamientos T20 y D80, tratamiento Gratis hidroxilo tratamiento Gratis hidroxilo
respectivamente. cloro radical cloro radical
Para aclarar el proceso bactericida en los tratamientos T y D, también se (mg/L) (µmol/L) (mg/L) (µmol/L)

realizaron los experimentos de desinfección con MW, en los que se detectó la

RW 0 0 RW 0 0
generación de los principales oxidantes (cloro libre y radical hidroxilo) en el T1 0.06 2.5 D10 0.11 7.7
tratamiento EC. La abundancia bacteriana inicial en MW fue de aproximadamente T5 0.21 11.8 D20 0.21 11.8
7 × 106UFC/mL. Como se muestra enFigura 2, la eliminación logarítmica de T10 0,62 23,9 D40 0.26 32.7
T20 1.45 46.3 D80 0.33 67.7
bacterias alcanzó 0,14 (T20) y 0,29 (D80) en MW2, respectivamente. Aunque el nivel
de remoción de troncos de D80 fue mayor que el de T20, la eficiencia de
desinfección aún fue considerablemente baja en ambos tratamientos, en
y conferían resistencia a 8 clases principales de antibióticos. Casi todos los ARG
comparación con el sistema que contenía Cl−(MW1), en el que se mejoró mucho la
estaban en una concentración de más de 103copias/mL en RW, mientras que sólo
eficacia bactericida (Figura 2). Después de agregar metanol (como eliminador de
elsul1 (dihidropteroato sintasa) gen era> 106copias/mL (Tabla S2). ÉlcamionetaUn
radicales hidroxilo) al electrolito, no se observó un comportamiento bactericida
gen (resistencia de tipo A a la vancomicina/teicoplanina) se produjo en un nivel
para MW3 (Figura 2). Estos indicaron que el cloro libre derivado de Cl−durante el
muy bajo. En términos de la abundancia promedio de ARG dentro de la misma
proceso EC mejoró notablemente el rendimiento bactericida de la desinfección EC.
clase, la concentración desul fue el más alto seguido por los genes de resistencia a
También se pudo ver que la eficiencia de la desinfección mejoró mucho en el
aminoglucósidos y tetraciclinas (Tabla S2), indicando niveles de contaminación
tratamiento T en comparación con el tratamiento D, lo cual fue consistente con la
similares por ARG en diferentes regiones[45,46]. El número de copias del gen 16S
cantidad de generación de cloro libre en los dos tratamientos. El cloro libre
rRNA fue de 5,6 × 106copias/ml en RW, mientras que las tasas de eliminación
aumentó mucho con el tiempo de electrólisis en el tratamiento T, mientras que
correspondientes fueron solo del 44,9 % con T20 y del 41,4 % con D80 (Fig. 3), a
hubo solo un ligero aumento en el cloro libre a medida que aumentó la densidad
pesar de que >99% de las bacterias fueron inactivadas. Sin embargo, la
de corriente en el tratamiento D (tabla 1). Se sabe que la cantidad de especies
degradación de los ARG con los dos tratamientos fue bastante diferente de la
oxidantes generadas en el sistema de electrólisis está estrechamente relacionada
inactivación bacteriana. La eficiencia de eliminación de los ARG varió del 4,1 % al
con la densidad de corriente y el tiempo de electrólisis.[30]. Las reacciones EC
79,7 % con el tratamiento T y del 21,3 % al 90,2 % con el tratamiento D, y la tasa de
realizadas a baja densidad de corriente inducen preferentemente la evolución de
eliminación total de los ARG fue del 47 % con T20 y del 56 % con D80 (Fig. 3),
cloruros hacia hipoclorito.
cuando se logró un 99% de inactivación por ambos tratamientos. Por lo tanto, es
[41], mientras que la electrólisis a alta densidad de corriente acelera la
interesante que el tratamiento D tuviera una mayor capacidad para la eliminación
oxidación del hipoclorito a perclorato. Y también se ha informado que las
de ARG. Esto podría atribuirse a las diferentes tasas de evolución de cloro libre y
altas densidades de corriente mejoran el desplazamiento de Cl2(ac) a Cl2(g),
%OH con el aumento del tiempo de electrólisis y la densidad de corriente. La
lo que perjudica la producción de hipoclorito[42]. Sin embargo, la
concentración de cloro libre con T20 fue 4,4 veces mayor que con D80, mientras
generación de %OH fue opuesta a la de cloro libre. El tratamiento D mostró
que la generación de % de OH con el aumento de la densidad de corriente fue
un mejor desempeño en la generación de %OH que el tratamiento T.
mucho mayor que con el aumento del tiempo de electrólisis (tabla 1). Además, los
Nuestro estudio anterior también confirmó que la tasa de generación de
mecanismos de inactivación de estos oxidantes son bastante diferentes. Largo et
%OH aumentó considerablemente con el aumento de la densidad de
al.[47]han demostrado que el principal mecanismo bactericida del tratamiento de
corriente.[39]. Al analizar la eficiencia bactericida y la generación de cloro
EC en solución de cloruro es la degradación enzimática, sin embargo, la pérdida
libre y %OH, encontramos que el cloro libre jugó un papel más importante
de potencial de membrana y la peroxidación lipídica son responsables de la
en la inactivación de bacterias que el %OH durante la desinfección EC.
inactivación en solución de sulfato. Especies de cloro libre (HClO/ClO–) tienen una
También ha sido confirmado por estudios previos que muestran que la
alta permeabilidad, por lo que pueden ingresar a la célula y degradar las enzimas
presencia de cloruros en los electrolitos aumenta notablemente la capacidad
intracelulares, lo que lleva a un excelente desempeño bactericida. Sin embargo,
bactericida.[28,43,44].
considerando la capacidad de oxidación relativamente baja del cloro libre en
comparación con el %OH[48], el ADN (incluidos los ARG) no sufre daños graves.
3.2. Abundancia de ARG
Jung et al.[49]sugirió que la EC basada en %OH

Se detectaron un total de 23 ARG en diferentes muestras tratadas con EC,

Figura 2.Inactivación de bacterias en diferentes aguas modelo con diferentes tiempos de electrólisis (a) y densidades de corriente (b). La composición de los electrolitos consistía en Na
0,2 M2ASI QUE4y 160 mg/L NaCl (MW1), 0,2 M Na2ASI QUE4(MW1) y Na 0,2 M2ASI QUE4y metanol 0,03 M (MW3) para diferentes tratamientos.

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Fig. 3.Tasas de eliminación de ARG basadas en el antibiótico al que confirieron resistencia y el número de copias del gen 16S rRNA medido en cada muestra con diferentes tiempos de
electrólisis (a) y densidades de corriente (b).

la desinfección es un proceso basado en la capa superficial, cuyas características de el mismo nivel queC (Tabla 3). La abundancia relativa total de los 23 ARG
reacción difieren de la electrocloración, un proceso químico basado en el volumen. disminuyó considerablemente con el aumento de la densidad de corriente, de 0,54
Debido a la inestabilidad del %OH, sus reacciones de oxidación tienden a tener lugar muy en RW a 0,41 en D80, mientras que la disminución en la abundancia relativa total
cerca de la superficie del electrodo en lugar de en la solución a granel. Por lo tanto, solo de ARG fue bastante limitada con el aumento del tiempo de electrólisis (Figura S2).
las células bacterianas en esta región son atacadas por %OH y se dañan severamente La abundancia relativa deac(6′)-Ib se redujo hasta 20 veces con D80, mientras que
debido al alto potencial oxidante de %OH. Además, existe una reacción de transferencia fue solo 2,3 veces con T20 (Tabla 3). El tratamiento T fue menos eficiente en la
directa de electrones entre la superficie del electrodo y las células bacterianas, y la remoción de ARGs que el tratamiento D, aunque el primero tuvo mejor
oxidación directa en la superficie del ánodo aumenta con el aumento de la densidad de desempeño bactericida. Esto podría ser el resultado de los diferentes mecanismos
corriente.[49]. Como resultado, se obtuvo una mayor capacidad de eliminación de ARG al de degradación de ARG de estos tratamientos. Se ha informado que la integridad
aumentar la densidad de corriente en nuestros experimentos. de las células no se ve afectada por el cloro a un valor de CT de 5 mg/L × 60 min
que es mucho mayor que el de T20, mientras que el tratamiento EC y la reacción
Entre los ARG, elanuncioA (estreptomicina 3''-adenililtransferasa) yGato de Fenton, en la que se genera %OH, provoca una fuga grave de materiales
Los genes A1 (cloranfenicol acetiltransferasa) fueron más tolerantes a los intracelulares de las células[51]. Esto ha sido confirmado por Long et al.[47].
tratamientos T y D, y solo el 4,1 % de losGatoA1 fue eliminado por T20 (Tabla Además, nuestros experimentos complementarios mostraron que la presencia de
S2). Esto podría deberse a las propiedades de estos ARG o de la bacteria cloro libre podría lograr una inactivación casi completa, mientras que no fue útil
huésped. El tratamiento T tampoco logró eliminar latetC (resistencia a la para destruir el ADN genómico y plasmídico. Sin embargo, en el sistema de
tetraciclina) ytetgenes X, y las concentraciones seguían siendo tan altas ausencia de cloro libre, el ADN del plásmido se degradó a medida que la bacteria
como 105copias/mL después de la desinfección (Tabla S2). Y >90% de los ac se inactivaba por completo (Figura S2), lo que indica el papel significativo del %OH
Los genes (6')-Ib (aminoglucósido acetiltransferasa) se eliminaron con D80, en la eliminación de los ARG. Además, la descomposición del ADN genómico y el
pero solo el 60 % con T20. La diferente capacidad de oxidación entre %OH y ADN plasmídico de las bacterias no fue simultánea en las aguas residuales. Sobre
cloro libre podría ser responsable de la diferente eficiencia de degradación todo, planteamos la hipótesis de que los plásmidos se filtraban al electrolito más
de ARG en los tratamientos T y D. fácilmente que el ADN genómico debido a su tamaño más pequeño y sufrían un
Los ARG detectados en este trabajo mostraron patrones de cambio similares ataque severo de %OH, lo que resultaba en una disminución de la abundancia
al aumentar el tiempo de electrólisis y la densidad de corriente, mientras que los relativa de ARG. Con el tratamiento T, la degradación de ARG por %OH fue mucho
cambios en su abundancia relativa fueron considerablemente diferentes (Tablas 2 más débil que con el tratamiento D debido al bajo rendimiento de %OH. Y solo si
y 3). En cada tratamiento con EC se enriquecieron ocho ARG (Tabla 2). Entre estos, el
sul2,sul3, ytetX con tratamiento D yblaTEM-1(β-lactamasa) con tratamiento T solo se
enriquecieron con un tratamiento, lo que indica que estos genes podrían
seleccionarse al azar durante el tratamiento con EC. Las abundancias relativas Tabla 2
medias deanuncioUN,GatoA1,oqxB (transportador de membrana de bomba de ARG con mayor abundancia relativa durante la desinfección EC.
eflujo),sul2,tetC, ytetX aumentó 1,12, 1,28, 1,05, 1,05, 1,10 y 1,03 veces en el tratamiento tratamiento
tratamiento T, respectivamente (Tabla 2). y las abundancias relativas medias de
anuncioUN,GatoA1, yoqxB también aumentó con el tratamiento D, pero fue Tratos Tratos
C C
menor que con el tratamiento T (Tabla 2). Veintitrés puntos de muestreo
mostraron un ligero aumento en la abundancia relativa de ARG con el tratamiento anuncioUN T1, T5, T10*, T20 1.12 D10*, D20, D40, D80 1.10
blaTEM-1 T20 − 1.11 D20, D40 − 1,09
T (Tabla 2). Sin embargo, hubo 17 en el tratamiento D, y la mayoría de estos
GatoA1 T1, T5, T10*, T20* 1.28 D10, D20, D40*, D80 1.18
puntos se ubicaron en tratamientos con baja densidad de corriente (D10 y D20). ejemB T1, T10 − 1,25 N/A N/A
En total, el enriquecimiento de ARG por desinfección EC no fue evidente en oqxB T5, T10* 1.05 D10, D20 1.04
comparación con la cloración y la radiación UV, en las que algunos ARG se sul2 T1*, T5, T10 1.05 D20 − 1,10
enriquecen más de 10 veces después de la desinfección.[40,50].
sul3 N/A N/A D10* − 1,35
tetC T1, T5, T10, T20 1.10 D10*, D20 − 1,28
tetX T1, T10, T20* 1.03 D10* − 1,18
6 se redujo con los tratamientos T y
La abundancia relativa media de 1 y 19 ARG
D, respectivamente (Tablas 2 ymi
3). La reducción en la abundancia relativa media de -Ch ángel yo nht remi
FC, doblar yo
tivoun tundance de ARG (normalizados a 16S rRNA).
abdominales

los ARG r ng fr om 1,09- a 2,27 veces conun mi

d
tratamiento T, y 1,09- to 3 73-F viejo con C,media v valor ¿Qué? it trmi apartamento o tratamiento Dent. FC por debajo de 1 se expresan

. de la mayoría
tratamiento h D. Los valores FC t de los ARG (p. ej.,ac(6) segundolaSHV unti y reci relaciones
la nev gramo ocapúblicas
yov Alabama
tu . Tr mi apartamentos liscomo ted en la tabla significa aquellos

Dakota del Norte ′ - YO, b a la,eritromicina))

s . ejemB (resistencia un r cual thmirelativo miAbunorte dun nce de ARG era yo aumentados. * indicó que los ARG

rmi
en D80 nos tu highe hnCdonde
m ch r t un , FC valora
t wit h T20 eran t
Illinois un fueronsign ifi cansinamente i norte
Crmi unsmire (2 - (ΔΔCT+2SD) > 1).
N / A, dun
tunnorte
no ap p yo
i
cabinayo
e.

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H. Li, et al. Revista de ingeniería química 392 (2020) 123674

Tabla 3 se estrecha al aumentar la densidad de corriente. Esto puede explicarse por el hallazgo
ARG con abundancia relativa disminuida durante la desinfección EC. de que se generó menos % de OH en los tratamientos con bajas densidades de corriente

tratamiento tratamiento (tabla 1), y la eficacia bactericida para diferentes bacterias varió, lo que provocó
alteraciones en la comunidad bacteriana. Esta podría ser la razón por la que el aumento
FC-T20 FC-D80 en la abundancia relativa de ARG se produjo principalmente con tratamientos de baja
C C
densidad de corriente. Estos ARG podrían haber sido albergados por bacterias robustas y
ac(6′)-Ib − 2,28* − 2,27 − 20.11* − 3,73 se enriquecieron después de la desinfección con EC, mientras que la producción de % de
acB − 1,07 − 1,09 − 1,63 − 1,23
OH aumentó considerablemente con aumentos adicionales de la densidad de corriente y
amperioC − 1,31* − 1,55 − 1,57 − 1,39
− 2.02 − 1,51 − 3,45* − 1,84 causó una inactivación casi no selectiva de bacterias.
blaSHV
cmlA1 − 1,53* − 1,36 − 1,73 − 1,58
ejemUN − 1,20* − 1,37 − 2.10* − 1,70 Ya se sabía que la alteración de la comunidad bacteriana podría provocar
ejemB N/A N/A − 3,25* − 1,76 cambios en el resistoma del antibiótico. Sin embargo, según el análisis de
MéxicoB − 1,68* − 1,62 − 2,24* − 1,80
redundancia, sólo un género,Flavobacteria, afectó significativamente la
mphUN − 1,46* − 1,54 − 1,37 − 1,43
qnrS − 1,95* − 1,63 − 3,12* − 1,91 distribución de ARG (Tabla S4). Las débiles correlaciones entre bacterias y ARG
sul1 − 1,78* − 1,60 − 1,90 − 1,82 bajo desinfección EC pueden deberse a las diferentes probabilidades de ataque
sul3 − 1,71* − 1,56 N/A N/A para el ADN genómico y plasmídico. De acuerdo con el análisis de componentes
tetUN − 1.11 − 1,23 − 1,30 − 1,29
principales, la comunidad bacteriana con D80 fue similar a la de RW (Figura 5). Sin
tetMETRO − 1,04 − 1,25 − 1,28 − 1,31
tetW − 2,77* − 1,53 − 3,43* − 1,71 embargo, la abundancia relativa de ARG continuó disminuyendo en D80 (Tabla 3y
Figura S3). Esto es bastante diferente de los métodos de desinfección
C,
FC, cambio de pliegue de la abundancia relativa de ARG (normalizado a 16S rRNA). tradicionales, como la desinfección UV y la cloración, en los que las
valor medio con tratamiento T o tratamiento D. * indicó que los ARG aumentaron concentraciones de algunas bacterias cambian muchas veces.[1,50].La abundancia
significativamente (2-(ΔΔCT-2SD)>1). N/A, datos no aplicables. relativa de algunos ARG en bacterias robustas aumenta significativamente, lo que
contribuye al aumento de la abundancia relativa total de ARG[1]. También se ha
el cloro libre penetró en la célula y pudo reaccionar con el ADN informado que los ARB se pueden enriquecer durante la desinfección tradicional,
genómico y plásmido. Estaba claro que la disminución de la abundancia lo que lleva a un aumento en la abundancia relativa de ARG.[13,36,54]. Sin
relativa de ARG con T20 fue considerablemente menor que con D80 ( embargo, no se encontró una selección clara de bacterias durante la desinfección
Tabla 3). Es decir, la mayor cantidad de cloro libre no contribuyó EC. También se ha informado que la estructura celular y la resistencia a los
significativamente a la eliminación de ARG. antibióticos de las bacterias no muestran cambios significativos durante el
Además, el valor de DQO de las muestras de agua disminuyó en ambos proceso foto-Fenton solar, en el que el % de OH es el principal oxidante.[55]. Por lo
tratamientos, mientras que la tasa de eliminación alcanzó el 50 % para T20 y el 60 tanto, la selección de bacterias podría no ser responsable de los cambios en los
% para D80 al final, respectivamente (Tabla S3). Mientras tanto, se mejoró la ARG durante la desinfección EC.
biodisponibilidad de las aguas residuales tanto en T20 como en D80, con la DBO5/
Valor COD siendo 0,32 y 0,45, respectivamente. Iones inorgánicos en- Las correlaciones entre los ARG tratados con diferentes densidades de
4-N
incluyendo NH + y NO− 3-N no mostró diferencia antes y después de la corriente (P < 0,05) se dividieron en tres grupos. Grupo 1:ac(6′)-Ib, acB
procesos de desinfección electroquímica. Además, la concentración de iones de (transportador de membrana de bomba de eflujo),blaSHV,ejemB,qnrS (resistencia a
cloruro se redujo de 160 mg/L en el agua sin tratar a 156,8 mg/L para T20 y 158,2 quinolonas), ytetW; Grupo 2:ejemUN,MéxicoB (resistencia a múltiples fármacos),
mg/L para D80, respectivamente, lo que indica poca generación de subproductos mphA (macrólido 2′-fosfotransferasa),sul1,tetuna, ytetMETRO; grupo 3: amperioC
de Cl después de la desinfección EC. Los resultados de la toxicidad aguda (β-lactamasa), ysul3. Hasta 6 ARG en el grupo 1 mostraron un patrón de cambio
mostraron que la relación luminiscente relativa de las muestras de agua aumentó similar (Tabla 5), lo que indica que estos ARG están ubicados en los mismos
de 101,20 % (RW) a 102,40 % (T20 y D80), lo que indica que los tratamientos de elementos de genes móviles, como plásmidos, transposones e integrones.[56]. En
desinfección electroquímica no provocaron el aumento de la toxicidad de las este caso, incluso si la bacteria huésped solo se enfrenta a la presión de selección
muestras tratadas. aguas En total, el tratamiento de D80 fue más ventajoso para de un antibiótico, los genes que confieren resistencia a otros antibióticos también
la reducción de ARG y la mejora de la calidad del agua en comparación con T20, se seleccionan y enriquecen al mismo tiempo.[57], lo que conduce a la
mientras que en este trabajo se lograron resultados de desinfección similares. diseminación de bacterias resistentes a múltiples antibióticos. También se ha
informado que uno de los casetes de genes en el integrón 1 enA. faecalislleva 6
genes (anuncioB +gato+blaOXA-10+anuncioA1 +dfrA1 (dihidrofolato reductasa) +ac
3.3. Correlaciones entre comunidades bacterianas y ARG A4, 4.3 kb) que confieren resistencia a al menos

La variación de la comunidad bacteriana con el aumento de la densidad de

corriente se analizó en función de la secuenciación del gen 16S rRNA, y los
resultados a nivel de filo se muestran enFigura 4. Proteobacteria fue el filo más
dominante en todos los tratamientos (51,7–64,9 %), y los otros filos principales
fueron Bacteroidetes (12,8–14,9 %), Firmicutes (8,7–13,6 %) y Actinobacteria (3,7–
6,1 %); estas son las principales bacterias en la matriz del agua. Estas bacterias
predominantes mostraron diferentes patrones de cambio bajo la desinfección EC.
La abundancia de proteobacterias primero disminuyó y luego aumentó hasta el
nivel inicial, mientras que las demás mostraron el patrón inverso. A nivel de
género, entre aquellos con una abundancia >1%, el cambio de pliegues fue
limitado, excepto para especies no identificadas.ComamonadaceasyAcinetobacter(
Figura S3). Los cambios en las comunidades bacterianas con diferentes
tratamientos basados en los datos de abundancia relativa a nivel de género se
representan enFigura 5. En general, las comunidades bacterianas se alteraron a
bajas densidades de corriente, pero las diferencias se redujeron con el aumento
de la densidad de corriente. Shang et al.[52]y Li et al.
[53]informó que las bacterias Gram-positivas son más recalcitrantes que las
bacterias Gram-negativas durante el tratamiento con EC, pero la discrepancia Figura 4.Alteraciones de la comunidad bacteriana a nivel de phylum.

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H. Li, et al. Revista de ingeniería química 392 (2020) 123674

Figura 6.Estructura de la comunidad bacteriana a nivel de género (basada en el método de

cultivo bacteriano) bajo diferentes densidades de corriente.

deberse a las diferencias en la capacidad de reparación de lesiones de las

Figura 5.Análisis de componentes principales (PCA) que distingue las diferencias en las
comunidades bacterianas entre tratamientos con diferentes densidades de corriente en función
de los datos de abundancia relativa a nivel de género.
menos 4 antibióticos[2]. Y un plásmido enE. coliPI7 que porta 17 ARG asociados
con resistencia a 7 antibióticos también ha sido identificado por Mantilla-Calderon
et al.[58]. Por lo tanto, una mayor amenaza para la salud humana sería causada
por la transferencia de elementos de genes móviles resistentes a múltiples
antibióticos a patógenos humanos. Los ARG dentro del mismo grupo pueden
ubicarse en los mismos plásmidos y eliminarse con la degradación de los
plásmidos durante la desinfección EC, lo que reduce la probabilidad de
propagación de los ARG.a través deplásmidos.
3.4. Alteración de la resistencia antibiótica con diferentes tratamientos de CE
Las bacterias heterótrofas cultivables recolectadas de placas de agar nutritivo
solo ocuparon una pequeña proporción del total de bacterias; la mayoría fueron
<1% (Figura S3). No obstante, el cultivo bacteriano también se utilizó para explorar
los efectos de la electrólisis en la comunidad bacteriana y la relación entre la
comunidad y la resistencia a los antibióticos.Aeromonasfue el género más
dominante en RW, seguido porEscherichia, citrobacter, yAcinetobacter(Figura 6).
Escherichiaycitrobactereran casi indetectables después del tratamiento con EC,
mientras que las proporciones de PseudomonasyAcinetobacteraumentó. La
mayor proporción de Acinetobactertambién se encontró en la pirosecuenciación
del gen 16S rRNA (Figura S4). Sin embargo, la variación deEscherichiay
Pseudomonas no coincidía con los resultados de la biología molecular. Esto podría
bacterias. Se ha informado quePseudomonasalbergandobacA se repara
fácilmente debido a su excelente desempeño en la biosíntesis de peptidoglicano y
otros componentes de la pared celular[1]. Además,P. aeruginosaes conocido por
ser experto en fotoreparación[59], lo que lleva a más sobrevivientesP. aeruginosa
después del tratamiento con CE.
Los 10 antibióticos seleccionados son ampliamente utilizados en la prevención
de enfermedades humanas y en la cría de ganado y aves de corral.[60].
Encontramos altas frecuencias de bacterias resistentes a la mayoría de estos
antibióticos en aguas residuales tratadas biológicamente (Figura 7). Entre ellas, las
bacterias resistentes a PEN, VAN, CEP y ERY fueron las especies más prevalentes
con una proporción de 81 a 95% (Figura 7). Akinbowale et al.[61]probó la
susceptibilidad a los antibióticos de 104 especies bacterianas aisladas de
diferentes partes de Australia y encontró que la resistencia a CEP, ERY y TC está
muy extendida, mientras que la resistencia a CAP y GEN es menos común, similar
a nuestros resultados. Resultados similares de diferentes regiones indican la
contaminación universal por ARB.
Las frecuencias de detección de bacterias resistentes a la mayoría de los antibióticos
probados se redujeron entre un 9% y un 100% después del tratamiento con EC (Figura 7).
Sin embargo, las bacterias resistentes a algunos antibióticos (CAP, CIP y GEN) se vieron
enriquecidas en algunos tratamientos (Figura 7). Cabe señalar que todas las bacterias
resistentes a estos antibióticos tenían una baja abundancia y podría haber habido una
selección desigual de los aislamientos. La resistencia a los antibióticos se vio afectada por
los cambios en la comunidad microbiana, ya que la frecuencia de resistencia a diferentes
antibióticos varió entre los géneros. Como se muestra enTabla 6. Las frecuencias de
Acinetobacterresistentes a ERY, GEN, OFX, PEN, SD y VAN fueron relativamente bajas en
comparación con otros géneros. Sin embargo,Acinetobacteralcanzó la relación más alta
(24,1% de aislados viables) con D20. Así que la abundancia de bacterias resistentes a
estos antibióticos fue

Tabla 5
Correlaciones entre ARGs en el grupo 1 con tratamiento D.

ac(6′)-Ib acB blaSHV ejemB qnrS tetW

ac(6′)-Ib PearsonCorrelati sobre 1

Sig. ( 2-tenfermo)
acB Peras sobre correlación 0.941* 1
Sig. ( 2-tenfermo) 0.017
blaSH V Peras sobre Correlati onorte 0.888* 0.942* 1
Sig. ( 2 colas) 0.044 0.017
ejemB Peras sobre correlación norte 0,948* 0.939* 0.935* 1
Sig. ( 2-tenfermo) 0.014 0.018 0.02
qnrS Peras sobre correlación norte 0.880* 0.855 0.857 0,977** 1
Sig. ( 2-tenfermo) 0.049 0.065 0.064 0.004
tetW Peras sobre correlación norte 0.979** 0.954* 0.898* 0,985** 0.948* 1
Sig. ( 2-tenfermo) 0.004 0.012 0.039 0.002 0.014

C no en th mi0. 05 nivel
* Signo fi un (2- cola), * * significativo al nivel de 0,01 (bilateral).

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H. Li, et al. Revista de ingeniería química 392 (2020) 123674

estudio (de 0,9 a 0,78). Venieri et al.[64]informaron que la resistencia deteriorada es el

Figura 7.Frecuencia de resistencia a antibióticos bajo diferentes densidades de
corriente. CAP, cloranfenicol; CEP, cefalexina; CIP, ciprofloxacina; ERY, eritromicina;
GEN, gentamicina; OFX, ofloxacina; PEN, penicilina; SD, sulfadiazina; TC,
tetraciclina; VAN, vancomicina.
resultado de la pérdida de ARG en las bacterias sobrevivientes después de la desinfección
solar fotocatalítica. Un número considerable de bacterias dañadas siguen siendo
cultivables durante la fotocatálisis.[sesenta y cinco], por lo que la resistencia a los
antibióticos podría debilitarse durante la recuperación. La resistencia de sobrevivirE. coli
Se ha demostrado que las tensiones en CIP y VAN disminuyen con el aumento de la
radiación UV.[66]y Li et al.[67]informó que la resistencia de las cepas sobrevivientes a SDZ
se ve afectada después del tratamiento bioelectroquímico.
En comparación, los procesos tradicionales de desinfección como UV y cloración
enriquecen ARB[11,12,36]. Los genes más funcionales asociados con los mecanismos de
protección y reparación están regulados positivamente en los resistentes a múltiples
antibióticos.E. colique en menos resistenteE. colidurante la irradiación solar[68]. La
selección de ARB también ocurrió en nuestro estudio anterior durante la desinfección UV
[17]. Esto podría deberse al fuerte potencial oxidante del %OH que hace que las
respuestas de estrés del ARB sean insignificantes en comparación con el daño celular
severo durante el tratamiento con EC, o que el ARB lesionado no pueda recuperarse al
estado inicial.

4. Conclusiones
Tabla 6
Frecuencias medias de resistencia (%) de los principales géneros a los diferentes antibióticos. Investigamos los efectos de la densidad de corriente y el tiempo de
reacción en la eliminación de ARG durante la desinfección EC. El
Género (número) CAP CEP CIP ERY GEN OFX PLUMA SD FURGONETA TC
tratamiento T se desempeñó mejor en la inactivación de bacterias que
Acinetobacter(33) 6 27 9 12 0 0 18 24 15 64 el tratamiento D, mientras que el primero fue menos eficiente en la
Aeromonas(159) 1 87 5 46 6 1 92 72 23 87 eliminación de ARG. Por ejemplo, la disminución de la abundancia
citrobacter(6) 0 83 0 83 0 33 100 50 17 100
relativa de ARG con D80 (de 0,54 a 4,1) fue mayor que con T20 (de 5,4 a
Escherichia(8) 0 38 25 100 0 38 100 100 38 100
Pseudomonas(19) dieciséis 79 0 47 0 5 89 16 16 84 5,2), mientras que ambos tratamientos inactivaron el 99 % de las
bacterias. Esto se atribuye principalmente a las diferentes cantidades
Cada género contenía aislamientos de todos los tratamientos (RW, D10, D20 y de cloro libre y % de OH generados bajo diferentes tiempos de
D40). CAP, cloranfenicol; CEP, cefalexina; CIP, ciprofloxacina; ERY, eritromicina; electrólisis y densidades de corriente. La concentración de cloro libre
GEN, gentamicina; OFX, ofloxacina; PEN, penicilina; SD, sulfadiazina; TC, con T20 fue 4,4 veces mayor que con D80, mientras que se generó
tetraciclina; VAN, vancomicina.
mucho más % de OH al aumentar la densidad de corriente que al
aumentar el tiempo de electrólisis. Por lo tanto,
reducido drásticamente con D20 (Figura 7).Escherichiaycitrobactertenían una frecuencia
También investigamos el efecto de la desinfección EC sobre la resistencia a los
relativamente alta de resistencia a OFX, mientras que otros géneros eran susceptibles a
antibióticos de las bacterias sobrevivientes. Las frecuencias de bacterias resistentes a la
ella (Tabla 6). Por lo tanto, la frecuencia de bacterias resistentes a OFX disminuyó
mayoría de los antibióticos probados fueron más bajas después de la desinfección, con
considerablemente, ya que estos dos géneros apenas se detectaron después del
un rango de 9% a 100%. Los cambios en la composición de las bacterias cultivables
tratamiento con EC.
fueron responsables de la variación en la frecuencia de resistencia a los antibióticos. La
Otra razón para la disminución de las frecuencias de resistencia puede ser que las
abundancia de bacterias con alta resistencia a los antibióticos (como Escherichia) se
bacterias sobrevivientes eran bastante diferentes de sus contrapartes en RW. Los índices
redujo, mientras que aquellos con baja resistencia a los antibióticos (Acinetobactery
MAR de la mayoría de las bacterias mostraron una tendencia a la baja después de la
Pseudomonas) se incrementaron. Además, los índices MAR de los géneros principales
desinfección con EC, y los índices de las muestras de agua también disminuyeron (P <
disminuyeron significativamente de 0,47 a 0,35 después del tratamiento con EC, lo que
0,05), lo que indica que menos bacterias resistentes a múltiples antibióticos sobrevivieron
indica que menos bacterias resistentes a múltiples antibióticos sobrevivieron a la
al tratamiento con EC (Tabla 7). Hess y Gallert[62]mostró que las bacterias resistentes a
desinfección con EC; esto también contribuyó a la disminución de las frecuencias de ARB.
múltiples antibióticos son más sensibles al ozono que las que solo son resistentes a la
ampicilina. Esto se atribuye al hecho de que la carga metabólica de la resistencia a los
La desinfección EC no solo disminuyó la abundancia relativa de ARG en el efluente
antibióticos disminuye la viabilidad de los ARB durante la ozonización. Se ha informado
secundario, sino que también perjudicó la resistencia a los antibióticos de las bacterias
que los resistentes a VANE. faecium requiere energía adicional para mantener la
sobrevivientes. Por lo tanto, este podría ser un método de desinfección prometedor para
resistencia a los antibióticos[63]. De hecho, se encontró una reducción en la frecuencia
controlar la diseminación de la resistencia a los antibióticos.
de bacterias resistentes a VAN en nuestro

Tabla 7
Índices de resistencia a múltiples antibióticos (MAR) de los géneros dominantes.

Género LE (n = 73) D10 (n = 60) D20 (n = 58) D40 (n = 56)

% MAR % MAR % MAR % MAR

Acinetobacter 4 0.27 13 0.17 24 0.16 14 0.16

Aeromonas 73 0.48 75 0.41 48 0.32 59 0.38
PAG
setdomona
u s 0 0 5 0.33 14 0.32 14 0.39
i o Ctr
bacteria 5 0.48 2 0.50 2 0.40 0 0
mi
scherichia 8 0.50 2 0.50 0 0 2 0.80
T youn 0.47 0.37 0.31 0.35

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Declaración de interés en competencia
Los autores declaran que no tienen intereses financieros en competencia
ni relaciones personales conocidas que pudieran haber influido en el trabajo
informado en este documento.
Expresiones de gratitud
Esta investigación fue financiada por el Programa de Patrocinio de Jóvenes
Científicos de Élite de CAST (YESS) (2018QNRC001), la Fundación Municipal de Ciencias
Naturales de Beijing (número de subvención 6192029), los Fondos de Investigación
Básica para los Institutos Centrales de Investigación de China y el Proyecto de Innovación
de la Academia China de Ciencias Agrícolas.
Apéndice A. Datos complementarios
Los datos complementarios a este artículo se pueden encontrar en línea en
oxidación avanzada con UV/H2O2, J. Peligro. Mate. 323 (2017) 426–433.
[21]H. Sarkka, A. Bhatnagar, M. Sillanpaa, Desarrollos recientes de la electrooxidación en el
tratamiento del agua: una revisión, J. Electroanal. química 754 (2015) 46–56.
[22]HN Li, Y. Long, Y. Wang, C. Zhu, J. Ni, Degradación electroquímica de bisfenol A en electrolito
de cloruro: análisis de factores y estudio de mecanismos, Electrochim. Acta 222 (2016)
1144–1152.
[23]HN Li, B. Li, Z. Zhang, Y. Tian, J. Ye, X. Lv, C. Zhu, Factores que influyen en la eliminación de bacterias
resistentes a los antibióticos y genes de resistencia a los antibióticos mediante el tratamiento
electrocinético, Ecotoxicol. Reinar. seguro 160 (2018) 207–215.
[24]CE Schaefer, C. Andaya, A. Urtiaga, Evaluación de la desinfección y formación de
subproductos durante el tratamiento electroquímico de aguas superficiales usando un Ti/
IrO2ánodo, Chem. Ing. J. 264 (2015) 411–416.
[25]L. Mezule, M. Reimanis, V. Krumplevska, J. Ozolins, T. Juhna, Comparación de la
desinfección electroquímica con la cloración para la inactivación de esporas bacterianas
en el agua potable, Water Sci. Tecnología Abastecimiento de agua 14 (2014) 158–164.
[26]HN Li, B. Li, Z. Zhang, C. Zhu, Y. Tian, J. Ye, Evolución de las comunidades microbianas durante el
tratamiento electrocinético del suelo contaminado con antibióticos, Ecotoxicol. Reinar. seguro
148 (2018) 842–850.
[27]HN Li, BX Li, JL Ma, J. Ye, P. Guo, LF Li, Destino de las bacterias resistentes a los antibióticos y genes de
resistencia a los antibióticos en el tratamiento electrocinético de suelos contaminados con
antibióticos, Chem. Ing. J. 337 (2018) 584–594.
[28]V. Schmalz, T. Dittmar, D. Haaken, E. Worch, Desinfección electroquímica de aguas residuales tratadas

https://doi.org/10.1016/j.cej.2019.123674. biológicamente de pequeños sistemas de tratamiento mediante el uso de electrodos de diamante

dopado con boro (BDD): contribución para la reutilización directa de aguas residuales domésticas,
Water Res. 43 (2009) 5260–5266.
Referencias [29]HN Li, J. Ni, Electrogeneración de subproductos de desinfección en un ánodo de diamante
dopado con boro con resorcinol como sustancia modelo, Electrochim. Acta 69 (2012) 268–
274.
[1]S. Jia, P. Shi, Q. Hu, B. Li, T. Zhang, XX Zhang, El cambio en la comunidad bacteriana impulsa la
[30]CA Martinez-Huitle, E. Brillas, Alternativas electroquímicas para la desinfección del agua
promoción de la resistencia a los antibióticos durante la cloración del agua potable, Environ. ciencia
potable, Angew. química En t. ed. 47 (2008) 1998-2005.
Tecnología 49 (2015) 12271–12279.
[31]YQ Cong, ZC Wu, YQ Li, Inactivación electroquímica de coliformes por radicales
[2]Q. Yang, T. Tian, T. Niu, P. Wang, Caracterización molecular de la resistencia a los
hidroxilo generados in situ, Korean J. Chem. Ing. 25 (2008) 727–731.
antibióticos en bacterias multirresistentes cultivables del estiércol de ganado, Environ.
[32]X. Huang, Y. Qu, CA Cid, C. Finke, MR Hoffmann, K. Lim, SC Jiang, Desinfección electroquímica de aguas
contaminar 229 (2017) 188–198.
residuales de inodoros mediante celdas de electrólisis de aguas residuales, Water Res. 92 (2016)
[3]YG Zhu, TA Johnson, JQ Su, M. Qiao, GX Guo, RD Stedtfeld, SA Hashsham,
164–172.
JM Tiedje, Diversos y abundantes genes de resistencia a antibióticos en granjas
[33]MC Dodd, Impactos potenciales de los procesos de desinfección en la eliminación y desactivación de
porcinas chinas, PNAS 110 (2013) 3435–3440.
los genes de resistencia a los antibióticos durante el tratamiento del agua y las aguas residuales, J.
[4]S. Jia, XX Zhang, Y. Miao, Y. Zhao, L. Ye, B. Li, T. Zhang, Destino de los genes de resistencia a
Environ. Monitorear 14 (2012) 1754-1771.
los antibióticos y sus asociaciones con la comunidad bacteriana en las aguas residuales de
[34]NA Lerminiaux, ADS Cameron, Transferencia horizontal de genes de resistencia a antibióticos
la cría de ganado y el agua del río receptor, Water Res . 124 (2017) 259–268.
en entornos clínicos, Can. J. Microbiol. 65 (2018) 34–44.
[5]MOA Sommer, Barreras a la propagación de la resistencia, Nature 509 (2014) 567–568.
[35]MC Meckes, Efecto de la desinfección con luz ultravioleta sobre coliformes resistentes a antibióticos en efluentes de aguas
[6]A. Pruden, DGJ Larsson, A. Amezquita, P. Collignon, KK Brandt, DW Graham,
residuales, Appl. Reinar. Microbiol. (mil novecientos ochenta y dos).
JM Lazorchak, S. Suzuki, P. Silley, JR Snape, E. Topp, T. Zhang, YG Zhu, Opciones de gestión
[36]MT Guo, QB Yuan, J. Yang, Reducción ultravioleta de bacterias heterótrofas resistentes a
para reducir la liberación de antibióticos y genes de resistencia a los antibióticos en el
eritromicina y tetraciclina y sus genes de resistencia en aguas residuales municipales,
medio ambiente, Environ. Perspectiva de Salud. 121 (2013) 878–885.
Chemosphere 93 (2013) 2864–2868.
[7]S. Kim, H. Park, K. Chandran, Propensión del lodo activado para amplificar o atenuar los
[37] CLSI, Estándares de desempeño para las pruebas de susceptibilidad a los antimicrobianos;
genes de resistencia a la tetraciclina y las bacterias resistentes a la tetraciclina: un enfoque
Vigésimo suplemento informativo, Clinical and Laboratory Standards Institute 30 (2010).
de modelado matemático, Chemosphere 78 (2010) 1071–1077.
[38]JY Hu, JC Shi, H. Chang, D. Li, M. Yang, YC Kamagata, Fenotipado y genotipado de
[8]TM LaPara, TR Burch, PJ McNamara, DT Tan, M. Yan, JJ Eichmiller, Las aguas residuales municipales
antibióticos resistentesEscherichia coliaislado de una cuenca fluvial natural,
tratadas terciariamente son una fuente puntual importante de genes de resistencia a los
Environ. ciencia Tecnología 42 (2008) 3415–3420.
antibióticos en el puerto superior de Duluth, Environ. ciencia Tecnología 45 (2011) 9543–9549.
[39]HN Li, XP Zhu, JR Ni, Inactivación deEscherichia colien na2ASI QUE4electrolito con ánodo de
[9]A. Pruden, M. Arabi, HN Storteboom, Correlación entre las actividades humanas aguas arriba y los
diamante dopado con boro, Electrochim. Acta 56 (2010) 448–453.
genes de resistencia a los antibióticos ribereños, Environ. ciencia Tecnología 46 (2012) 11541–
[40]W. Lin, M. Zhang, S. Zhang, X. Yu, ¿Puede la cloración coseleccionar genes de resistencia a los
11549.
antibióticos? Quimiosfera 156 (2016) 412–419.
[10]BA Sullivan, CC Vance, TJ Gentry, R. Karthikeyan, Efectos de la cloración y la luz
[41]S. Palmas, AM Polcaro, A. Vacca, M. Mascia, F. Ferrara, Influencia de las condiciones de
ultravioleta en bacterias ambientales resistentes a la tetraciclina ytet(W) en agua, J.
operación en el proceso de desinfección electroquímica de aguas naturales en electrodos
Environ. química Ing. 5 (2017) 777–784.
BDD, J. Appl. electroquímica 37 (2007) 1357-1365.
[11]JJ Huang, HY Hu, F. Tang, Y. Li, SQ Lu, Y. Lu, Inactivación y reactivación de bacterias resistentes
[42]J. Radjenovic, DL Sedlak, Retos y oportunidades de los procesos electroquímicos como
a antibióticos por cloración en efluentes secundarios de una planta de tratamiento de
tecnologías de última generación para el tratamiento de aguas contaminadas, Environ.
aguas residuales municipales, Water Res. 45 (2011) 2775–2781.
ciencia Tecnología 49 (2015) 11292–11302.
[12]MT Guo, QB Yuan, J. Yang, Selectividad microbiana del tratamiento UV en bacterias heterótrofas
[43]M. Saran, I. Beck-Speier, B. Fellerhoff, G. Bauer, Eliminación fagocítica de microorganismos
resistentes a los antibióticos en efluentes secundarios de una planta de tratamiento de aguas
por procesos radicales: consecuencias de la reacción de los radicales hidroxilo con cloruro
residuales municipales, Water Res. 47 (2013) 6388–6394.
que produce átomos de cloro, Free Radical Biol. Medicina. 26 (1999) 482–490.
[13]QB Yuan, MT Guo, J. Yang, Destino de las bacterias y los genes resistentes a los antibióticos durante la cloración de
[44]XY Li, HF Diao, FXJ Fan, JD Gu, F. Ding, ASF Tong, Desinfección electroquímica de
aguas residuales: implicaciones para el control de la resistencia a los antibióticos, PLoS ONE 10 (2015)
aguas residuales: identificación de sus principales acciones germicidas, J. Environ.
e0119403.
Ing. 130 (2004) 1217–1221.
[14]Y. Zhang, Y. Zhuang, J. Geng, Reducción de genes de resistencia a antibióticos en efluentes de aguas
[45]Q. Wen, L. Yang, R. Duan, Z. Chen, Monitoreo y evaluación de genes de resistencia a antibióticos en
residuales municipales mediante procesos de oxidación avanzados, Sci. Entorno Total. 550 (2016)
cuatro plantas de tratamiento de aguas residuales municipales en Harbin, noreste de China,
184–191.
Environ. contaminar 212 (2016) 34–40.
[15]P. Shi, S. Jia, X. Zhang, conocimientos metagenómicos sobre los efectos de la cloración en la resistencia
[46]J. Zheng, C. Su, J. Zhou, L. Xu, Y. Qian, H. Chen, Efectos y mecanismos de la desinfección por
a los antibióticos microbianos en el agua potable, Water Res. 47 (2013) 111–120.
ultravioleta, cloración y ozono sobre genes de resistencia a antibióticos en efluentes
[dieciséis]JM Sousa, G. Macedo, M. Pedrosa, C. Becerra-Castro, S. Castro-Silva,
secundarios de plantas de tratamiento de aguas residuales municipales, Chem. Ing. J. 317
MFR Pereira, AMT Silva, OC Nunes, CM Manaia, Ozonización y radiación UV254nm para la
(2017) 309–316.
eliminación de microorganismos y genes de resistencia a antibióticos de aguas residuales
[47]Y. Long, J. Ni, Z. Wang, Mecanismo subcelular deEscherichia coliinactivación durante la
urbanas, J. Hazard. Mate. 323 (2017) 434–441.
desinfección electroquímica con ánodo de diamante dopado con boro: un estudio
[17]Z. Zhang, B. Li, N. Li, MF Sardar, T. Song, C. Zhu, X. Lv, HN Li, Efectos de la desinfección UV
comparativo de tres electrolitos, Water Res. 84 (2015) 198–206.
en fenotipos y genotipos de bacterias resistentes a antibióticos en efluentes secundarios
[48]M. Cho, H. Chung, W. Choi, J. Yoon, correlación lineal entre la inactivación deE. coliy
de aguas residuales municipales planta de tratamiento, Agua Res. 157 (2019).
•Concentración de radicales OH en TiO2desinfección fotocatalítica, Water Res. 38
(2004) 1069–1077.
[18]PR Gogate, AB Pandit, Una revisión de tecnologías imperativas para el tratamiento de
[49]J. Jeong, JY Kim, J. Yoon, El papel de las especies reactivas de oxígeno en la inactivación
aguas residuales II: métodos híbridos, Adv. Reinar. Res. 8 (2004) 553–597.
electroquímica de microorganismos, Environ. ciencia Tecnología 40 (2006) 6117–6122.
[19]G. Ferro, F. Guarino, S. Castiglione, L. Rizzo, Potencial de propagación de la resistencia a los antibióticos
en efluentes de aguas residuales urbanas desinfectados por UV/H2O2proceso, Sci. Entorno Total. 560
[50]Q. Hu, XX Zhang, S. Jia, K. Huang, J. Tang, P. Shi, L. Ye, H. Ren, Perspectivas metagenómicas sobre los
(2016) 29–35.
efectos de la desinfección ultravioleta en el resistoma antibiótico en aguas residuales tratadas
[20]G. Ferro, F. Guarino, A. Cicatelli, L. Rizzo, Cuantificación de genes de resistencia a betalactámicos en
biológicamente, Water Res. 101 (2016) 309–317.
un antibiótico resistenteEscherichia colisuspensión de agua tratada por
[51]M. Diao, XY Li, JD Gu, HC Shi, ZM Xie, Investigación microscópica electrónica de

9
H. Li, et al.
la acción bactericida de la desinfección electroquímica en comparación con la cloración, la
ozonización y la reacción de Fenton, Process Biochem. 39 (2004) 1421-1426.
[52]K. Shang, Z. Qiao, B. Sun, XZ Fan, SY Ai, Una desinfección electroquímica eficiente deE. coliyS.
aureusen agua potable usando ferroceno-PAMAM-nanotubos de carbono de pared
múltiple-electrodo de grafito pirolítico modificado con nanocompuesto de quitosano, J.
Solid State Electrochem. 17 (2013) 1685–1691.
[53]HN Li, X. Zhu, J. Ni, Comparación del método electroquímico con ozonización,
cloración y monocloraminación en la desinfección del agua potable, Electrochim.
Acta 56 (2011) 9789–9796.
[54]J. Alexander, G. Knopp, A. Dötsch, A. Wieland, T. Schwartz, El tratamiento con ozono de aguas
residuales acondicionadas selecciona genes de resistencia a antibióticos, bacterias oportunistas e
induce fuertes cambios de población, Sci. Entorno Total. 559 (2016) 103–112.
[55]S. Giannakis, TTM Le, JM Entenza, C. Pulgarin, Solar photo-Fenton desinfección de 11 bacterias
resistentes a antibióticos (ARB) y eliminación de genes AR representativos. Evidencia de
que la resistencia a antibióticos no implica resistencia al tratamiento oxidativo, Water Res.
143 (2018) 334–345.
[56]NJ Croucher, R. Mostowy, C. Wymant, P. Turner, SD Bentley, C. Fraser, Mecanismos de
transferencia de ADN horizontal de bacterias como armas de conflicto intragenómico, PLoS
Biol. 14 (2016).
[57]C. Baker-Austin, MS Wright, R. Stepanauskas, JV McArthur, Coselección de resistencia
a antibióticos y metales, Trends Microbiol. 14 (2006) 176–182.
[58]D. Mantilla-Calderon, MR Jumat, T. Wang, P. Ganesan, N. Al-Jassim, PY Hong,
Aislamiento y caracterización de NDM-positivoEscherichia colide aguas residuales
municipales en Jeddah, Arabia Saudita, Antimicrob. Agentes Quimiotera. 60 (2016)
5223–5231.
[59]CW McKinney, A. Pruden, Desinfección ultravioleta de bacterias resistentes a antibióticos y
sus genes de resistencia a antibióticos en agua y aguas residuales, Environ. ciencia
Tecnología 46 (2012) 13393–13400.
[60]QQ Zhang, GG Ying, CG Pan, YS Liu, JL Zhao, Evaluación integral de la emisión y el destino de
los antibióticos en las cuencas fluviales de China: análisis de fuentes,
10
Revista de ingeniería química 392 (2020) 123674
modelado multimedia y vinculación a la resistencia bacteriana, Environ. ciencia Tecnología 49 (2015)
6772–6782.
[61]OL Akinbowale, H. Peng, MD Barton, Resistencia antimicrobiana en bacterias
aisladas de fuentes acuícolas en Australia, J. Appl. Microbiol. 100 (2006) 1103-1113
.
[62]S. Hess, C. Gallert, Sensibilidad de resistentes a antibióticos y susceptibles a
antibióticos Escherichia coli,enterococoyEstafilocococepas contra el ozono, J.
Water Health 13 (2015) 1020–1028.
[63]N. Handel, JM Schuurmans, S. Brul, BH ter Kuile, Compensación de los costos metabólicos de
la resistencia a los antibióticos por adaptación fisiológica enEscherichia coli,
Antimicrobiano. Agentes Quimiotera. 57 (2013) 3752–3762.
[64]D. Venieri, I. Gounaki, M. Bikouvaraki, V. Binas, A. Zachopoulos, G. Kiriakidis,
D. Mantzavinos, Fotocatálisis solar como técnica de desinfección: Inactivación de Klebsiella
pneumoniaeen aguas residuales e investigación de cambios en el perfil de resistencia a los
antibióticos, J. Environ. Gestionar. 195 (2017) 140–147.
[sesenta y cinco]PSM Dunlop, M. Ciavola, L. Rizzo, DA McDowell, JA Byrne, Efecto de la fotocatálisis en la
transferencia de genes de resistencia a antibióticos en aguas residuales urbanas, Catal. Hoy 240
(2015) 55–60.
[66]L. Rizzo, A. Della Sala, A. Fiorentino, G. Li Puma, Desinfección de aguas residuales urbanas por
energía solar y lámpara UV – TiO2fotocatálisis: efecto sobre una multirresistente
Escherichia colicepa, Agua Res. 53 (2014) 145–152.
[67]H. Li, S. Zhang, XL Yang, H. Xu, YL Yang, YW Wang, HL Song, Aguas residuales simuladas
reducidasKlebsiella michiganensisViabilidad de la cepa LH-2 y abundancia del gen de
resistencia a los antibióticos correspondiente en reactores bioelectroquímicos, Ecotoxicol.
Reinar. seguro 162 (2018) 376–382.
[68]N. Al-Jassim, D. Mantilla-Calderon, T. Wang, PY Hong, Inactivación y expresión
génica de aguas residuales virulentasEscherichia colicepa y el comensal no
virulentoEscherichia coliTensión DSM1103 por irradiación solar, Environ. ciencia
Tecnología 51 (2017) 3649–3659.