Laboratorio de Química-Física

Primer semestre 2018

Título del trabajo

José Cisternas, Cristian Lamaizon Muñoz
Química y Farmacia
Correo-e: ejemplo1@uc.cl, cnlamaizon@uc.cl

Resumen. Debe tener una longitud de entre 100-150 palabras. El tipo de letra es Times New Roman en
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1. Introducción económica de antibióticos que no llegan a ser

distribuidos hasta el paciente y que terminan siendo
Los antibióticos son una gran herramienta
acumulados en ambientes ecológicos como en
terapéutica que se fundamentan en un amplio
sistemas acuáticos ha sido de interés luego de la
mecanismo farmacológico, uno de estos es la
aparición de la resistencia de las bacterias a estos
inhibición de la pared celular bacteriana, siendo los
fármacos.
antibióticos β-lactámicos los más representativos [1].
Este grupo se caracteriza por poseer la agrupación β- La conversión de un antibiótico en su producto de
lactama (fig. 1) que es esencial para su actividad degradación está marcada por estructuras más estables
antibacteriana, incluyendo a la familia de las que, por lo tanto, no tengan actividad antibacteriana
penicilinas, las cefalosporinas, el ácido clavulánico, la [4]. La cefradina, por ejemplo, antibiótico de la
tienamicina y las monobactamas [1]. primera generación de las cefalosporinas tiene un
grupo metilo en la posición C3, respectiva a R2, y un
Las cefalosporinas corresponden al segundo
grupo fenilglicilo en la posición 7, respectiva a R1, lo
mayor grupo de antibióticos después de las penicilinas
que le confiere una mayor resistencia a la hidrólisis
[1], siendo más estables frente a las β-lactamasas
química (en ambiente ácido) o enzimática del anillo β-
bacterianas, con lo que adquieren un mayor rango de
lactámico [6], por lo que la cinética y el mecanismo de
espectro de actividad [2]. Su núcleo, el ácido
reacción de la degradación de estos compuestos deben
7-aminocefalosporánico (figura 2), tiene una baja
ser bien entendidos para asegurar un proceso eficiente
actividad antibacteriana intrínseca, pero la unión de
y cuantitativo, es por esto que una de las reacciones de
varios grupos variables R1 y R2 han aumentado la
mayor interés en estos casos es la de oxidación y
cantidad de compuestos potentes contra las bacterias
reducción. Como anteriormente se mencionó, el anillo
con una baja toxicidad [2], además cabe mencionar
β-lactámico es esencial para su efecto en esta familia
que las cefalosporinas se han clasificado
de compuestos, por lo que el rompimiento de éste es
tradicionalmente en cuatro grupos o generaciones
de gran significado para su eliminación. Tal estructura
dependiendo principalmente en su espectro de
puede sufrir una reacción química que se fundamenta
actividad antibacteriana [2].
en la aplicación del proceso conocido como oxidación
La introducción de los antibióticos en el área química in situ (ISCO, por sus siglas en inglés) que
clínica significó un gran avance en la lucha contra busca la degradación de contaminantes a través de
enfermedades hasta ese momento mortales, sin oxidantes directo sobre el sistema en cuestión [5], para
embargo el desarrollo de la resistencia bacteriana estos casos, uno de los reactivos posibles a utilizar es
resultó en una evaluación del uso de el permanganato (MnO4-), el cual, en medio básico,
esta herramienta [3]. tiene la capacidad de oxidar el anillo β-lactámico de la
cefradina, lo que produce la apertura de éste y la
Este fenómeno no generó alarma inmediata
formación del ión manganato (figura 3), el cual
mientras el aumento de la resistencia a antibióticos
absorbe a los 630 nm [7], de esta forma se expone un
como la penicilina se compensaba con un aumento en
método de degradación de este antibiótico, en donde
la dosis, generando así una disminución del potencial hay que considerar la cinética de la reacción, por lo
terapéutico debido al aumento de organismos que evaluaremos el efecto de la concentración de los
resistentes a estas drogas [3]. El desarrollo por parte
reactantes sobre la velocidad de reacción, que se
de las bacterias de β-lactamasas, enzimas que
define como la variación de la cantidad de producto o
inactivan a estos fármacos hidrolizando el anillo
de algún reactante en función del tiempo [8] y cuál es
β-lactámico [3], aumentando así la resistencia de estos
el orden de reacción para cada reactivo.
organismos, por lo que el desarrollo de metodologías
para la eliminación y degradación eficiente y
2. Materiales y métodos
Reactivos:
𝐾𝑀𝑛𝑂4 = 3,0𝑥10−3 𝑀;
𝑁𝑎𝑂𝐻 = 0,65 𝑀;
𝐶𝑒𝑓𝑟 = 5,0𝑥10−5 𝑀
Agua destilada
Instrumentos
Celdas de 1 cm. para espectrofotometría UV-vis
Espectrofotómetro UV-vis
Metodología
Se preparan ocho disoluciones sin cefradina en celdas
espectrofotométricas a partir de disoluciones stock de
𝐾𝑀𝑛𝑂4 = 3,0𝑥10−3 𝑀; 𝑁𝑎𝑂𝐻 = 0,65 𝑀 𝐶𝑒𝑓𝑟 =
5,0𝑥10−5 𝑀 tal como se muestra en la tabla 1 y 2. En
espectrofotómetro se configura la absorbancia igual a
cero con agua destilada y luego se agrega el volumen
de cefradina en la celda de la disolución 1, se mide
absorbancia a 630 nm en espectrofotómetro UV-vis a
tiempos regulares de 5 segundos por al menos un
minutos. Se repite procedimiento para las otras siete
disoluciones.
Para todas las disoluciones, la absorbancia corregida o
blanco corresponde a la medida en el tiempo 0 (cero),
esto es, la absorbancia inmediata al momento de
agregar la cefradina.
El método utilizado para determinar la ley de
velocidad de esta reacción corresponde al método de
la velocidad inicial.
3. Resultados y Discusión
Para determinar la ley de la velocidad de la reacción
en estudio, es necesario considerar que: las
concentraciones iniciales de las disoluciones con las
que se trabaja deben ser conocidas, como también el
producto formado en cada experimento según el
tiempo de reacción. Esto permitirá estimar la
velocidad inicial de la reacción y, por consiguiente, el
orden respectivo para cada reactante.
En primer lugar, se prepara un set de 8 disoluciones de
3000 µL a partir de disoluciones stock de 𝐾𝑀𝑛𝑂4 =
3,0𝑥10−3 𝑀; 𝑁𝑎𝑂𝐻 = 0,65 𝑀; 𝐶𝑒𝑓𝑟 = 5,0𝑥10−5 𝑀.
De esta forma, y a partir de:
𝐶𝑜 ∙ 𝑉𝑜 = 𝐶𝑓 ∙ 𝑉𝑓 𝑒𝑐(1)
Se reemplazan los valores explicitados en tabla 1 para
el cálculo- a modo de ejemplo- de la concentración de
Cefradina en celda del experimento 1:
5,0𝑥10−5 𝑀𝑥100
𝐶𝑐𝑒𝑓𝑑 𝑓 = = 1,67𝑥10−6 𝑀
3000
Luego, mediante espectrofotometría UV-VISIBLE, se
mide la formación de producto a 610 nm, mediante la
ecuación de Lambert-Beer:
𝐴 = 𝑐 ∙ 𝑏 ∙ 𝜀 𝑒𝑐(2)
2
Si 𝑏 = 1 𝑐𝑚 𝑦 ɛ = 8241 𝑀−1 𝑐𝑚 −1 la ec(2) queda
como:
𝐴 = 𝐶 ∙ 8241 𝑀 𝑒𝑐(2.1)
A modo de ejemplo, se calcula la concentración de
producto formado en experimento 1 según los datos
otorgados por tabla 3 – el cálculo se repite para los
experimentos 2, 3, 4, 5, 6, 7, y 8 según valores de
absorbancia corregida tabulados). Reemplazando en
ec(2.1):
0,002
𝐶= 𝑀 = 2,42269𝑥10−7 𝑀
8241
Una vez calculada la concentración de producto
formado, esto es, para las 8 disoluciones, se calcula la
velocidad inicial de la reacción mediante la
determinación de la tangente al inicio de la reacción,
basada en la concentración de producto formado vs
tiempo (tabla 5). Obtenida la ecuación para la tangente
en cada cada experimento, es fácil ver que la velocidad
de la reacción está representada por la pendiente de
esta, es decir:
∆𝐶
𝑦= 𝑥+𝑛
∆𝑡
Con el uso del método de aislamiento de Ostwald [1],
se puede calcular el orden de reacción para cefradrina
y permanganato de potasio, considerando que en los
experimentos 1,2,3 y 4 la concentración de
permanganato permanece constante, mientras que la
de cefradina varía entre cada uno- el proceso es
inverso para los experimentos 5,6,7 y 8-.
Matemáticamente esto implica que:
log 𝑣 = log 𝑘 + 𝛼 𝑙𝑜𝑔𝐶𝑐𝑒𝑓 + 𝛽 𝑙𝑜𝑔𝐶𝐾𝑀𝑛𝑂4 [2]
Si C(KMnO4) es constante:
log 𝑣𝛼 = 𝑘´´𝛼 + 𝛼 log 𝐶𝑐𝑒𝑓𝑖 𝑒𝑐(3)
Donde 𝑘´´: 𝑐𝑜𝑛𝑠𝑡𝑎𝑛𝑡𝑒 𝑎𝑝𝑎𝑟𝑒𝑛𝑡𝑒 𝑑𝑒 𝑣𝑒𝑙𝑜𝑐𝑖𝑑𝑎𝑑
Por otro lado, si C(Cefr) es constante:
log 𝑣𝛽 = 𝑘´´𝛽 + 𝛽 log 𝐶𝐾𝑀𝑂4 𝑖 𝑒𝑐(4)
Reemplazando la pendiente del experimento 1- a
modo de ejemplo- en log v y la concentración de
cefradina inicial como la variable independiente -
según ec(3)-, se obtiene:
𝑙𝑜𝑔𝑣𝛼 = −7,86
𝐶𝑐𝑒𝑓 𝑖 = 1,667𝑥10−6 𝑀
Se repite el mismo procedimiento para los
experimentos 2,3 y 4 según ec(3) y, por contraparte,
para los experimentos 5,6,7 y 8 según ec(4) (tabla 7),
resultando en:
𝒍𝒐𝒈𝒗𝜶 = 𝟏. 𝟒𝟕𝟗 ∙ 𝒍𝒐𝒈𝑪𝒄𝒆𝒇 + 𝟎. 𝟔𝟎𝟏𝟒
𝑐𝑜𝑛 𝛼 = 1.479 ≈ 1
𝑘´´𝛼 = 3.99 𝑠 −1
𝒍𝒐𝒈𝒗𝜷 = 𝟏, 𝟖𝟐𝟑 ∙ 𝒙 − 𝟏. 𝟎𝟏𝟓
𝑐𝑜𝑛 𝛽 = 1,192 ≈ 1
𝑘´´𝛽 = 0.10 𝑠 −1
Como se puede observar, el permanganato aumenta la
Volumen
velocidad de reacción a medida que se aumenta su KMnO4 400 400 400 400
concentración inicial (figura 3). Según la literatura, el (μL)
permanganato tiene un orden de reacción igual a 1 [7],
lo que entra en discrepancia con lo determinado en este C
estudio, obteniendo un valor de 1.823, cercano a 2 KMnO4 0.0004 0.0004 0.0004 0.0004
(tabla 7), esta diferencia podría deberse al hecho de (mol/L)
que la medición de la absorbancia se realizó a
diferentes tiempos luego de haber realizado las Volumen
disoluciones y, como se expone en la literatura, la NaOH 500 500 500 500
especie medida corresponde al manganato generado (μL)
por la reducción del permanganato, que absorbe a los
630 nm, por lo que pudo haberse reducido antes de C NaOH
0.108 0.108 0.108 0.108
realizar la reacción con la cefradina, esto se podría (mol/L)
resolver realizando la disolución individual y medir
inmediatamente la absorbancia, además de aumentar Volumen
Cefad a100 200 300 400
el número de repeticiones.
(μL)
3.1 Figuras y Tablas
C Cefad
1.67×10-6 3.33×10-6 5.00×10-6 6.67×10-6
(mol/L)

Tabla 2. Preparación de disoluciones 5-8 para estudio

de permanganato de potasio sobre velocidad de
Figura 1. Anillo β-lactámico, núcleo principal de reacción.
los antibióticos del tipo β-lactámico.
5 6 7 8

Volumen
final 3000 3000 3000 3000
(μL)

Volumen
KMnO4 300 400 500 600
(μL)

C
KMnO4 0.0003 0.0004 0.0005 0.0006
(mol/L)
Figura 2. Ácido 7-aminocefalosporánico, núcleo
principal de las cefalosporinas.
Volumen
NaOH 500 500 500 500
(μL)

C NaOH
0.108 0.108 0.108 0.108
(mol/L)

Volumen
Figura 3. Mecanismo de reacción propuesto para la Cefad 100 200 300 400
(μL)
degradación de cefalosporina con permanganato en
medio básico [7].
C Cefad
5.00×10-6 5.00×10-6 5.00×10-6 5.00×10-6
(mol/L)

Tabla 1. Preparación de disoluciones 1-4 para estudio

de efecto de cefradina sobre velocidad de reacción.

1 2 3 4

Volumen
final 3000 3000 3000 3000
(μL)
 Tabla 3. Efecto de la concentración de cefradina sobre la formación de producto a través del tiempo mediante absorbancia a 630 nm

1 2 3 4

Abs Cproducto Abs Cproducto Abs Cproducto Abs Cproducto

Tiempo (s) Abs Abs Abs Abs
corregida (µM) corregida (µM) corregida (µM) corregida (µM)

0 0.053 0.000 0.00 0.062 0.000 0.00 0.081 0.000 0.00 0.117 0.000 0.00

5 0.053 0.000 0.00 0.062 0.000 0.00 0.086 0.005 0.61 0.125 0.008 0.97

10 0.055 0.002 0.24 0.062 0.000 0.00 0.090 0.009 1.09 0.127 0.010 1.21

15 0.055 0.002 0.24 0.063 0.001 0.12 0.093 0.012 1.46 0.128 0.011 1.33

20 0.055 0.002 0.24 0.064 0.002 0.24 0.096 0.015 1.82 0.131 0.014 1.70

25 0.056 0.003 0.36 0.064 0.002 0.24 0.099 0.018 2.18 0.134 0.017 2.06

30 0.058 0.005 0.61 0.065 0.003 0.36 0.102 0.021 2.55 0.136 0.019 2.31

35 0.059 0.006 0.73 0.066 0.004 0.49 0.106 0.025 3.03 0.137 0.020 2.43

40 0.060 0.007 0.85 0.068 0.006 0.73 0.112 0.031 3.76 0.140 0.023 2.80

45 0.060 0.007 0.85 0.069 0.007 0.85 0.114 0.033 4.00 0.142 0.025 3.03

50 0.060 0.007 0.85 0.070 0.008 0.97 0.115 0.034 4.13 0.144 0.027 3.28

55 0.061 0.008 0.97 0.072 0.010 1.20 0.117 0.036 4.37 0.146 0.029 3.52

60 - - - 0.072 0.010 1.20 0.119 0.038 4.61 0.148 0.031 3.76

65 - - - 0.072 0.010 1.20 0.121 0.040 4.85 0.150 0.033 4.00

70 - - - 0.073 0.011 1.33 0.123 0.042 5.10 0.151 0.034 4.23

75 - - - - - - 0.125 0.044 5.34 0.153 0.036 4.37

80 - - - - - - 0.126 0.045 5.46 0.154 0.037 4.49

85 - - - - - - 0.128 0.047 5.70 - - -

4
 Tabla 4. Efecto de la concentración de permanganato de potasio sobre la formación de producto a través del tiempo mediante absorbancia a 630 nm

5 6 7 8

Abs Cproducto Abs Cproducto Abs Cproducto Abs Cproducto

Tiempo (s) Abs Abs Abs Abs
corregida (µM) corregida (µM) corregida (µM) corregida (µM)

0 0.097 0.000 0.00 0.114 0.000 0.00 0.113 0.000 0.00 0.154 0.000 0.00

5 0.097 0.000 0.00 0.114 0.000 0.00 0.143 0.010 1.21 0.161 0.007 0.85

10 0.101 0.004 0.49 0.118 0.004 0.49 0.144 0.011 1.33 0.165 0.011 1.33

15 0.102 0.005 0.61 0.120 0.006 0.73 0.153 0.020 2.43 0.168 0.014 1.70

20 0.103 0.006 0.73 0.122 0.008 0.97 0.156 0.023 2.79 0.172 0.018 2.18

25 0.105 0.008 0.97 0.125 0.011 1.33 0.159 0.026 3.15 0.175 0.021 2.55

30 0.107 0.010 1.21 0.128 0.014 1.70 0.161 0.028 3.40 0.177 0.023 2.79

35 0.108 0.011 1.33 0.130 0.016 1.94 0.163 0.030 3.64 0.179 0.025 3.03

40 0.109 0.012 1.46 0.133 0.019 2.31 0.164 0.031 3.76 0.182 0.028 3.40

45 0.111 0.014 1.70 0.135 0.021 2.55 0.166 0.033 4.00 0.184 0.030 3.64

50 0.112 0.015 1.82 0.137 0.023 2.79 0.168 0.035 4.25 0.187 0.033 4.00

55 0.113 0.016 1.94 0.139 0.025 3.03 0.170 0.037 4.49 0.189 0.035 4.24

60 0.114 0.017 2.06 0.140 0.026 3.15 0.171 0.038 4.61 0.195 0.041 4.98

65 0.115 0.018 2.18 0.142 0.028 3.40 0.173 0.040 4.85 - - -

70 0.116 0.019 2.31 0.144 0.030 3.64 - - - - - -

75 0.116 0.019 2.31 0.145 0.031 3.76 - - - - - -

80 - - - 0.146 0.032 3.88 - - - - - -

85 - - - 0.148 0.034 4.13 - - - - - -

90 - - - 0.149 0.035 4.25 - - - - - -

Figura 4. Efecto de la concentración de la cefradina
sobre la formación de producto de su degradación
con permanganato de potasio en ambiente alcalino.
Figura 7. Calibración de los puntos de logaritmo de
la velocidad inicial versus el logaritmo de la
concentración de permanganato de potasio para el
método de la velocidad inicial.

Tabla 5. Parámetros para determinar velocidad

inicial (v0).

Rango
inicial Pendiente
Disolución R2
lineal (v0) (µM/s)
(µM)

1 0.00-0.85 0.01368 0.90

2 0.00-0.72 0.01915 0.94

Figura 5. Calibración de los puntos de logaritmo de
3 0.00-2.79 0.07614 0.94
la velocidad inicial versus el logaritmo de la
concentración de cefradina para el método de la
velocidad inicial. 4 0.00-3.76 0.09018 0.99

5 0.00-1.21 0.03920 0.96

6 0.00-1.70 0.05254 0.97

7 0.00-2.79 0.12850 0.94

8 0.00-3.40 0.10290 0.96

Figura 6. Efecto de la concentración de

permanganato de potasio sobre la formación de
producto de la degradación de cefradina con éste en
ambiente alcalino.

6
 4 Conclusión
Tabla 6. Parámetros analíticos para la
determinación de la ley de velocidad. El seguimiento de las normas indicadas permitirá que
su trabajo no sólo se destaque por su contenido, sino
Dis V0 (M/s) Ci (M) Log(v0) Log(Ci) que también resulte visualmente atractivo.
Apéndice I (ej: DERIVACIÓN DE LAS
1 1.37×10-8 1.67×10-6 -7.86 -5.78 ECUACIONES UTILIZADAS EN ESTE
INFORME)
2 1.92×10-8 3.33×10-6 -7.72 -5.48
En caso de ser necesario, los apéndices irán ubicados
3 7.61×10-8 5.00×10-6 -7.12 -5.30 después de las Conclusiones, y antes de los
Agradecimientos y las Referencias. Se numerarán con
4 9.02×10-8 6.67×10-6 -7.14 -5.18 números romanos, tal como en el título de esta sección.
Agradecimientos
5 3.92×10-8 3.00×10-4 -7.41 -3.52
Si los hay, los agradecimientos deberán ubicarse al
6 5.25×10 -8
4.00×10 -4
-7.28 -3.40 final del trabajo, justo antes de las referencias. Esta
sección no llevará numeración.
7 1.29×10-7 5.00×10-4 -6.89 -3.30 Todas las referencias deben ser documentos accesibles
públicamente. Finalmente, note que el título de esta
8 1.03×10-7 6.00×10-4 -6.99 -3.22 sección no lleva numeración. Considere el siguiente
ejemplo:
Ci corresponde a la concentración inicial de cefradina en
las disoluciones 1-4 y la concentración de inicial de Referencias
permanganato de potasio en las disoluciones 5-8 1. Delgado A, Minguillón C, Joglar J. Introducción
a la química terapéutica. 2nd ed. Ed. Diaz de
Santos. 2004. España. Páginas 425-449.

Tabla 7. Parámetros cinéticos determinados 2. Katzung, B. Basic and clinical pharmacology.

mediante regresión lineal de logV y logCi 14th ed. McGraw-Hill. 2018. USA. Capítulo 43.
Páginas 809-828.
Ecuación de los 3. Kong K-F, Schneper L, Mathee K. Beta-lactam
mínimos cuadrados antibiotics: from antibiosis to resistance and
bacteriology. APMIS 2010. Páginas 1–36.
𝐥𝐨𝐠 𝑽
= 𝒍𝒐𝒈𝑲′′ + 𝒏𝒍𝒐𝒈𝑪𝒊 4. Wang M, Lele Zhang, Guilong Zhang, Tao Pang,
Xin Zhang, Dongqing Cai, Zhengyan Wu. In situ
Intercepto Pendiente degradation of antibiotic residues in medical
Disol. R2 intravenous infusion bottles using high energy
(logK’’) (n)
electron beam irradiation. Sci Rep. 2017. Páginas
1-4 0.6014 1.479 0.8667 1-8.
5. Rachel H. Waldemer, Paul G. Tratnyek. Kinetics
5-8 -1.015 1.823 0.9551 of Contaminant Degradation by Permanganate.
Environ. Sci. Technol. 2006, Páginas 1055-106.
Regresión lineal para disoluciones 1-4 y 5-8 se realiza
para actividad de la cefradina y permanganato de potasio 6. A. D. Deshpande, K. G. Baheti, N. R. Chatterjee.
respectivamente, en donde n corresponde al orden de Degradation of β-lactam antibiotics. Current
reacción aparente para cada reactivo. science. 2004. Páginas 1684-1695.
7. Omar MA, Abdelmageed OH, Attia TZ. Kinetic
spectrophotometric determination of certain
cephalosporins in pharmaceutical formulations.
Int J Anal Chem. 2009. Páginas 1-12.
3.26 Abreviaturas y Acrónimo
Defina las abreviaturas y acrónimos la primera vez que
sean utilizadas en el texto. Evite emplear abreviaturas
en el título, salvo que resulte imprescindible.