UNIVERSIDAD AUTÓNOMA DE SAN LUIS POTOSÍ

FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICAS

QUÍMICO FARMACOBIÓLOGO

LABORATORIO DE BIOQUÍMICA I

NOMBRE DE LA PRÁCTICA: EXTRACCION Y PURIFICACION DE UREASA DE SOYA

GRUPO: 02 HORA: 12:00-3:00 EQUIPO: 01

INTEGRANTES:
1- Ana Cristina Sierra Cañizales
2- Danna Mary Rojas Cabrera
3- Daniela Montserrat López Posadas

VALOR DEL
CRITERIO EVALUADO CALIFICACIÓN OBTENIDA (%)
CRITERIO (%)
1 2 3 4
Cálculos previos a la
10
practica
Participación 5
Habilidad en el manejo de
material y equipo de 20
laboratorio
Reporte 25
Discusión y conclusiones
40
de la práctica
TOTAL 100
 1. Cuál es la función del dodecil sulfato de sodio, persulfato de amonio y
el TEMED en la separación de proteínas por electroforesis en gel de
poliacrilamida.
DODECIL SULFATO DE SODIO: Esto nos garantiza una separación
proporcional al peso molecular de la proteína. Como ésta se encuentra
desnaturalizada, la interacción con el polímero de acrilamida será mayor cuanto
mayor sea el peso molecular. Este tratamiento asegura la desnaturalización total
de la proteína por pérdida de su estructura tridimensional.
PERSULFATO DE AMONIO: es una sal de amonio del ácido peroxisulfúrico en
polvo cristalino, similar a la arena, que actúa como agente oxidante fuerte, con
muy buena solubilidad en agua, y se usa como conservador de alimentos.
TEMED: La reacción de polimerización se inicia por un sistema redox de
catálisis. El TEMED cataliza la formación de radicales libres que dirigen la reacción a
partir del ion persulfato que se añade en forma de APS y que actúa como iniciador.
2. ¿Porque el azul de Coomassie tiñe a las proteínas y no al gel? y ¿Qué
sensibilidad presenta este método de tinción?
El fundamento del Azul de Coomassie nos dice que cuando tenemos una cantidad
significativa de proteínas, es posible que al someterlas a un medio ácido se generen
atracciones de tipoVan Der Waals entre las moléculas del tinte Azul de Coomassie
y las proteínas. Esta tinción requiere un medio ácido para la generación de atracción
electrostática entre las moléculas del colorante y los grupos amino de las proteínas,
el azul de Coomassie se une fuertemente a la proteína por una combinación de
atracción electrostática a aminoácidos básicos (histidina, lisina y arginina) e
interacciones hidrofóbicas entre fenilalanina y los grupos fenilo del colorante. El gel
se impregna del colorante, es por eso que después se realiza lavados varias veces
con disolvente libre del colorante y el gel no puede formar la unión que tienen las
proteínas con el colorante, es por eso que se destiñe.
3. Calcular la Movilidad Electroforética Relativa (Rf) para cada una de las
proteínas estándar y complete la siguiente tabla:
Distancia
Peso molecular Log de peso
Número recorrida Rf
(kDa) molecular
(mm)

1 250 2.3979 4 0.074074

2 130 2.1139 9 0.16666

3 95 1.9777 16 0.29630
4 72 1.8573 23 0.42592

5 55 1.7404 27 0.50000

6 36 1.5563 32 0.59259

7 28 1.4472 40 0.74074

8 17 1.2304 51 0.94444

4. Realice una gráfica de Movilidad Electroforética Relativa (Rf) vs Logaritmo

del Peso Molecular del estándar.
5. Utilice la gráfica de Movilidad Electroforética Relativa (Rf) vs Logaritmo del
Peso Molecular para calcular la Rf de la ureasa.

𝑑𝑖𝑠𝑡𝑎𝑛𝑐𝑖𝑎 𝑞𝑢𝑒 𝑟𝑒𝑐𝑜𝑟𝑟𝑒 𝑐𝑎𝑑𝑎 𝑝𝑟𝑜𝑡𝑒í𝑛𝑎 (𝑚𝑚)

𝑅𝑓 =
𝑑𝑖𝑠𝑡𝑎𝑛𝑐𝑖𝑎 𝑞𝑢𝑒 𝑟𝑒𝑐𝑜𝑟𝑟𝑒 𝑒𝑙 𝑓𝑟𝑒𝑛𝑡𝑒 𝑑𝑒 𝑐𝑜𝑟𝑟𝑖𝑑𝑎 (𝑚𝑚)

𝐷𝑖𝑠𝑡𝑎𝑛𝑐𝑖𝑎 𝑞𝑢𝑒 𝑟𝑒𝑐𝑜𝑟𝑟𝑖𝑜 𝑙𝑎 𝑈𝑟𝑒𝑎𝑠𝑎 (𝑚𝑚)

= (𝑅𝑓)(𝐷𝑖𝑠𝑡𝑎𝑛𝑐𝑖𝑎 𝑞𝑢𝑒 𝑟𝑒𝑐𝑜𝑟𝑟𝑒 𝑒𝑙 𝑓𝑟𝑒𝑛𝑡𝑒 𝑑𝑒 𝑐𝑜𝑟𝑟𝑖𝑑𝑎 (𝑚𝑚))
𝐷𝑖𝑠𝑡𝑎𝑛𝑐𝑖𝑎 𝑞𝑢𝑒 𝑟𝑒𝑐𝑜𝑟𝑟𝑖ó 𝑙𝑎 𝑈𝑟𝑒𝑎𝑠𝑎 (𝑚𝑚) = (0.342631)(54 𝑚𝑚) = 18.50 𝑚𝑚